专利名称：包含具有改变的性质的α-淀粉酶变体的组合物和方法
技术领域：
本发明描述了涉及变体α -淀粉酶的组合物和方法，相对于对照α -淀粉酶，该变体α-淀粉酶具有改变的生化性质和有利的性能特性。该变体适用于多种工业应用，例如淀粉转化；乙醇生产；衣物、餐具洗涤；纸浆和纸生产；纺织品退浆和/或甜味剂生产。
背景技术：
淀粉是直链淀粉(15-30% w/w)和支链淀粉(70-85% w/w)的混合物。直链淀粉由α -1，4连接的葡萄糖单位的线性链组成，具有从约60，000至约800，000的分子量(MW)。 支链淀粉是分支多聚体，其每对-30个葡萄糖单位含有α_1，6分支点。其分子量可以高达 1亿。目前是通过酶催化方法从淀粉产生浓缩的葡萄糖糖浆形式的糖，该催化方法包括(1)用α-淀粉酶将固体淀粉液化(或薄化)为约7-10平均聚合度的糊精，和(2)用淀粉葡糖苷酶(也称为葡糖淀粉酶或GA)对产生的液化淀粉(即，淀粉水解物)的糖化作用。产生的糖浆具有高的葡萄糖含量。商业生产的大部分葡萄糖糖浆随后被酶促异构化为葡萄糖/果糖混合物，称为异构糖浆(isosyrup)。α-淀粉酶(α-1，4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶，Ε. C. 3.2. 1. 1)是通过随机切割内在的α-1，4-糖苷键水解淀粉、糖原和有关的多糖的一类酶。这类酶具有多种重要的商业应用，例如在淀粉加工的初始阶段(液化)中、在纺织品的退浆中、在再生纸的脱墨中、在纸和纸浆工业中的淀粉修饰、在湿酿酒糟(wet corn milling)中、在乙醇生产中、在甜味剂 (例如糖)生产中、在饮料工业中、在酿造业中、在油田、在动物饲料和在去污剂基质中作为清洁剂。例如，这类酶可以在餐具和洗衣过程中用于去除淀粉污渍。α-淀粉酶分离自多种细菌、真菌、植物和动物来源。工业上，许多重要的α-淀粉酶分离自芽孢杆菌(Bacilli)。一种表征的α -淀粉酶是嗜碱性芽孢杆菌物种(Bacillus sp.)TS_23菌株的α-淀粉酶，该菌株产生至少五类呈现淀粉水解活性的酶。(Lin等人， Biotechnol. Appl. Biochem. 28 :61-68,1998)。虽然其在宽范围 pH 内(即，pH4. 7 至 10. 8) 稳定，芽孢杆菌物种TS-23菌株的α-淀粉酶的最适宜pH为9。虽然该酶在较低温度例如 15-20°C也有活性，但是其最适宜温度为45°C。还是需要变体淀粉酶(如α -淀粉酶)，该变体具有改变的生化特征，并且在工业应用中提供改善的性能。发明概述本发明描述了涉及变体α -淀粉酶的组合物和方法，相对于对照α -淀粉酶，该变体α-淀粉酶具有改变的生化性质和有利的性能特性。该变体适用于多种工业应用，例如淀粉转化；乙醇生产；衣物、餐具洗涤；纸浆和纸生产；纺织品退浆和/或甜味剂生产。在一个方面，提供了分离的α -淀粉酶变体，其中变体是具有淀粉酶活性的α -淀粉酶的成熟形式，并且在选自 1、2、3、4、5、7、15、16、17、18、19、22、25、洸，28，四，30，32，35， 36，37，50，51，52，53，54，55，56，59，60，70，71，72，73，75，78，83，87，90，91，93，94，95，104， 105，107，108，110，112，113，116，118，125，126，128，129，130，131，134，136，138，142，144， 147，149，150，152，154，156，158，160，161，162，165，166，168，169，170，172，174，177，178， 182，183，185，189，192，195，197，201，202，203，207，210，214，217，221，228，234，236，237， 246，250，254，255，257，264，267，269，270，272，275，279，283，284，298，301，303，305，306， 310，311，314，318，319，320，322，323，336，337，338，339，340，344，359，374，375，376，377， 379，381，382，393，394，399，401，407，408，419，433，436，438，444，447，448、451、453、459、465、470、475、476、483 和 484 的一个或多个位置上包含取代； 其中该位置对应于SEQ ID NO :2所示氨基酸序列中的氨基酸残基；并且其中不同的氨基酸残基对一个或多个位置上的天然氨基酸残基的取代产生了具有稳定性测量的性能指数> 1. 0，活性测量的性能指数> 1. 0的α -淀粉酶变体。在一些实施方案中，α -淀粉酶变体在选自7、四、35、53、60、72、87、108、116、126、 128、129、130、131、134、136、138、142、156、161、165、178、182、185、189、192、195、197、202、 210、214、217、221、234、246、269、303、310、337、340、374、401 和 438 的一个或多个位置上包
含取代，并且其中天然氨基酸残基取代为不同的氨基酸残基产生了具有活性测量的性能指数> 1. 5和稳定性测量的性能指数> 1. 0的α -淀粉酶变体。在一些实施方案中，0-淀粉酶变体在选自2、7、22、25、28、30、37、70、75、83、87、 91、93、108、128、160、165、178、182、183、217、269、270、279、283、298、305、306、310、320、 374、375、376、407、419、475和476的一个或多个位置上包含取代，其中天然氨基酸残基取代为不同的氨基酸残基产生了具有稳定性测量的性能指数> 1. 5和活性测量的性能指数 > 1. 0的α -淀粉酶变体。在一些实施方案中，α-淀粉酶变体在选自83、125、128、131、160、178、182、183、 185、189、279、305、319、320、379、407、433、453、475、476 和 483 的一个或多个位置上包含取代。在相关方面，提供了分离的α-淀粉酶，其在选自83、125、128、131、160、178、182、 183、185、189、279、305、319、320、379、407、433、453、475、476 和 483 的一个或多个位置上包
含取代，其中该位置对应于SEQ ID NO :2所示氨基酸序列中的氨基酸残基，并且其中该取代提供了选自改善的清洁性能、改善的去污剂稳定性、改善的热稳定性和改善的蛋白质表达中的至少一中有益效果。在另一相关方面，提供了分离的α-淀粉酶变体，其中该变体是具有淀粉酶活性的 α -淀粉酶的成熟形式，且其在选自 5、32、83、95、154、214、221、228、322、401、407、419、 444、447、459、470、483和484的一个或多个位置上包含取代；其中该位置对应于SEQ IDNO 2所示氨基酸序列中的氨基酸残基；并且其中天然氨基酸残基取代为不同的氨基酸残基产生了这样的α-淀粉酶变体，该变体在ρΗ8下的活性、pHIO下的活性、16°C下的活性、32°C下的活性的性能指数值为0. 5或更高，在去污剂中的稳定性或热稳定性的性能指数值为0. 5 或更高。
在一些实施方案中，不同氨基酸残基选自:A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M.N、P、Q、R、
S、Τ、V、W和Y，条件是该不同氨基酸残基与天然出现的氨基酸残基不同。在一些实施方案中，α -淀粉酶变体进一步包含在对应于SEQ IDNO 2所示氨基酸序列的243位上的取代。在一些实施方案中，任意前述α -淀粉酶变体进一步包含在对应于SEQ ID NO 2所示氨基酸序列的180和/或181位上的缺失。在一些实施方案中，α -淀粉酶变体衍生自亲本α -淀粉酶，其具有与选自SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ IDNO :7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO 10、SEQ IDNO 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO :13 禾口 SEQ ID NO 14 的氨基酸序列至少 75%
相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，α-淀粉酶变体具有与SEQ ID NO :2所示氨基酸序列至少 75%的序列同一性。在一些实施方案中，α -淀粉酶变体具有与SEQ ID NO :2所示氨基酸序列至少80%的序列同一性。在一些实施方案中，α -淀粉酶变体具有与SEQ ID NO 2所示氨基酸序列至少90%的序列同一性。在一些实施方案中，α-淀粉酶变体在选自对应于SEQ ID NO :2所示氨基酸序列的128、178、182、185和189的一个或多个位置上包含取代，其中该取代提供了改善的清洁性能或改善的去污剂稳定性。在一些实施方案中，α -淀粉酶变体包含(a)在125位的丙氨酸，在128位的半胱氨酸，在131位的异亮氨酸，在165位的异亮氨酸，在178位的亮氨酸，在182位的甘氨酸，在202位的酪氨酸，在305位的精氨酸，在319位的苏氨酸，或在475位的精氨酸；(b)取代 m^C+Kl78L+Tl82G+TO05R+G475K，禾口选自S125A、T131I、T165I、F202Y和D319T的至少一种其他的取代；或(c)取代N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K,S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K,或S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K ；其中该变体任选的还包括在243位上的取代和/或180位和/或181位上的缺失； 和其中该位置对应于SEQ ID NO 2所示氨基酸序列。在一些实施方案中，α -淀粉酶变体包含在位置475的取代。在一些实施方案中， α -淀粉酶变体包含在位置475的精氨酸。在一些实施方案中，α -淀粉酶变体还包含在位置Μ3的取代和/或在位置180和/或位置181的缺失。
在另一方面，提供了分离的α-淀粉酶的变体，其中，该变体是具有淀粉酶活性的成熟形式，且在选自 1、2、3、4、5、7、15、16、17、18、19、22、25、26、28、29、30、32，35，36，37，50， 51，52，53，54，55，56，57，59，60，70，71，72，73，75，78，82，83，87，90，91，93，94，95，103，104， 105，107，108，110，112，113，114，115，116，118，121，123，125，126，127，128，129，130，131， 132，134，135，136，138，140，142，144，147，149，150，152，154，156，158，159，160，161，162， 164，165，166，167，168，169，170，171，172，174，175，176，177，178，179，182，183，185，186， 188，189，190，191，192，193，195，197，199，200，201，202，203，207，210，214，217，221，228， 234，237，238，239，240，246，250，254，255，257，264，266，267，268，269，270，272，273，275， 279，283，284，298，301，303，305，306，310，311，314，318，319，320，322，323，336，337，338， 339，340，344，359，374，375，376，377，379，381，382，393，394，399，401，407，408、419、433、436、438、444、447、448、451、453、459、465、479、475、483 和 484 的一个或多个位置包括取代；其中该位置对应于SEQ ID NO :2所示的对照α-淀粉酶氨基酸序列编号。在一些实施方案中，在一个或多个位置的取代是在1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个位置的取代。在一些实施方案中，α -淀粉酶变体衍生自亲本α -淀粉酶，其选自组BASE、ACE、 ACE-Q和ACE-QK。在一些实施方案中，α -淀粉酶变体衍生自亲本α-淀粉酶，其具有与由 SEQ ID NO :2、SEQ IDNO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO 10,SEQ ID NO =IUSEQ ID NO 12,SEQ ID N0:13 禾口 SEQ ID NO :14 所组成的组的成员至少是75 %相同的氨基酸序列。在另一方面，提供了编码α -淀粉酶变体的分离核酸。在相关方面，提供了包括与启动子有效组合的分离核酸的表达载体。在另一方面，提供了包括表达载体的宿主细胞。在另一方面，提供了包括α-淀粉酶变体的清洁组合物。在一些实施方案中，清洁组合物进一步包括至少一种选自蛋白酶、脂肪酶、角质酶(cutinase)、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯聚糖酶(arabinase)、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶、过水解酶 (perhydrolase)、果胶酸裂合酶和过氧化物酶的其他酶。在一些实施方案中，至少一种其他酶是蛋白酶。在一些实施方案中，至少一种其他酶是枯草杆菌蛋白酶。在一些实施方案中， 至少一种其他酶是枯草杆菌蛋白酶BPN ‘或其变体。在具体实施方案中，该至少一种其他酶是枯草杆菌蛋白酶BPN' Y217L或其变体。在另一方面，提供了清洁织物或硬表面的方法，其包括将织物或硬表面与该清洁组合物接触。在一些实施方案中，清洁组合物还包括至少一种表面活性剂。在一些实施方案中，清洁组合物进一步包括至少一种选自蛋白酶、脂肪酶、角质酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯聚糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶、过水解酶、果胶酸裂合酶和过氧化物酶的其他酶。在一些实施方案中，至少一种其他酶是蛋白酶。在一些实施方案中， 至少一种其他酶是枯草杆菌蛋白酶。在一些实施方案中，至少一种其他酶是BPN' Y217L枯草杆菌蛋白酶。在具体实施方案中，α -淀粉酶变体包含取代N128C+K178L+T182G+F202Y+S243Q+Y305R+D319T+G475K ；S125A+N128C+K178L+T182G+S243Q+Y305R+G475K ；或S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+S243Q+Y305R+G475Ko
在一些相关的实施方案中，本公开提供分离的α-淀粉酶变体，其中该变体是具有淀粉酶活性的成熟形式，并且在选自1、2、3、4、5、7、15、16、17、18、19、22、25、26、沘、29、 30、32、35、36、37，50，51，52，53，54，55，56，57，59，60，70，71，72，73，75，78，82，83，87，90， 91，93，94，95，103，104，105，107，108，110，112，113，114，115，116，118，121，123，125，126， 127，128，129，130，131，132，134，135，136，138，140，142，144，147，149，150，152，154，156， 158，159，160，161，162，164，165，166，167，168，169，170，171，172，174，175，176，177，178， 179，182，183，185，186，188，189，190，191，192，193，195，197，199，200，201，202，203，207， 210，214，217，221，228，234，237，238，239，240，243，246，250，254，255，257，264，266，267， 268，269，270，272，273，275，279，283，284，298，301，303，305，306，310，311，314，318，319， 320，322，323，336，337，338，339，340，344，359，374，375，376，377，379，381，382，393，394， 399,401,407,408、419、433、436、438、444、447、448、451、453、459、465、479、475、483 和 484 的一个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个)位置上包含取代；并且其中该位置对应于SEQ IDNO :2所示的对照α-淀粉酶氨基酸序列编号。在一个实施方案中，α-淀粉酶变体衍生自选自BASE、ACE、ACE-Q和ACE-QK的亲本α-淀粉酶。在另一实施方案中， α-淀粉酶变体衍生自这样的亲本α-淀粉酶，该亲本α-淀粉酶具有与由SEQ ID NO :2、 SEQ ID NO 5, SEQID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO =IUSEQ ID NO :12, SEQ ID NO :13 禾口 SEQ ID NO :14 组成的组的成员至少 75% (优选 80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99% )相同的氨基酸序列。在优选的实施方案中，该位置选自1>2,3,4,5,7,16,17,18,19, 22, 25, 26, 28, 29, 30, 32，35，36，37，57，60，70，71，72，73，75，78，82，83，87，90，91，93，94，95，103，104，105，108， 112，114，115，116，118，121，123，125，126，128，129，130，131，132，134，135，136，138，140， 142，144，147，149，150，152，154，156，158，159，160，161，162，164，165，166，167，168，169， 171，172，174，175，176，177，178，179，182，183，185，186，189，190，191，192，193，195，197， 199，202，207，214，217，221，228，234，237，238，243，246，250，254，255，257，264，266，267， 268，269，270，272，273，275，279，283，284，298，301，303，305，306，310，311，318，319，320， 322，323，336，337，338，339，340，344，359，374，375，376，377，379，381，382，393，394，399， 401，407，408，419，433，436，438，447，451，453，459，465，479、475和483，并且其中该位置对应于SEQ ID NO 2所示的对照α -淀粉酶氨基酸序列编号。在另一实施方案中，该位置选自:1、2、3、4、5、7、16、17、18、19，22，25，洸，28， 29，30，32，35，36，37，57，60，70，71，72，73，75，78，82，83，90，91，93，94，95，103，104，105， 108，112，114，115，116，118，121，123，125，126，128，129，130，131，132，134，135，136，138， 140，142，144，147，149，150，152，154，156，158，159，160，161，162，164，165，166，167，168， 169，171，172，174，175，176，177，178，179，185，186，189，190，191，192，193，195，197，199， 202，207，214，217，221，228，234，237，238，246，250，254，255，257，264，266，267，268，269， 270，273，275，279，283，284，298，301，303，305，306，310，311，318，319，322，323，336，337， 338，339，340，344，374，375，376，377，379，381，382，393，394，399，401，407，408，419、433、436、438、447、451、453、459、465、479、475 和 483，并且其中该位置对应于SEQ ID NO :2所示的对照α-淀粉酶氨基酸序列编号。在优选的实施方案中，α -淀粉酶变体包含58位的酪氨酸和236位的丙氨酸，且其中该位置对应于SEQ ID NO 2所示的对照α-淀粉酶氨基酸序列编号。在另一实施方案中，α-淀粉酶变体包含243位的谷氨酰胺和475位的赖氨酸，且其中该位置对应于SEQ IDNO :2所示的对照α -淀粉酶氨基酸序列编号。本公开还提供分离的α-淀粉酶变体，其中该变体是具有淀粉酶活性的成熟形式，并且在选自 182、183、305、320、379、407、419 和 475 的一至八个(例如，1、2、3、4、5、6、 7或8个)位置上包含取代；并且其中该位置对应于SEQ ID Ν0:2所示的对照α-淀粉酶氨基酸序列编号。在另一实施方案中，α-淀粉酶变体衍生自选自BASE、ACE、ACE-Q和 ACE-QK的亲本α-淀粉酶。在另一实施方案中，α-淀粉酶变体衍生自这样的亲本α-淀粉酶，该亲本 α -淀粉酶具有与由 SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 7、SEQID NO 8, SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO =IUSEQ IDNO : 12、SEQ ID NO :13 和SEQ ID NO :14组成的组的任一成员至少75% (优选80%、85%、90%、91 %、92%、93%、 94 %、95%、96%、97%、98%或99% )相同的氨基酸序列。在优选的实施方案中，该取代包含 X182N、X183N、X305Q、X320F、X379A、X407D、X419S 和 X475T 组成的组中的 1 至 8 个。在这些实施方案的亚组中，取代包含 T182N、G183N、Y305Q, Q320F、P379A、Q407D、T419S 和 G475T 组成的组中的1至8个(例如，1、2、3、4、5、6、7或8个)。本公开提供分离的α-淀粉酶变体，其中该变体是具有淀粉酶活性的成熟形式， 并且在选自 160、182、183、189、305、379 和 475 的 1-7 个(例如，1、2、3、4、5、6 或 7 个)位置上包含取代；并且其中该位置对应于SEQ ID NO :2所示的对照α-淀粉酶氨基酸序列编号。 在另一实施方案中，α -淀粉酶变体衍生自选自BASE、ACE、ACE-Q和ACE-QK的亲本α -淀粉酶。在优选的实施方案中，α-淀粉酶变体衍生自这样的亲本α-淀粉酶，该亲本α-淀粉酶具有与 SEQID NO 2,SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID NO :9,SEQ ID NO :10,SEQ ID NO =IUSEQ ID NO :12,SEQ ID NO :13禾口SEQ ID NO :14组成的组的任一成员至少 75% (优选 80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、 98%或99%)相同的氨基酸序列。在另一个优选的实施方案中，该取代包含X160E、X182G、 X183N、X189P、X305G、X379E和X475T组成的组中的1至7个。在这些实施方案的亚组中， 取代包含 Y160E、T182G、G183N、E189P、Y305G、P379E 和 G475T 组成的组中的 1 至 7 个(例如，1、2、3、4、5、6 或 7 个)。本公开提供分离的α-淀粉酶变体，其中该变体是具有淀粉酶活性的成熟形式， 并且在选自 125、182、214、279、305、319、320 和 475 的一个至八个(例如，1、2、3、4、5、6、7 或 8个)位置上包含取代；并且其中该位置对应于SEQ ID NO 2所示的对照α -淀粉酶氨基酸序列编号。在另一实施方案中，α -淀粉酶变体衍生自选自BASE、ACE、ACE-Q和ACE-QK 的亲本α-淀粉酶。在优选的实施方案中，α-淀粉酶变体衍生自这样的亲本α-淀粉酶， 该亲本 α-淀粉酶具有与 SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID NO 7, SEQID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :11、SEQ IDNO :12、SEQ ID NO :13 和 SEQ ID NO :14 组成的组的任一成员至少 75% (优选 80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96(%、97(%、98(%或99(%)相同的氨基酸序列。在另一个优选的实施方案中，该取代包含 X125A、X182A、X214Q、X279N、X305R、X319T、X320N 禾口 X475R 组成的组中的 1 至 8 个。 在这些实施方案的亚组中，取代包含S125A、T182A、T214Q、T279N、Y305R, D319T、Q320N和G475R组成的组中的1至8个(例如，1、2、3、4、5、6、7或8个)。本公开提供另一分离的α -淀粉酶变体，其中该变体是具有淀粉酶活性的成熟形式，并且在选自 7、182、298、376、379、407、419 和 453 的一个至八个(例如，1、2、3、4、5、6、7 或8个)位置上包含取代；并且其中该位置对应于SEQ ID NO 2所示的对照α -淀粉酶氨基酸序列编号。在另一实施方案中，α-淀粉酶变体衍生自选自BASE、ACE、ACE-Q和ACE-QK 的亲本α-淀粉酶。在优选的实施方案中，α-淀粉酶变体衍生自这样的亲本α-淀粉酶， 该亲本 α-淀粉酶具有与 SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID NO 7, SEQID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :11、SEQ IDNO :12、SEQ ID NO :13 和 SEQ ID NO :14 组成的组的任一成员至少 75% (优选 80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96(%、97(%、98(%或99(%)相同的氨基酸序列。在另一个优选的实施方案中，该取代包含 X7H、X182W、X298Q、X376R、X379K、X407W、X419S 和 X453W 组成的组中的 1 至 8 个。在这些实施方案的亚组中，取代包含E7H、T182W、T298Q、Y376R, P379K、Q407W、T419S和L453W 组成的组中的1至8个(例如，1、2、3、4、5、6、7或8个)。本公开提供分离的α-淀粉酶变体，其中该变体是具有淀粉酶活性的成熟形式， 并且在选自1观、178、182和185的一个至四个(例如，1、2、3或4个)位置上包含取代，并且该α-淀粉酶变体包含在243位的丝氨酸或谷氨酰胺，并且其中该位置对应于SEQ ID Ν0 2所示的对照α-淀粉酶氨基酸序列编号。在一个实施方案中，α-淀粉酶变体衍生自选自BASE、ACE、ACE-Q和ACE-QK的亲本α -淀粉酶。在优选的实施方案中，α -淀粉酶变体衍生自这样的亲本α -淀粉酶，该亲本α -淀粉酶具有与SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO 6,SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO =IUSEQ ID NO :12, SEQ ID NO :13和SEQ ID NO :14组成的组的任一成员至少75% (优选80%、85%、 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%)相同的氨基酸序列。在另一实施方案中，该取代包含N128C、K178L、T182G和A185D1组成的组中的1至4个(例如，1、2、 3或4个)。本公开提供另一分离的α -淀粉酶变体，其中该变体是具有淀粉酶活性的成熟形式，并且在选自 125、182、183、189、279、305、319、379 和 475 的一个至九个(例如，1、2、3、4、 5、6、7、8或9个)位置上包含取代，并且该α -淀粉酶变体包含在320位的谷氨酰胺、苯丙氨酸或天冬酰胺，并且其中该位置对应于SEQ ID NO :2所示的对照α-淀粉酶氨基酸序列编号。在一个实施方案中，α -淀粉酶变体衍生自选自BASE、ACE、ACE-Q和ACE-QK的亲本 α_淀粉酶。在优选的实施方案中，α-淀粉酶变体衍生自这样的亲本α-淀粉酶，该亲本 α-淀粉酶具有与 SEQ ID N0:2、SEQ ID NO :5、SEQ ID N0:6、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、 SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :10、SEQID NO : 11、SEQ ID NO :12、SEQ ID NO :13 和 SEQ ID NO 14 组成的组的任一成员至少 75% (优选 80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、 96%、97%、98%或99%)相同的氨基酸序列。在另一实施方案中，该α -淀粉酶变体包含 在125位的丝氨酸或丙氨酸；在182位的苏氨酸、天冬酰胺、甘氨酸或丙氨酸；在183位的甘氨酸或天冬酰胺；在189位的谷氨酸或脯氨酸；在279位的苏氨酸或天冬酰胺；在305位的酪氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸或精氨酸；在319位的天冬氨酸或苏氨酸；在379位的脯氨酸或丙氨酸；和在475位的甘氨酸、苏氨酸或精氨酸；并且其中该位置对应于SEQ ID NO 2所示的对照α-淀粉酶氨基酸序列编号。
本公开提供分离的α-淀粉酶变体，其中该变体是具有淀粉酶活性的成熟形式， 并且在选自 125、128、178、182、183、189、279、305、319、379 和 475 的一个至4^一个(例如，
I、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个)位置上包含取代，并且该α-淀粉酶变体包含在243位的丝氨酸或谷氨酰胺，和320位的谷氨酰胺、苯丙氨酸或天冬酰胺，并且其中该位置对应于 SEQ ID NO :2所示的对照α-淀粉酶氨基酸序列编号。在一个实施方案中，α -淀粉酶变体衍生自选自BASE、ACE、ACE-Q和ACE-QK的亲本α -淀粉酶。在优选的实施方案中，α -淀粉酶变体衍生自这样的亲本α-淀粉酶，该亲本α-淀粉酶具有与SEQID NO :2、SEQ ID NO 5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO
II、SEQID NO :12, SEQ ID NO :13和SEQ ID NO :14组成的组的任一成员至少75% (优选 80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99% )相同的氨基酸序列。在另一实施方案中，该α-淀粉酶变体包含在125位的丝氨酸或丙氨酸；在1 位的天冬酰胺或半胱氨酸；在178位的赖氨酸或亮氨酸；在182位的苏氨酸、天冬酰胺、甘氨酸或丙氨酸；在183位的甘氨酸或天冬酰胺；在189位的谷氨酸或脯氨酸；在279位的苏氨酸或天冬酰胺；在305位的酪氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸或精氨酸；在319位的天冬氨酸或苏氨酸；在379位的脯氨酸或丙氨酸；和在475位的甘氨酸、苏氨酸或精氨酸；并且其中该位置对应于SEQ ID NO :2所示的对照α-淀粉酶氨基酸序列编号。在另一个优选的实施方案中， 取代选自:N128C, T131I.T134P, Q138E、Y160I、T165I、T165V、K178L、T182A、T182C、T182D、 T182M、T182F、T182N、T182G、T182P、T182Q、A185D、A185E、E189P、S243D、S243E 和 S243Q。使用示例性α -淀粉酶作为起点，即“骨架”，制备和测试本文描述的氨基酸突变， 然而，可以理解可以在相关的α-淀粉酶中制备相当的氨基酸突变，其预期制备相似的效应和产生相似的优点。其他用作骨架的示例性的α-淀粉酶包括但不限于本文中鉴别的那些。本公开进一步提供了编码任意前述段落中的α -淀粉酶变体的分离的核酸。在一个实施方案中，包括了这样的表达载体，该表达载体包含与启动子有效组合的分离的核酸。 在另一实施方案中，包括了包含该表达载体的宿主细胞。另一实施方案提供了产生α-淀粉酶变体的方法，其包括用包含编码α -淀粉酶变体的核酸的表达载体转化宿主细胞；和在适合产生该α-淀粉酶变体的条件下培养转化的宿主细胞。另一实施方案进一步包括收获所产生的α-淀粉酶变体的步骤。另一实施方案包括作为宿主细胞的芽孢杆菌物种，且在另一实施方案中，该芽孢杆菌物种是枯草芽孢杆菌(B. subtilis)。本公开提供了清洁组合物，其包含任意前述段落的α-淀粉酶变体，进一步包含至少一种其他酶。在一个实施方案中，其他的酶是选自蛋白酶(包括但不限于枯草杆菌蛋白酶、中性金属蛋白酶、天冬氨酰蛋白酶等)、脂肪酶、角质酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯聚糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶、过氧化氢酶、果胶酸裂合酶和过氧化物酶。在另一实施方案中，清洁组合物是洗衣去污剂，在另一实施方案中，清洁组合物是洗碗去污剂。在另一实施方案中，清洁组合物是含漂白剂的洗衣和/或洗碗去污剂。在另一实施方案中，清洁组合物是用于织物的预处理，例如在洗涤之前应用。在另一实施方案中， 清洁组合物是洗衣去污剂或洗碗去污剂的添加物。本公开进一步提供了清洁的方法，其包括将包含织物的表面和/或物品与包含该α-淀粉酶变体的清洁组合物接触的步骤。在一个实施方案中，方法是洗碗方法，其包括步骤提供i)洗碗组合物，和ii)需要清洁的餐具；和在有效提供餐具清洁的条件下将餐具与洗碗组合物接触。在另一实施方案中，方法是织物清洁方法，其包括步骤提供i)织物清洁组合物，和ii)需要清洁的衣物；和在有效提供衣物清洁的条件下将衣物与织物清洁组合物接触。在另一实施方案中，方法涉及将材料从编织的织物中的纱线上去除，如在纺织品脱浆的情况下。根据本说明书，组合物和方法的这些和其他方面和实施方案是显而易见的。附图简述
图1提供了 SEQ ID NOS 2和5_14分别所示的各种对照淀粉酶的成熟形式的比对。使用 MUSCLE 3. 7 多重序列比对算法(Edgar，Nucleic Acids Research，32 1792-1797， 2004)比对序列。图2提供了含有地衣芽孢杆菌(B. lichenif0rmis)LAT启动子(Plat)和来着 pUB 110 (McKenzie等人，Plasmid, 15 =93-103,1986)的其他元件的pHPLT载体的图，该其他元件包括复制酶基因(r印pUB)、新霉素/卡那霉素抗性基因(neo)和博来霉素抗性标记 (bleo) ο 图3提供了 pHPLT-BASE质粒的图。图4 提供了 pHPLT-ACE-SM3Q 质粒的图。图5提供了显示多个α-淀粉酶在洗衣去污剂应用中的洗涤性能的表。所测试的酶如下W9(BASE-S125A-N128C-K178L-T182G-SM3Q-T279N-D319T-Q320N-G475R) ；Wl 0(BASE-N128C-K178L-T182G-S243Q-Y305R-D319T-G475R) ；Wll(BASE-S125A-N128C-K178L-T182G-S243Q-Y305R-G475R)；和 ACE-S243Q-G475K。图6提供了显示多个α -淀粉酶在洗衣去污剂应用中的洗涤性能的图表。所测试的酶如下BASE-X8C、BASE-W10EK、ACE-QK和对照(基准的商业酶)。图7A提供了显示在ACE α-淀粉酶和BPN' Y217L枯草杆菌蛋白酶在洗衣应用中的协同作用的图表。图7Β提供了显示在ACE-SM3Q-G47^ (ACE-QK) α -淀粉酶和 BPN' Y217L枯草杆菌蛋白酶在洗衣应用中的协同作用的图表。图 8 提供了显示在 BASE-X8C(W11-T131I_T165I) α-淀粉酶和 BPN' Y217L 枯草杆菌蛋白酶在洗衣应用中的协同作用的图表。图 9 提供了显示在 BASE WlOEK (BASE-N128C-K178L-T182G-S243E-Y305R-D319T-G475K) α-淀粉酶和BPN' Y217L枯草杆菌蛋白酶在洗衣应用中的协同作用的图表。图 10 提供了显示在 ACE-SM3Q_G47^((ACE-QK) α -淀粉酶和 BPN' Y217L 枯草杆菌蛋白酶在洗衣应用中的协同作用的图表。发明详述本发明描述了涉及淀粉酶变体，尤其涉及芽孢杆菌α -淀粉酶的变体的组合物和方法。本文所述淀粉酶变体具有该变得生化特征且在多种工业应用中显示出特别功效(例如洗衣和洗碗)。该变体以及用于使用变体的方法的各个特征将详细的描述如下。Ua-淀粉酶变体的定义和系统命名除非本文中另外定义，否则本文中所有的技术和科学术语都具有与本领域技术人员通常理解的相同的含义。Singleton 等人，DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY,第 2 版，John Wiley 和 Sons，New York(1994)和 Hale &Markham, THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY,Harper Perennial,NY(1991)为本领域技术人员提供了本文使用的许多术语的通用字典。组合物和方法的一些方面取决于基因工程和分子生物学领域使用的常规技术和方法。下列资源包括了可用于本组合物和方法中的通用方法学的描述=Sambrook等人， MOLECULAR CLONING :ALAB0RAT0RY MANUAL (第 2 版，1989) ；Kreigler, GENE TRANSFER AND EXPRESSION ；A LABORATORY MANUAL (1990)和 Ausubel 等人编辑，CURRENT PROTOCOLS IN MOLE⑶LAR BI0L0GY(1994)。这些一般性参考文献提供了本领域技术人员已知的定义和方法。然而，本组合物和方法并非旨在限于所描述的任何特定的技术、方案和试剂，这是可以改变的。虽然任何与本文所述的相似或等价的方法和材料都可用于实践或测试本组合物和方法，但优选的方法和材料描述如下。当描述蛋白质及其编码基因时，基因的名称一般是斜体且非大写的，而蛋白质的名称一般是非斜体且首字母大写。除非文中明确地另外指出，单数形式“一个”、“这个”和“该”包含了复数含义。因此，例如，指代“一种酶”包括了复数的此种酶，指代“这个配方”包括了指代本领域技术人员已知的一个或多个配方及其等价物，如此类推。本文中提及的所有专利和出版物，包括此类专利和出版物中公开的所有序列，都通过引用清楚地合并到本文中。1. 1 定义出于清楚的目的，定义下列术语。如本文使用的，术语“淀粉”指包括植物糖类的复杂多糖的任何材料，包括具有通式(C6HltlO5)x的直链淀粉和支链淀粉，其中X可以是任何数字。特别而言，该术语指任何基于植物的材料，包括但不限于谷粒、草、块茎和根，更特别的是小麦、大麦、玉米、黑麦、稻、高粱、麸、木薯、黍、马铃薯、甘薯和木薯粉(tapioca)。如本文使用的，术语“淀粉酶”指能够催化淀粉降解的酶。一般而言，α-淀粉酶(EC 3.2. 1. 1 ;a-D-(l — 4)-葡聚糖葡聚糖水解酶)是以随机方式切割淀粉分子内部的a-D-(l —4)0-糖苷键的内切酶。相反，外切作用的淀粉水解酶，例如β-淀粉酶 (EC 3.2. 1.2 ;a-D-(1 — 4)-葡聚糖麦芽糖水解酶)和一些产物特异性淀粉酶，如产麦芽糖(maltogenic) α -淀粉酶(EC 3. 2. 1. 133)，从底物的非还原端切割淀粉分子。β _淀粉酶、α -葡糖苷酶(EC 3. 2. 1. 20 ； α -D-葡糖苷葡萄糖水解酶)、葡糖淀粉酶(EC 3. 2.1.3； α -D-(1 — 4)-葡聚糖葡萄糖水解酶)和产物特异性淀粉酶可以从淀粉产生特定长度的低聚麦芽糖。如本文中使用的，淀粉酶包括任何/所有的淀粉酶，包括葡糖淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶和野生型α-淀粉酶，例如芽孢杆菌属物种的淀粉酶，例如地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的淀粉酶，同时，α -淀粉酶包括这些酶的上述亚组。如本文中使用的，“芽孢杆菌属物种TS-23菌株α -淀粉酶”和类似的词组，指源自芽孢杆菌属物种TS-23菌株的α-淀粉酶。编码该α-淀粉酶的基因可以是编码该α-淀粉酶的野生型基因或密码子优化的多核苷酸。芽孢杆菌属物种TS-23菌株的成熟的α-淀粉酶(按从氨基至羧基的方向)是(SEQ ID NO 1)NTAPINETMM QYFEffDLPND GTLffTKVKNE AANLSSLGIT ALffLPPAYKG 50TSQSDVGYGV YDLYDLGEFN QKGTIRTKYG TKTQYIQAIQ AAKAAGMQVY 100ADVVFNHKAG ADGTEFVDAV EVDPSNRNQE TSGTYQIQAff TKFDFPGRGN 150
TYSSFKffRffYHFDGTDffDESRKLNRIYKFRSTGKAffDffEVDTENGNYDYL200
MFADLDMDHPEVVTELKNWGTffYVNTTNIDGFRLDAVKHIKYSFFPDffLT250
YVRNQTGKNLFAVGEFffSYDVNKLHNYITKTNGSMSLFDAPLHNNFYTAS300
KSSGYFDMRYLLNNTLMKDQPSLAVTLVDNHDTQPGQSLQSffVEPffFKPL350
AYAFILTRQEGYPCVFYGDYYGIPKYNIPGLKSKIDPLLIARRDYAYGTQ400
RDYIDHQDIIGffTREGIDTKPNSGLAALITDGPGGSKWMYVGKKHAGKVF450
YDLTGNRSDTVTINADGffGEFKVNGGSVSIWVAKTSNVTFTVNNATTTSG500
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DQAGNVIffESTSNRTYTVPFSSTGSYTASffNVP583
如本文中使用的，“ α -淀粉酶变体”和类似的词组，指对照α -淀粉酶的变体
变体，其包括相对于对照α-淀粉酶的亲本(野生型；对照)氨基酸序列的氨基酸取代、插入和/或缺失。术语“变体”与术语“突变体”可互换的使用。变体α-淀粉酶可包括相对于亲本信号序列的信号序列中的突变。此外，变体α-淀粉酶可以是包含异源性α-淀粉酶信号序列，例如来自地衣芽孢杆菌的信号序列(LAT)的融合蛋白的形式。如本文中使用的，词组“亲本芽孢杆菌属物种TS-23菌株α -淀粉酶”、“野生型芽孢杆菌属物种TS-23菌株α -淀粉酶”、“对照芽孢杆菌属物种TS-23菌株α -淀粉酶”和类似的词组指芽孢杆菌属物种TS-23菌株的多肽。方便起见，术语可以是缩写的“亲本酶”、 “野生型酶”、“亲本多肽”、“对照多肽”等。亲本芽孢杆菌属物种TS-23菌株α-淀粉酶可在亲本多肽的信号序列中包含突变。此外，亲本芽孢杆菌属物种TS-23菌株α-淀粉酶可以是包含异源α-淀粉酶信号序列，例如来自地衣芽孢杆菌的信号序列(LAT)的融合蛋白的形式。如本文中使用的，“亲本核酸/多核苷酸”、“野生型核酸/多核苷酸”或“对照核酸 /多核苷酸”指编码亲本多肽的核酸序列，和与其互补的核酸。如本文中使用的，“变体核酸/多核苷酸”指编码变体多肽的核酸序列，或与其互补的核酸，或相对于亲本多核苷酸序列或与其互补的核酸具有至少一个碱基取代、插入或缺失的多核苷酸序列。其中特定的此类核酸可包括与对照序列具有特定程度同源性的核酸，或者能够与对照序列杂交的核酸，例如在严格条件下(例如，50°C和0. 2Χ SSCdX SSC =0. 15M NaCl,0. 015M Na3 柠檬酸，pH7. 0))或高严格条件下(例如，65°C和 0. IX SSC(IX SSC = 0. 15M NaCl,0.015M Nei3柠檬酸，pH7.0))杂交。可以优化变体核酸来反映特定宿主生物体的优选的密码子选择，例如甲基营养酵母(例如，毕赤酵母(Pichia)、汉逊氏酵母 (Hansenula)等)或丝状真菌(例如，木霉(Trichoderma)(如里氏木霉(T.reesei))等) 或其他的表达宿主(例如，芽孢杆菌、链霉菌(Sti^ptomyces)等)。如本文中使用的，术语“重组”当用于指对象细胞、核酸、蛋白质或载体时，表示该对象已通过引入异源的核酸或蛋白质或者对天然核酸或蛋白质的改变而修饰，或者该细胞来自上述修饰的细胞。因此，例如重组细胞表达在天然(非重组)形式的细胞中没有发现的基因，或者异常的表达、低表达或完全不表达天然表达的基因。如本文中使用的，术语“回收的”、“分离的”和“分开的”指去除了天然相关的和在自然界中发现的至少一种组分的化合物、蛋白质、细胞、核酸或氨基酸。如本文中使用的，术语“纯化的”指处于相对纯的状态的材料(例如，分离的多肽或多核苷酸)，例如，至少约90 %纯、至少约95 %纯、至少约98 %纯或者甚至至少约99 %纯。如本文中使用的，术语“热稳定的”和“热稳定性”指酶在暴露于升高的温度下之后，保持活性的能力。酶(例如α-淀粉酶)的热稳定性是通过它的半衰期(tl/幻按分钟、小时或天来测量的，在该过程中，一半的酶活性在所定义的条件下丧失。通过测量暴露于(受激于)升高的温度下之后剩余的α-淀粉酶活性，可以计算半衰期。如本文中使用的，“ρΗ范围，，指酶表现出催化活性下的PH值的范围。如本文中使用的，术语“ρΗ稳定的”和“ρΗ稳定性”涉及酶在宽泛的PH值范围内维持预定时间段的活性的能力(例如，15分钟、30分钟、1小时等)。如本文中使用的，术语“氨基酸序列”与术语“多肽”、“蛋白质”和“肽”是同义的， 并可互换的使用。在此类氨基酸序列表现出活性的情况下，可称为“酶”。本文中的氨基酸残基使用常规的一字母或三字母代码。如本文中使用的，术语“核酸”涵盖了 DNA、RNA、异源双链体和能够编码多肽的合成分子。核酸可以是单链或双链的，并可以是化学修饰的。术语“核酸”和“多核苷酸”可互换的使用。因为遗传密码是简并的，可使用一个以上的密码子编码特定的氨基酸，而本发明的组合物和方法涵盖了编码特定氨基酸序列的核苷酸序列。除非另外指出，核酸按从5’ 至3’方向由左至右的书写；氨基酸序列按从氨基至羧基方向由左至右的书写。如本文中使用的，术语“同源物”指与对照氨基酸或核苷酸序列，或与另一种特定的共同结构或功能特征具有一定程度同一性的氨基酸或核苷酸序列。同源序列包括使用常规的序列比对工具(例如Clustal、BLAST等)，与对象序列至少75% ,80% ,81 % ,82%, 83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%, 98 %或者甚至99 %相同的氨基酸序列。一般的，除非另外说明，同源物包括与对象氨基酸序列相同的活性位点残基。如本文中使用的，“杂交”指一条核酸链与互补链碱基配对的过程，发生在印迹杂交技术和PCR技术的过程中。如本文中使用的，“合成的”分子是通过体外化学或酶促合成而非生物体产生的。如本文中使用的，术语“转化的”、“稳定转化的”和“转基因的”用于指这样的细胞， 意味着该细胞具有整合到其基因组中的非天然的(例如，异源的)核酸序列，或携带该序列作为在多个世代中维持的附加体质粒。术语“引入”在向细胞插入核酸序列的上下文中，意指“转染”、“转化”或“转导”， 如本领域已知的。如本文中使用的，术语“宿主菌株”或“宿主细胞”指引入了包含编码目标多肽(例如，变体α-淀粉酶)的多核苷酸的表达载体、噬菌体、病毒或其他DNA构建体的生物体。示例性的宿主菌株是细菌细胞。术语“宿主细胞”包括从细胞产生的原生质体，例如芽孢杆菌的原生质体。如本文中使用的，涉及多核苷酸或蛋白质的术语“异源的”指在宿主细胞中非天然多核苷酸或蛋白质。如本文中使用的，涉及多核苷酸或蛋白质的术语“内源的”指在宿主细胞中天然多核苷酸或蛋白质。如本文中使用的，术语“表达”指基于基因的核酸序列产生多肽的过程。该过程包括转录和翻译。如本文中使用的，“选择性标记”或“选择性标记”指能够在宿主中表达，有利于选择携带该基因的宿主细胞的基因。选择性标记的实例包括但不限于抗微生物剂(例如，潮霉素、博来霉素或新霉素)和/或产生代谢优势的基因，如宿主细胞的营养优势。如本文中使用的，“培养”指在合适条件下，在液体或固体培养基中生长微生物细胞群体。培养包括将含有颗粒状淀粉的淀粉底物发酵性生物转化为终末产物(通常是在容器或反应器中)。如本文中使用的，“发酵”是微生物对有机物的酶促降解，产生更简单的有机化合物。发酵一般发生在厌氧的条件下，但该术语并非旨在仅限于严格厌氧条件，因为发酵也可以在存在氧的条件下发生。如本文中使用的，“基因”指参与产生多肽的DNA片段，包括编码区、在编码区前后的区域和单个编码片段(外显子)之间的间插序列(内含子)。如本文中使用的，“载体”指设计为将核酸引入一种或多种细胞类型中的多核苷酸序列。载体包括克隆载体、表达载体、穿梭载体、质粒、噬菌体颗粒、盒等。如本文中使用的，“表达载体”指包含编码目标多肽的DNA序列的DNA构建体，其与能够影响DNA在合适宿主中的表达的合适控制序列有效连接。此类控制序列可包括影响转录的启动子、控制转录的优化操纵子序列、编码mRNA上的合适的核糖体结合位点的序列、 增强子和控制转录和翻译终止的序列。如本文中使用的，“启动子”是涉及结合RNA聚合酶、起始基因转录的调控序列。启动子可以是诱导型启动子或组成型启动子。示例性的启动子是地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶 (AmyL)启动子。如本文中使用的，术语“有效连接”意指特定的组分所处的关系(包括但不限于邻接)允许它们以预期的方式发挥功能。例如，调控序列与编码序列有效连接，使得编码序列的表达处于调控序列的控制之下。如本文中使用的，术语“处于转录控制之下”意指多核苷酸序列(通常是DNA序列) 的转录依赖于其与元件的有效连接，该元件负责起始或促进转录。如本文中使用的，术语“处于翻译控制之下”意指多核苷酸序列(通常是RNA序列) 翻译为多肽依赖于其与元件的有效连接，该元件负责起始或促进翻译。如本文中使用的，“信号序列”是附着在蛋白质的N端部分的氨基酸序列，其有利于蛋白质分泌到细胞外。胞外蛋白质的成熟形式缺少信号序列，其在分泌过程中被切除。如本文中使用的，“生物学活性的”指序列具有特定的生物学活性，例如酶活性。在本发明的淀粉酶的情况下，该活性是α -淀粉酶活性。如本文中使用的，“水硬度”是对水中存在的矿物质(例如，钙和镁)的度量。如本文中使用的，术语“冷水”指温度低于约25°C的水。具体而言，冷水指温度低于约20°C的水。示例性的冷水范围是从约15°C至约25°C，从约15°C至约20°C。如本文中使用的，术语“性能指数(PI) ”指变体性能与亲本或对照淀粉酶的比值。 性能(即，特性)的测量包括热稳定性、清洁性能、表达水平等，根据上下文是显而易见的。如本文中使用的，改善性能的突变被称为“上升突变(up mutation) ”，对于特定的特性具有PI > 1。“中性突变”对于特定的特性具有PI >0.5。“无害突变”对于特定的特性具有PI > 0. 05。“有害突变”对于特定的特性具有PI ^ 0. 05。“组合突变”对于至少一种特性具有PI ^ 0. 5，且对于所有特性具有PI > 0. 05。组合突变可以在同一个变体中共存，产生具有至少一种有益特性的酶。如本文中使用的，术语“活性测量”指测量本文所述的酶活性。此类活性测量包括在PH8下的清洁性能、pHIO下的清洁性能、16°C下的清洁性能、32°C下的清洁性能和使用合成底物的活性。如本文中使用的，术语“稳定性测量”指测量本文所述的酶稳定性。此类活性测量包括在去污剂中的稳定性和热稳定性。如本文中使用的，术语“共同配制”意指对象成分(例如酶)共存于同一液体、半固体或干燥的组合物中。如本文中使用的，“糖化作用”淀粉至葡萄糖的酶促转化。如本文中使用的，“糊化(gelatinization) ”指通过蒸煮溶解淀粉分子形成粘稠的
悬浮液。如本文中使用的，“液化”指淀粉转化中的阶段，其中糊化的淀粉水解产生低分子量的可溶性糊精。如本文中使用的，术语“初级液化”指料浆的温度升高或接近其糊化温度时的液化步骤。在温度升高后，将料浆通过热交换器或喷射至200-300° F的温度，例如220-235° F。 在用于热交换器或喷射温度后，将料浆在该温度下保持3-10分钟的时间段。保持料浆在 200-300° F的这一步骤就是初级液化。如本文中使用的，术语“次级液化”指在初级液化(加热至200-300° F)之后的液化步骤，此时允许料浆冷却至大气温度。该冷却步骤可以是30分钟至180分钟(3小时)， 例如90分钟至120分钟(2小时)。如本文中使用的，术语“次级液化的分钟数”指从开始次级液化时至测量DE时已流逝的时间。如本文中使用的，术语“聚合程度(DP) ”指给定糖中的无水呋喃葡萄糖单位的数目。DPl的实例是单糖，例如葡萄糖和果糖。DP2的实例是二糖，例如麦芽糖和蔗糖。DP > 3表示具有聚合度大于3的多聚物。如本文中涉及淀粉转化时使用的，术语“终末产物”或“理想的终末产物”指从淀粉底物酶促转化成的具体的碳源来源的分子。如本文中使用的，术语“干燥固体含量(ds) ”指料浆中的总固体，以％干重表达。如本文中使用的，术语“料浆(slurry) ”指含有不可溶的固体的含水混合物。如本文中使用的，术语“剩余的淀粉”指在发酵或酶促水解含淀粉的底物后，组合物中剩余的淀粉(可溶的或不可溶的)。如本文中使用的，“再循环步骤”指醪液(mash)组分的循环，包括剩余的淀粉、酶和 /或发酵底物(包括淀粉)的微生物。如本文中使用的，术语“醪液”指包括了可发酵碳源(例如，糖类)的含水混合物， 其可用于生产发酵产物，例如醇。术语“发酵醪”和“醪液”可互换的使用。如本文中使用的，术语“酒糟”指不发酵的固体和水的混合物，代表从发酵的醪液中去除醇类后的剩余物。使用的，术语“干酒精糟(DDG) ”和“干酒精糟液(DDGS) ”指谷类发酵的有用的副产物。如本文中使用的，“产乙醇微生物”指具有将糖或寡糖转化为乙醇的能力的微生物。产乙醇微生物是凭借表达一种或多种可单独或共同将糖转化为乙醇的酶的能力来产乙醇的。如本文中使用的，术语“乙醇生产者”或“产乙醇微生物”指能够从己糖或戊糖生产乙醇的任何生物体或细胞。一般而言，产乙醇的细胞含有乙醇脱氢酶和丙酮酸脱羧酶。产乙醇微生物的实例包括真菌微生物，如酵母。优选的酵母包括酵母(Sacchromyces)的菌株， 特别是酿酒酵母(S. cerevisiae)。如本文中涉及淀粉酶及其底物时使用的，术语“接触”指将酶置于与底物足够接近，使酶能够将底物转化为终末产物。接触可以包括混合。如本文中使用的，术语“源自/衍生自”意指“起源自”、“基于”、“获得自”、“可获得自”或“分离自”，取决于上下文。如本文中使用的，术语“酶促转化”一般指通过酶作用(例如，淀粉酶)对底物(例如，淀粉)的修饰。如本文中使用的，术语“分解”指生物膜基质中的多糖的水解，该多糖将生物膜中的单个微生物细胞连接和结合在一起，从而可以从生物膜中释放并去除微生物细胞。如本文中使用的，“样品(swatch) ”是一片材料，例如织物，在该材料上施加污渍来评估组合物的清洁效率。如本文中使用的，术语“比活”指在特定条件下，单位时间内通过酶制品转化为产物的底物摩尔数。比活表达为单位(U)/mg蛋白质。如本文中使用的，术语“产量”指方法产生的终末产物的量，例如以浓度、体积、量或起始材料的百分比来表示。如本文中使用的，“ATCC”指位于美国弗吉尼亚州马纳萨斯，20108 (ATCC)的美国典
型培养物保藏中心。如本文中使用的，“NRRL”指伊利诺伊州皮契里亚的美国农业研究服务的培养物保藏中心，是美国的农业应用研究国立中心(之前称为USDA北部区域研究实验室)。数值范围包括定义范围的数。一般而言，小标题是描述性的，并非旨在限制。1.2系统命名在本说明书和权利要求中，氨基酸残基使用常规的单字母和三字母代码。为了便于对照，通过使用下列系统命名描述本发明组合物和方法的α-淀粉酶变体原始氨基酸位置取代的氨基酸。根据系统命名，例如用丙氨酸取代242位的丝氨酸显示为Serf42Ala或S242A。 删除30位的丙氨酸显示为Ala30*或A30*或ΔΑ30。插入额外的氨基酸残基，如赖氨酸， 显示为Ala30AlaLys 或 A30AK。删除一段连续的氨基酸残基，例如氨基酸残基30-33，标示为(30-3 *或 Δ (Α30-Ν33)或Δ 30-33。删除2个连续的氨基酸，如氨基酸残基R180-S181，标示为ARS 或 Δ 180-181。
当相比其他α -淀粉酶，特定的α _淀粉酶含有“删除”，且在该位置产生插入时， 对于36位插入天冬氨酸则标示为36Asp或* 36D。通过加号或减号分隔多个突变Ala30Asp+Glu;34kr或A30N+E;34S， Ala30Asp-Glu34Ser或A30N-E34S，表示30和34位的突变分别是用天冬氨酸和丝氨酸取代
丙氨酸和谷氨酸。当一个或多个可选的氨基酸残基可以取代给定位置的残基时，标示为A30N、E或 A30N 或 A30E。此外，当本文鉴别的适合进行修饰的位置没有提示任何特定的修饰时，理解为可以用任何氨基酸残基取代该位置存在的氨基酸残基。因此，例如当提到30位的丙氨酸的修饰但未说明时，理解为该丙氨酸可以被删除或被任何其他的氨基酸取代，即，R、N、D、A、C、Q、 E、G、H、I、L、K、Μ、F、P、S、Τ、W、Y、V 中的任一种。此夕卜，“Α30Χ”意指任一种下列取代A30R、A30N、A30D、A30C、A30Q、A30E、A30G、 A30H、A30I、A30L、A30K、A30M、A30F、A30P、A30S、A30T、A30W、A30Y 或 A30V ；或简写为A30R、 N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、Μ、F、P、S、Τ、W、Y、V。使用下列系统命名来表示非特定的亲本淀粉酶的位置上的氨基酸残基，其中，该位置根据SEQ ID NO 2所示的对照α -淀粉酶的氨基酸序列编号例如“Χ30Ν”或“Χ30Ν、 V”的情况下，变体淀粉酶的30位存在N或V之一，而亲本淀粉酶(例如，野生型或变体酶) 中存在20种标准氨基酸之一。1.3氨基酸残基的特征带电的氨基酸包括Asp、Glu, Arg、Lys和His。负电荷氨基酸(首先是具有最多负电的残基)是Asp和Glu。正电荷氨基酸(首先是具有最多正电的残基)是Arg、Lys和 His0中性氨基酸包括Gly、Ala、Val、Leu、lie、Phe、Tyr、Trp、Met、Cys、Asn、Gin、Ser> Thr 禾口 Pro。疏水性氨基酸残基(具有最大疏水性的残基列举在最后)包括Gly、Ala、Val、 Pro、Met、Leu、lie、Tyr> Phe 禾口 Trp0亲水性氨基酸残基(具有最大亲水性的残基列举在最后)包括Thr、Ser、CyS、Gln 禾口 Asn01.4同源性(同一性)与另一种序列具有特定百分比(例如，75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、 86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99% )的序列同一性的多核苷酸或多肽意指比对时，在比较的两条序列中相同碱基或氨基酸残基的百分比。可以使用本领域已知的任何合适的软件程序来确定比对和百分比同源性或同一性， 例如 CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY (F. Μ· Ausubel 等人，(编辑)1987，增刊 30， 7. 7. 18节)。优选的程序包括Vector NTI Advance 9. 0 (Invitrogen Corp. Carlsbad, CA), GCG Pileup 程序、FASTA(Pearson 等人，(1988)Proc. Natl, Acad. Sci USA 85 :2444-2448) 和 BLAST (BLAST Manual，Altschul 等人，Natl Cent. Biotechnol. Inf. , Natl Lib. Med. (NCIB NLM NIH)，Bethesda，Md.，和 Altschul 等人，(1997)NAR 25 :3389-340 。另一个优选的比对程序是 ALIGN Plus (Scientific and Educational Software，PA)，优选使用默认参数。另一种可使用的序列软件程序是在kquence Software Package版本6. 0 (Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, WI) ψ nj 1 得白勺 TFASTA Data Searching Program。同源性可以确定为两条序列之间相同的程度，表示第一序列源自第二序列。可以通过本领域已知的计算机程序的手段适当的确定同源性，例如GCG程序包(如上所述)中提供的GAP。因此，GAP GCGvS可使用同一性的默认评分矩阵和下列默认参数对于核酸序列比较的空位产生罚分为5. 0，空位延伸罚分为0. 3，对于蛋白质序列比较的空位产生罚分为 3. 0，空位延伸罚分为 0. 1. GAP 使用 Needleman 和 Wunsch, (1970)，J. Mol. Biol. 48 443-453的方法，产生比对和计算同一性。可使用BASE (SEQ ID NO 2)或BASE变体与例如另一种α -淀粉酶之间的结构性比对，来鉴别具有高度同源性的其他α -淀粉酶中的等价/相应的位置，例如与AmyTS23 约 75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、 94^^95%,96^^97^^98%或者甚至99%同源性。一种获得该结构性比对的方法是使用 GCG包中的Pile Up程序，使用空位罚分的默认值，即空位产生罚分为3.0，空位延伸罚分为 0. 1。其他的结构性比对方法包括疏水簇分析(Gaboriaud等人，(1987),FEBS LETTERS 224， 第 149-155 页)和逆向线程(reverse threading) (Hubei^PjTordaJROTEIN SCIENCE，第 7 卷，第 1 期，第 142-149 页(1998))。图1提供了各种对照淀粉酶的成熟形式的示例性比对。对照淀粉酶包括本文中称为AmyTS23t或BASE的截短的芽孢杆菌物种TS-23 α -淀粉酶，SEQ ID NO 2 (GENBANK 登录号ΑΑΑ63900)；本文中称为AmyL或LAT的地衣芽孢杆菌α -淀粉酶，SEQ ID NO 5 (GENBANK 登录号AAA22M0)；嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus) (之前的芽孢杆菌α -淀粉酶AmyS，SEQ ID NO 6(GENBANK 登录号:AAA22241)；解淀粉芽孢杆菌(B. amyloliquefaciens) α -淀粉酶 BACAM，SEQ ID NO 7 (GENBANK 登录号AAA22191)；本文中称为 AmyG6 或 Amy#707 的芽孢杆菌物种#707 α -淀粉酶，SEQ ID NO :8 (GENBANK登录号ΑΑΑ22231)；巨大芽孢杆菌 (B. megaterium) α -淀粉酶 AmyG5 或 AmyBm，SEQID NO 9 (GENBANK 登录号AAK00598)；芽孢杆菌物种 α -淀粉酶 ALBA，SEQ ID NO :10 (GENBANK 登录号CAL48155 和 W02006/037484)； 盐敏芽胞杆菌(B. halmapalus)淀粉酶 AmyBh，SEQID NO 11 (GENBANK 登录号AAE00432 和美国专利5，856，164)；芽孢杆菌物种淀粉酶AA560，SEQ ID NO 12 (GENBANK登录号 CAC16486 和 WO 2000/060060)；芽孢杆菌物种 KSM-AP1378 α -淀粉酶 AmyKSMl378，SEQ ID NO 13 (GENBANK 登录号CAD35985 和 EP No. 1199356A)；芽孢杆菌物禾中 pHSP_K38 淀粉酶 AmyK38,SEQ ID NO 14 (GENBANK 登录号CAJ00040 和 WO 2005/045045)。使用 MUSCLE 3.7 多重序列比对算法(Edgar, Nucleic Acids Research，32 1792-1797，2004)比对序列。表 1提供了显示图1的α-淀粉酶序列比对的百分比同一性的矩阵。表1. α-淀粉酶百分比
同一性矩阵*
权利要求
1.分离的α-淀粉酶变体，其中所述变体是具有淀粉酶活性的α-淀粉酶的成熟形式， 并且在选自 1、2、3、4、5、7、15、16、17、18、19、22、25、26、28、29、30、32、35、36、37，50，51，52， 53，54，55，56，59，60，70，71，72，73，75，78，83，87，90，91，93，94，95，104，105，107，108，110， 112，113，116，118，125，126，128，129，130，131，134，136，138，142，144，147，149，150，152， 154，156，158，160，161，162，165，166，168，169，170，172，174，177，178，182，183，185，189， 192，195，197，201，202，203，207，210，214，217，221，228，234，236，237，246，250，254，255， 257，264，267，269，270，272，275，279，283，284，298，301，303，305，306，310，311，314，318， 319，320，322，323，336，337，338，339，340，344，359，374，375，376，377，379，381，382，393， 394，399，401，407，408，419，433，436，438，444，447，448，451，453，459，465，470、475、476、 483和484的一个或多个位置上包含取代；其中所述位置对应于SEQ ID NO :2所示氨基酸序列中的氨基酸残基；并且其中一个或多个位置上的天然氨基酸残基取代为不同的氨基酸残基产生了具有稳定性测量的性能指数> 1. 0，且活性测量的性能指数> 1. 0的α -淀粉酶变体。
2.权利要求1的分离的α-淀粉酶变体，其在选自7、四、35、53、60、72、87、108、116、 126、128、129、130、131、134、136、138、142、156、161、165、178、182、185、189、192、195、197、 202、210、214、217、221、234、246、269、303、310、337、340、374、401 和 438 的一个或多个位置上包含取代，并且其中天然氨基酸残基取代为不同的氨基酸残基产生了具有活性测量的性能指数> 1. 5和稳定性测量的性能指数> 1. 0的α -淀粉酶变体。
3.权利要求1的分离的α-淀粉酶变体，其在选自2、7、22、25、28、30、37、70、75、83、 87、91、93、108、128、160、165、178、182、183、217、269、270、279、283、298、305、306、310、320、 374、375、376、407、419、475和476的一个或多个位置上包含取代，其中天然氨基酸残基取代为不同的氨基酸残基产生了具有稳定性测量的性能指数> 1. 5和活性测量的性能指数 > 1. 0的α -淀粉酶变体。
4.权利要求1的分离的α-淀粉酶变体，其在选自83、125、128、131、160、178、182、 183、185、189、279、305、319、320、379、407、433、453、475、476 和 483 的一个或多个位置上包含取代。
5.分离的α -淀粉酶变体，其在选自 83、125、128、131、160、178、182、183、185、189、 279、305、319、320、379、407、433、453、475、476和483的一个或多个位置上包含取代，其中所述位置对应于SEQ IDNO 2所示氨基酸序列中的氨基酸残基，并且其中所述取代提供了选自改善的清洁性能、改善的去污剂稳定性、改善的热稳定性和改善的蛋白质表达中的至少一中有益效果。
6.分离的α-淀粉酶变体，其中所述变体是具有淀粉酶活性的α-淀粉酶的成熟形式， 并且在选自 5、32、83、95、154、214、221、228、322、401、407、419、444、447、459、470、483 和 484的一个或多个位置上包含取代；其中所述位置对应于SEQ ID NO :2所示氨基酸序列中的氨基酸残基；并且其中天然氨基酸残基取代为不同的氨基酸残基产生了下述α-淀粉酶变体，所述 α -淀粉酶变体在ρΗ8下的活性、pHIO下的活性、16°C下的活性、32°C下的活性的性能指数值为0. 5或更高，在去污剂中的稳定性或热稳定性的性能指数值为0. 5或更高。
7.前述权利要求中任一项的分离的α-淀粉酶变体，其中所述不同氨基酸残基选自A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y，条件是所述不同氨基酸残基与天然出现的氨基酸残基不同。
8.前述权利要求中任一项的分离的α-淀粉酶变体，其进一步包含在对应于SEQID NO 2所示氨基酸序列的243位上的取代。
9.前述权利要求中任一项的分离的α-淀粉酶变体，其进一步包含在对应于SEQID NO 2所示氨基酸序列的180位和/或181位上的缺失。
10.前述权利要求中任一项的α-淀粉酶变体，其中所述α-淀粉酶变体衍生自亲本 α-淀粉酶，所述亲本α-淀粉酶具有与选自SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、 SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、SEQ IDNO :9、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :12、 SEQ ID NO 13和SEQ ID NO 14的氨基酸序列至少75%相同的氨基酸序列。
11.前述权利要求中任一项的分离的α-淀粉酶变体，其中所述α-淀粉酶变体具有与 SEQ ID NO 2所示氨基酸序列至少75%的序列同一性。
12.前述权利要求中任一项的分离的α-淀粉酶变体，其中所述α-淀粉酶变体具有与 SEQ ID NO 2所示氨基酸序列至少80%的序列同一性。
13.前述权利要求中任一项的分离的α-淀粉酶变体，其中所述α-淀粉酶变体具有与 SEQ ID NO 2所示氨基酸序列至少90%的序列同一性。
14.前述权利要求中任一项的α-淀粉酶变体，其中所述变体在选自对应于SEQID NO :2所示氨基酸序列的128、178、182、185和189的一个或多个位置上包含取代，其中所述取代提供了改善的清洁性能或改善的去污剂稳定性。
15.权利要求1的α-淀粉酶变体，其中所述α -淀粉酶变体包含(a)在125位的丙氨酸， 在1 位的半胱氨酸， 在131位的异亮氨酸， 在165位的异亮氨酸， 在178位的亮氨酸，在182位的甘氨酸， 在202位的酪氨酸， 在305位的精氨酸， 在319位的苏氨酸，或在475位的精氨酸；(b)取代m^C+K178L+T182G+Y305R+G475K，和选自 S125A、T131I、T165I、F202Y 和 D319T的至少一种其他的取代；或(c)取代N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K, S125A+N128C+K178L+T182G+TO05R+G475K，或 S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K ；其中所述变体任选还包含在243位上的取代，和/或在180位和/或181位上的缺失；和其中所述位置对应于SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列。
16.权利要求1的α-淀粉酶变体，其中所述α -淀粉酶变体包含475位上的取代。
17.权利要求16的α-淀粉酶变体，其中所述α-淀粉酶变体包含475位上的精氨酸。
18.权利要求16或17的α-淀粉酶变体，其还包含在243位上的取代，和/或在180 位和/或181位上的缺失。
19.分离的α-淀粉酶变体，其中所述变体是具有淀粉酶活性的成熟形式，并且在选自 1、2、3、4、5、7、15、16、17、18、19、22、25、26、28、29、30、32、35、36、37、50、51、52、53，54， 55，56，57，59，60，70，71，72，73，75，78，82，83，87，90，91，93，94，95，103，104，105，107，108， 110，112，113，114，115，116，118，121，123，125，126，127，128，129，130，131，132，134，135， 136，138，140，142，144，147，149，150，152，154，156，158，159，160，161，162，164，165，166， 167，168，169，170，171，172，174，175，176，177，178，179，182，183，185，186，188，189，190， 191，192，193，195，197，199，200，201，202，203，207，210，214，217，221，228，234，237，238， 239，240，246，250，254，255，257，264，266，267，268，269，270，272，273，275，279，283，284， 298，301，303，305，306，310，311，314，318，319，320，322，323，336，337，338，339，340，344， 359，374，375，376，377，379，381，382，393，394，399，401，407，408，419，433，436，438、444、 447、448、451、453、459、465、479、475、483 和 484 的一个或多个位置上包含取代；其中所述位置对应于SEQ ID NO :2所示的对照α-淀粉酶的氨基酸序列编号。
20.权利要求1或19的α-淀粉酶变体，其中所述在一个或多个位置上的取代是在1、 2、3、4、5、6、7、8、9、或10个位置上的取代。
21.权利要求1或19的α-淀粉酶变体，其中所述α -淀粉酶变体衍生自选自BASE、 ACE、ACE-Q和ACE-QK的亲本α -淀粉酶。
22.权利要求19的α-淀粉酶变体，其中所述α-淀粉酶变体衍生自亲本α-淀粉酶， 所述亲本 α -淀粉酶具有与由 SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7、 SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ IDNO :10、SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :12、SEQ ID NO 13 和SEQ IDNO 14组成的组的成员至少75%相同的氨基酸序列。
23.分离的核酸，其编码前述权利要求中任一项的α-淀粉酶变体。
24.表达载体，其包含权利要求23的分离的核酸，所述分离的核酸与启动子有效组合。
25.宿主细胞，其包含权利要求M的表达载体。
26.清洁组合物，其包含前述权利要求中任一项的α-淀粉酶变体。
27.权利要求沈的清洁组合物，其进一步包含至少一种选自蛋白酶、脂肪酶、角质酶、 糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯聚糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶、过水解酶、果胶酸裂合酶和过氧化物酶的其他酶。
28.权利要求27的清洁组合物，其中所述至少一种其他酶是蛋白酶。
29.权利要求观的清洁组合物，其中所述至少一种其他酶是枯草杆菌蛋白酶。
30.权利要求四的清洁组合物，其中所述至少一种其他酶是枯草杆菌蛋白酶ΒΡΝ’或其变体。
31.权利要求30的清洁组合物，其中所述至少一种其他酶是枯草杆菌蛋白酶 BPN，Y217L或其变体。
32.清洁织物或硬表面的方法，其包括将织物或硬表面与权利要求沈的清洁组合物接触。
33.权利要求32的方法，其中所述清洁组合物进一步包含至少一种表面活性剂。
34.权利要求32或33的方法，其中所述清洁组合物进一步包含至少一种选自蛋白酶、 脂肪酶、角质酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯聚糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶、过水解酶、果胶酸裂合酶和过氧化物酶的其他酶。
35.权利要求34的方法，其中所述至少一种其他酶是蛋白酶。
36.权利要求35的方法，其中所述至少一种其他酶是枯草杆菌蛋白酶。
37.权利要求36的方法，其中所述至少一种其他酶是BPN’Y217L枯草杆菌蛋白酶。
38.权利要求37的方法，其中所述α-淀粉酶变体包含取代 N128C+K178L+T182G+F202Y+S243Q+Y305R+D319T+G475K, S125A+N128C+K178L+T182G+S243Q+TO05R+G475K，或 S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+S243Q+Y305R+G475Ko
全文摘要
本发明描述了涉及变体α-淀粉酶的组合物和方法，相对于对照α-淀粉酶，该变体α-淀粉酶具有改变的生化性质和有利的性能特性。该变体适用于多种工业应用，例如淀粉转化；乙醇生产；衣物、餐具洗涤；纸浆和纸生产、纺织品退浆和/或甜味剂生产。
文档编号C12N9/28GK102378813SQ201080014543
公开日2012年3月14日 申请日期2010年4月1日 优先权日2009年4月1日
发明者B·E·琼斯, C·D·亚当斯, D·A·埃斯特尔, E·M·孔卡, M·科尔克曼 申请人:丹尼斯科美国公司