专利名称：藁本提取物在防治柑桔病虫害上的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种植物源农药，更具体地说，本发明涉及一种藁本提取物，同时，本发明还涉及所述的藁本提取物在柑桔杀虫剂和杀菌剂领域中的用途。
背景技术：
柑桔是世界第一大水果和第三大贸易农产品，是我国南方的第一大水果。桔全爪螨(Panonychus citri)是柑桔生产中重要的有害生物，可引起落叶、落花和落果，严重影响柑桔树势和产量。目前桔全爪螨已发展成为柑桔最普遍、最重要而且最难防治的害虫。柑桔果实在贮藏期间因烂果造成的损失每年在20% 30%，严重时可达 50%以上。引起烂果的病害主要有青霉病、绿霉病、黑腐病、焦腐病、炭疽病、褐色蒂腐病、 酸腐病、褐腐病等，主要病原菌有意大利青霉(Penicillium italicum ^fehmer)、指状青霉 (Penicillium digitatum Sacc.)、相結亲连格 包(Alternaria citri Elliset Pierce) ^1 炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides Penz.)、白地霉(Geo trichum candidum Link) 等，其中由意大利青霉和指状青霉分别引起的柑桔青霉病和绿霉病导致柑桔的腐烂最为严重，占烂果的90%以上。目前对柑桔病虫害的防治基本与化学药剂为主，但其连续使用造成了抗虫抗病性不断增强，还导致了严重的农药残留问题，造成巨大的环境污染。因此，从植物中寻找对柑桔病虫害的活性物质以开发新型的植物源药剂成为目前研究领域的一个热点。而且，植物源药剂有着高效低毒，低残留，对环境影响小，不易产生抗性等优点，不仅可以有效地控制植物病虫害，而且能缓解大量化学合成农药带来的环境压力。现在国内外已有一些有关植物源杀虫剂的专利，有些已经可以进行商品化的生产。1985年WR公司在美国注册登记了第一个商品化的印楝制剂Margonsan-Ο后，美国、 加拿大、德国、澳大利亚、印度、泰国、缅甸及中国已开发成功地商品制剂达40余种，已在世界许多国家登记。如美国Thermo Trilogy公司生产的hat in XL Plus 3EC(含3% 印楝素)，1000 3000倍液可用于防治蔬菜上许多难以防治的重要害虫，如烟粉虱、温室白粉虱、小菜蛾、甜菜叶蛾、蚜虫等。还有 Neemix 4. 5 (Superneem)、Trilogy , Triac@90EC、 Azatin 、Align ，德国产的 Neem Azal ,印度产的 Neem GolcUNeemzal、Econeem，澳大利亚产的GreenGold，加拿大产的&ifer@ENI等，主要用于园林、蔬菜、果树、棉花等作物病虫害的防治。我国已有0. 2%,0. 26%,0. 3%,0. 36%苦参碱水剂，2. 5%,7. 5%的鱼藤酮乳油，10% 烟碱乳油，0.65%茴蒿素水剂，0.88%双素碱水剂，0.36%苦参碱.内酯水剂，1. 3%鱼藤氰戊乳油等产品获得农药临时登记。杀菌剂如印株制剂90% Ttifogy Triac乳油可用于防治果树和作物的斑点落叶病、炭疽病、早疫病、晚疫病、叶斑病、霜霉病、白粉病、疮痴病、锈病、 穿孔病；用印株制剂Suimeem作番茄种衣剂可显著减少南方根结线虫的危害；使用0. 5% Neemark制剂可有效控制蘑菇滑刃线虫。孟召礼从银杏中分离出了抑菌活性物质并进行了仿生合成，开发出了农用杀菌剂产品“绿帝”和“银泰”。植物源药剂之间，植物源药剂与化学农药或增效剂之间的二元或三元复配剂大量出现，其加工剂型以乳油、水剂为主，还有可溶性粉剂、悬浮剂、粉剂。虽然植物源药剂的研究开发已取得一定的进展，但是，总体来看，还存有一些问题(1)对植物资源的调查不够详细。我国植物资源丰富，药用植物达8000余种而实际应用的较少。(2)对植物源药剂的开发还相当的弱。现今登记的植物源药剂产品很少、并且品种和类型单一。对具有活性的植物，大多是直接利用，间接利用的少。( 植物活性成分对病虫的作用机理认为清楚，有待进一步的研究(4)植物源农药见效缓慢，成本较高，稳定性低，对其推广受到一定的限制。不过，随着公众对绿色、天然食品的要求越来越高，市场对植物源农药的需求量也逐渐增多，植物源药剂必将有巨大的开发潜力和发展前景。藁本(Ligusticum sinense)又名西芎，系伞形科藁本属植物，其根茎为常用中药材。藁本具有很高的药用价值，主要成分为挥发油类，其苯酞类成分具有镇静抗惊、解痉止痛、平喘的中枢神经调节作用，倍半萜没红药醇酮类成分具有免疫、消炎作用，多氧取代肉桂基类成分具有降酶保肝活性、阿魏酸具有抗血小板聚集、镇静作用。万传星等从藁本中分离到的细辛醚成分对粘虫、小菜蛾、家蝇、棉铃虫和黄粉虫有较好的杀虫活性。华燕青从藁本根茎氯仿萃取相中分离得到细辛醚、佛手柑内酯、阿魏酸和异香草醛4个活性化合物，佛手柑内酯对菜青虫和粘虫有较高拒食和胃毒毒杀活性。到目前为止，关于藁本杀螨和杀卵活性及其杀菌活性的系统研究未见报道，杀螨活性物质的极性分布也没有报道。本发明通过对藁本杀螨活性成分进行初步的分离提取和活性评价，明确藁本含有杀螨(虫)和杀菌活性物质，对桔全爪螨及其卵具有触杀作用，对柑桔病菌有较好的抑制作用。
发明内容
本发明目的是针对现有的植物源杀虫剂和杀菌剂的不足，提供一种藁本提取物。 它以天然的中草药植物为原料，成本低廉，杀螨(虫)杀卵和抑菌的效果显著，毒副作用低， 预示着很好的使用前景。本发明的目的通过以下技术方案予以实现。除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为重量百分数。本发明提供一种藁本提取物，该藁本提取物可由下述方法制备获得以藁本属植物根茎为原料，经过烘干、粉碎、过蹄，加入为原料重量3 30份的30% 95%的乙醇，在 30°C 70°C下超声波提取三次；合并提取液，减压回收乙醇液得到湿浸膏，其回收率13% 为左右，即为所需的藁本提取物。本发明藁本提取物的使用方法与一般的水溶性农药的使用方法相同，只需要加入一定比例的水搅拌使其充分溶解后，均勻喷洒在作物叶面或者浸渍果实即可。有益效果1.藁本提取物对柑桔全爪螨雌成螨和卵的触杀作用，实验的情况详述如下实验材料①验证药物本发明的提取物，②供试螨桔全爪螨采自中国农业科学院柑桔研究所(重庆北碚)的柑桔园。实验方法1 取直径为9cm的培养皿依次铺上0. 7cm厚的海绵、滤纸，直径逐渐减小，加水至滤纸，制成水隔离台。摘取新鲜柑桔叶片，洗净，剪成平整片段，叶面向下置于隔离台上，用零号毛笔挑取健康活泼的雌成螨，每片叶30头，待螨体稳定后，剔除死亡和受伤个体，将带螨叶片在稀释成系列浓度的药液中浸渍^后取出，吸去多余药液。处理时先用清水作对照，每一浓度重复3次，水隔离台置于温度(25°C 士 1)，RH 85%，光照LD = 16:8 的生化培养箱中，24h后用双目镜检查死亡及存活个体。用毛笔轻触螨体，以螨足不动者为死亡。对所得数据利用Abbott公式校正死亡率=处理死亡率-对照死亡率/ (1-对照死亡率)X 100进行校正。用IRM(害虫抗药性检测管理)软件计算毒力回归方程、致死中浓度(LC5tl)、LC5。值的置信限等。实验方法2 参考 IRAcansectic ide Resistance Comm ittee2000)方法，任其产卵12h，移去成螨，将带卵叶片在稀释成系列浓度的药液中浸渍^后取出，吸去多余药液。 处理时先用清水作对照，每一浓度重复3次，水隔离台置于温度(25°C 士 1)，RH 85%左右的生化培养箱中，每24h观察卵孵化情况，观察7d，当对照卵全部孵化时，处理卵仍没有孵化的作为判断死亡的标准，计算死亡率，并用Abbott公式校正，用IRM(害虫抗药性检测管理) 软件计算毒力回归方程、致死中浓度(LC50)、LC50值的置信限等。实验结果以藁本乙醇提取物对桔全爪螨成螨的触杀活性最强，LC50 = 0. OOOlmg mL—1，对桔全爪螨成螨产卵抑制作用也最好，抑制率达到47. 15%所需浓度是0. ieSmgmL-1 ；丙酮提取物对桔全爪螨卵的触杀活性最强，LC5tl = 0. 204mg mL—1。进一步将藁本乙醇提取物萃取分离获得组分Gl和G2，并测定它们的杀螨活性，发现组分Gl、G2均具有杀螨杀卵活性，组分G2 还具有较好的杀卵活性(LC50 = 0. OOMmg mL-1)和产卵抑制作用(72. 13% )0采用藁本提取物对桔全爪螨雌成螨及其卵进行毒力测定，结果见表1。藁本乙醇提取物对桔全爪螨雌成螨的触杀毒力较高，LC50为0. OOHmg-mL-1 ；藁本的乙醇提取物对桔全爪螨卵的触杀毒力也较强，LC50为0. 204mg · mL—1。 表1藁本提取物对桔全爪螨雌成螨和卵的毒力
提取物虫态毒力回归方程相关系数致死中浓度及置信区间卡方检验值
乙醇雌成螨 6.5381+ 1.7917X 0.9766 0.0014 土 0.00021.8066
卵3.258+ 0.653x 0.9715 0.4651 ± 0.0016 0.95252.藁本提取物对桔全爪螨雌成螨生殖力测定实验方法采用叶片涂布法，从田间柑桔树上采取未曾施过药的叶片，洗净晾干。 叶背朝上放置在垫一层湿海绵的培养皿中，区域两侧用湿棉花覆盖，使叶片紧贴棉花。叶片上涂布药液后接入大小一致的30头雌成螨，统计24h的产卵量，计算活螨平均产卵量，产卵抑制指数和产卵抑制率。产卵抑制指数=(对照产卵数-处理产卵数)/(对照产卵数+处理产卵数)产卵抑制率(％ )=(对照产卵数-处理产卵数)/对照产卵数X 100。实验结果结果如表2所示。藁本提取物对对桔全爪螨成螨产卵的抑制效果也是比较显著的。表2藁本平行提取物对桔全爪螨产卵的抑制作用
5提取溶剂浓度 20头虫产卵数抑制指数抑制率(%) ZM 0.165 Ζ8 0.3136 47.75 0.0825 16.34 0.1718 29.33 0.04125 19.46 0.0859 15.83 _0. 02063_22.24_0.0194_3.813.藁本提取物对柑桔病原菌的抑制作用实验材料菌种柑桔炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、柑桔绿霉菌 (Penicillium digitatum)由中国农科院柑桔研究所综合防治课题提供。实验方法病原菌毒力测定(生长速率法)在9mL PDA培养基中加入ImL 50mg/mL独活提取物，混勻，制成质量浓度为5mg/mL 的含药培养基平板，将各病原菌菌饼(直径为6mm)分别接于平板中央，每皿接1个菌饼，每处理3次重复，同时设清水对照。培养72h，采用十字交叉法测定菌落直径，按照下列公式计算抑制效率。菌落直径(mm)=平均菌丝直径(mm) -0. 6 (mm)
相对抑制率(％) =^zilxioo,
IlIC是空白对照上的菌落直径(mm)，Il是处理中的菌落直径(mm)。实验结果试验结果表明，藁本乙醇提取物对柑桔炭疽、绿霉病病原菌都具有不同程度的抑制活性，其中当其浓度在3. 5mg/mL时，对绿霉病原菌抑制率达到93. 8% (3d)和 85.4% (5d)，对炭疽病原菌抑制率达到98. 2% (3d)和91. 71% (5d)。表3藁本乙醇提取物对病原菌的毒力
权利要求
1.一种藁本提取物，该藁本提取物可由下述方法制备获得以藁本属植物根茎为原料，经过烘干、粉碎、过筛，加入为原料重量3份 30份的30% 95%的乙醇，在30°C 70°C下超声波提取三次；合并提取液，减压回收乙醇液得到湿浸膏，其回收率15%为左右， 即为所需的藁本提取物。
2.根据权利要求1所述的藁本提取物，其中所述的原料为藁本属植物的根茎，所述加入乙醇的重量为所述原料重量的10份。
3.根据权利要求1所述的方法，加入原料加入乙醇后，在60°C下超声波提取三次。
4.藁本提取物在制备防治柑桔病虫害的药剂中使用。
5.藁本提取物在防治桔全爪螨和其它病虫害的药剂中使用。
全文摘要
本发明涉及了一种藁本提取物及其在防治柑桔病虫害上的运用。该藁本提取物可由下述方法制备获得以藁本属植物根茎为原料，经过烘干、粉碎、过筛，加入为原料重量3份～30份的30％～95％的乙醇，在30℃～70℃下超声波提取三次；合并提取液，减压回收乙醇液得到湿浸膏，其回收率13％为左右，即为所需的藁本提取物。经室内毒力测定实验表明，所述的提取物具有防治柑桔病虫害作用，药效明显，针对性强，预示着很好的药用前景。
文档编号A23B7/154GK102485001SQ20101057540
公开日2012年6月6日 申请日期2010年12月6日 优先权日2010年12月6日
发明者胡军华 申请人:姚廷山, 李鸿筠, 胡军华