专利名称：油桐油酸脱氢酶基因突变体SNP<sup>997</sup>及其获得方法
技术领域：
本发明涉及生物工程技术领域中的基因突变体，尤其涉及一种油桐油酸脱氢酶基 因突变体SNP997及其获得方法。
背景技术：
脂肪酸脱氢酶基因(fad2)是控制油酸向亚油酸转化的关键基因，且关系到多不 饱和脂肪酸的合成；而亚油酸是桐酸合成的底物。因而fad2基因的功能突变不仅会改变桐 油中脂肪酸组分含量，而且会影响桐油的品质。目前通过人工诱发fad2基因的突变，抑制 fad2基因的表达，获得了高含量油酸的葵花籽油、大豆油等，而且在油菜中，不仅获得了高 油酸突变体品种，且利用转基因获得了特高油酸转基因油菜株系。但是对于油桐中fad2基 因的突变，目前国内外尚未见报道。油桐是我国原产的多年生木本油料树种，其种子榨出的桐油不仅是重要的工业原 料也是重要的生物柴油原料。因而利用遗传资源多样性结合生物技术途径，对于油桐进行 脂肪酸组成的全方位改良和培育含特种脂肪酸的油桐品种，提升桐油品质及经济价值具有 重要科学与现实意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种油桐油酸脱氢酶基因突变体SNP997及其获得方法。本发明的目的是这样实现的1、油桐油酸脱氢酶基因突变体SNP997油桐油酸脱氢酶基因突变体SNP997是SEQ ID NO :1所示的核苷酸序列中第997位 碱基发生A —T杂合突变，导致SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列中第333位氨基酸由苏氨 酸(T)转变为苏氨酸(S)02、油桐油酸脱氢酶基因突变体SNP997的获得方法(1)来源于油桐种质材料PT136或PT167，见表1。表1突变体材料具体地理位置
权利要求
1.一种油桐油酸脱氢酶基因fad2突变体SNP997，其特征在于油桐油酸脱氢酶基因突变体SNP997是SEQ ID NO :1所示的核苷酸序列中第997位碱基 发生A —T杂合突变，导致SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列中第333位氨基酸由苏氨酸T 转变为丝苏氨酸S。
2.根据权利要求1所述突变体SNP997的获得方法，其特征在于(1)来源于油桐种质材料PT136或PT167；PT136，来源地是中国湖北来凤县漫水乡桶子村沙子坝组，纬度、经度、海拔分别为 29° 20. 40，N、109° 18. 00，E、470m ；PT167，来源地是中国湖北广水市吴店乡姜溪村黑沟，纬度、经度、海拔分别为 31° 58·80，Ν、113° 42. 60，Ε、174m ；(2)检测步骤①提取突变体材料叶片DNA；②fad2基因编码区的PCR扩增；③DNA测序分析。
3.按权利要求2所述的获得方法，其特征在于检测步骤①采用改良的CTAB法。
4.按权利要求2所述的获得方法，其特征在于检测步骤②模板 DNA，20ng/y L，5y L ；弓 | 物，10 μ M，各 1 μ L ； 10 X buffer, Mg2+Plus, 2. 5 μ L ；Taq 酶，5U/y L，0. 2μ L ； dNTP, 10mM,0. 5μ L ； ddH20 15. 3μ L ；总体积 25 μ L ；PCR 反应程序为 94°C预变性5min ；94°C变性45s ；67°C退火45s ；72°C延伸Imin ；30个循环；最后72°C延伸 5min ；扩增产物在1. 5%的琼脂糖凝胶电泳中检测。
5.按权利要求2所述的检测方法，其特征在于检测步骤③利用软件Bioedit和clustalx对测序结果进行校正与比对，通过软件Sequencher识 别 SNP。
全文摘要
本发明公开了一种油桐油酸脱氢酶基因突变体SNP997及其获得方法，涉及生物工程技术领域中的基因突变体。油桐油酸脱氢酶基因突变体SNP997是SEQ ID NO1所示的核苷酸序列中第997位碱基发生A→T杂合突变，导致SEQ ID NO2所示的氨基酸序列中第333位氨基酸由苏氨酸(T)转变为丝苏氨酸(S)。其获得方法是(1)来源于油桐种质材料PT136或PT169；(2)检测步骤①提取突变体材料叶片DNA；②fad2基因编码区的PCR扩增；③DNA测序分析。该基因突变体及相应的种质材料，对于提高桐酸的含量、调整桐油脂肪酸组分、改良桐油的品质等具有重要作用。
文档编号C12Q1/68GK102093985SQ201010579060
公开日2011年6月15日 申请日期2010年12月8日 优先权日2010年12月8日
发明者任景, 彭俊华 申请人:中国科学院武汉植物园