专利名称：一种发酵生产恩拉霉素的方法
技术领域：
本发明涉及发酵技术领域，具体为一种发酵生产恩拉霉素的方法。
背景技术：
恩拉霉素(Enramycin)，又名恩来霉素、恩素、安来霉素、持久霉素，它是一种环状多肽类抗生素，由13个不同种类的17个氨基酸分子和脂肪酸分子组成，氨基酸组成环状多肽，脂肪酸分子连在末端的天冬氨酸上，根据末端脂肪酸分子的不同分为恩拉霉素A和恩拉霉素B，恩拉霉素是这两种组分的混合物，是由土壤中分离出来的放线菌(Streptomyces fungieidious)发酵产的一种多肤类抗生素。恩拉霉素对革兰氏阳性菌有很强的抑制作用， 主要阻碍细菌细胞壁的合成。其敏感细菌有金黄色葡萄球菌等各种革兰氏阳性球菌、枯草杆菌、炭疽杆菌、破伤风梭菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭菌等。长期使用恩拉霉素药物不易产生抗药性，且它能改变肠道内细菌的群落分布，有利于饲料营养成份的消化吸收，能够促进动物体重增加和提高饲料的利用率，因此世界上许多国家推荐此药物作为畜禽的抗生素和促生长剂。恩拉霉素的另一个特点是不易被吸收，因此畜禽体内残留较少。具有优良的促生长和改善饲料利用率的作用，因此被世界上许多国家推荐作为抗生素促生长剂。该药于1966 年由日武田药品工业株式会社研发，1974年在日本正式注册，其后在许多国家被注册和广泛使用。1993年我国农业部批准该药在我国注册。2005年，国内生产企业与美国先灵葆雅动物保健品有限公司(Schering Plough Animal Health Corp.)开始合作生产恩拉霉素预混剂。恩拉霉素发酵菌体对氧的需求量较高，当菌体浓度过高造成发酵过程氧供应不足，影响产量。如果菌体浓度过低，产恩拉霉素速度较慢，发酵周期过长，菌体老化，同样达不到理想的效果。所以改善发酵液的溶氧是解决以上矛盾，提高发酵水平的有效途径。
发明内容
本发明的目的在于提供一种发酵生产恩拉霉素的方法，用以解决现有发酵生产恩拉霉素的发酵液中溶氧不足的问题。为实现上述目的，本发明一种发酵生产恩拉霉素的方法，发酵菌株在发酵培养基中恒温培养的发酵过程中，往发酵液中补水，改善发酵液中的溶氧量，提高恩拉霉素的发酵水平。所述发酵的菌株为杀真菌素链霉菌(Sti^ptomyces fungieidious) CGMCC 4. 1312τ。所述发酵培养基包括如下组分玉米粉100g/L，玉米浆10g/L，硫酸铵3g/L，硫酸锌 0. lg/L，碳酸钙 20g/L。其中，所述的发酵温度为28°C，转速为250 350r/min。所述往发酵液中补水时间为发酵进入快速发酵期，优选发酵到40 96小时期间， 更优选40 72小时期间，最优选72小时。
所述往发酵液中补水的补水量优选为发酵液体积的5% 20%，更优选为5% 10%，最优选10%。本发明的优点本发明提供一种发酵生产恩拉霉素的方法，在发酵到一定时间，通过向发酵液中补水改善溶氧，能够显著提高恩拉霉素发酵水平。本发明简单易行，在发酵培养过程中经适时适量补水后，恩拉霉素发酵水平的提高可达约130%。
具体实施例方式为以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例1 1)斜面培养杀真菌素链霉菌(Sti^ptomycesfungicidious) CGMCC 4. 1312τ (购自中科院微生物所)在无菌条件下接种于固体斜面培养基上，28°C恒温培养8天；其中，所述固体斜面培养基包括如下组分玉米粉20g/L，蛋白胨lg/L，ZnSO4. 7H20 0. lg/L, MnCl2. 4H20 0. 02g/L，琼月旨 15g/L。2)发酵培养将步骤1)培养的菌种无菌条件下接种到发酵瓶中的发酵培养基上，28°C，300r/ min，发酵至40小时，向发酵液中补水，补水量为发酵液体积的5%，发酵天数为8天，平均发酵水平为850U/ml ；其中，所述发酵培养基包括如下组分玉米粉100g/L，玉米浆10g/L，硫酸铵3g/L， 硫酸锌0. lg/L，碳酸钙20g/L。实施例2:1)斜面培养杀真菌素链霉菌(Sti^ptomycesfungicidious CGMCC 4. 1312τ)在无菌条件下接种于固体斜面培养基上，28°C恒温培养8天；其中，所述固体斜面培养基包括如下组分玉米粉20g/L，蛋白胨lg/L，ZnSO4. 7H20 0. lg/L, MnCl2. 4H20 0. 02g/L，琼月旨 15g/L。2)发酵培养将步骤1)培养的菌种无菌条件下接种到发酵瓶中的发酵培养基上，28°C，300r/ min,发酵至72小时，向发酵液中补水，补水量为发酵液体积的10%，发酵天数为8天，平均发酵水平1210U/ml ；其中，所述发酵培养基包括如下组分玉米粉100g/L，玉米浆10g/L，硫酸铵3g/L， 硫酸锌0. lg/L，碳酸钙20g/L。实施例3 1)斜面培养杀真菌素链霉菌(Sti^ptomycesfungicidious CGMCC 4. 1312τ)在无菌条件下接种于固体斜面培养基上，28°C恒温培养8天；其中，所述固体斜面培养基包括如下组分玉米粉20g/L，蛋白胨lg/L，ZnSO4. 7H20 0. lg/L, MnCl2. 4H20 0. 02g/L，琼月旨 15g/L。
2)发酵培养将步骤1)培养的菌种无菌条件下接种到发酵瓶中的发酵培养基上，28°C，300r/ min,发酵至96小时，向发酵液中补水，补水量为发酵液体积的20%，发酵天数为8天，平均发酵水平960U/ml ；其中，所述发酵培养基包括如下组分玉米粉100g/L，玉米浆10g/L，硫酸铵3g/L， 硫酸锌0. lg/L，碳酸钙20g/L。比较例1)斜面培养杀真菌素链霉菌(Sti^ptomycesfungicidious CGMCC 4. 1312τ)在无菌条件下接种于固体斜面培养基上，28°C恒温培养8天；其中，所述固体斜面培养基包括如下组分玉米粉20g/L，蛋白胨lg/L，ZnSO4. 7H20 0. lg/L, MnCl2. 4H20 0. 02g/L，琼月旨 15g/L。2)发酵培养将步骤1)培养的菌种无菌条件下接种到发酵瓶中的发酵培养基上，28°C，300r/ min，进行发酵。发酵天数为8天；平均发酵水平530U/ml ； 其中，所述发酵培养基包括如下组分玉米粉100g/L，玉米浆10g/L，硫酸铵3g/L， 硫酸锌0. lg/L，碳酸钙20g/L。 以上实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
权利要求
1.一种发酵生产恩拉霉素的方法，其特征在于，发酵菌株在发酵培养基中恒温培养的发酵过程中往发酵液中补水，改善发酵液中的溶氧量，提高恩拉霉素的发酵水平。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的发酵温度为28°C，转速为250 350r/mino
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述补水时间为发酵40 96小时。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述补水时间为发酵40 72小时。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，往发酵液中补水的量为发酵液体积的 5% 20%。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，往发酵液中补水的量为发酵液体积的 5% 10%。
7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，用于发酵生产恩拉霉素的菌株为真菌素链霉菌(Streptomycesfungicidious) CGMCC 4. 1312τ。
8.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基包括下述组分玉米粉100g/L，玉米浆10g/L，硫酸铵3g/L，硫酸锌0. lg/L，碳酸钙20g/L。
全文摘要
本发明公开了一种发酵生产恩拉霉素的方法。该方法以杀真菌素链霉菌为发酵菌株，在发酵培养基中恒温培养的发酵过程中，往发酵液中补水，改善发酵液的溶氧量，提高恩拉霉素发酵水平。本发明简单易行，在发酵培养过程中经适时适量补水后，恩拉霉素发酵水平的提高可达约130％。
文档编号C12P21/04GK102174624SQ20101062407
公开日2011年9月7日 申请日期2010年12月31日 优先权日2010年12月31日
发明者付松, 尚海涛, 崔刚, 李荣杰 申请人:安徽丰原发酵技术工程研究有限公司