草酸相关疾病治疗方法和组合物的制作方法

专利名称：草酸相关疾病治疗方法和组合物的制作方法
草酸相关疾病治疗方法和组合物
相关申请的交叉参考本申请根据美国联邦法典第35篇第119条(35USC 119)要求2009年11月25日提交的美国临时申请系列号61/281，907和2010年5月20日提交的美国临时申请系列号 61/395,929的优先权。
联邦政府资助研发声明本发明得到政府支持，授予单位为美国全国卫生研究所(NIH)补充替代全国补药和选择性药物中心(NCCAM)，授权号码1R43AT006065-01。政府对本发明有一定权利。
背景技术：
每年大约有3百万人因肾结石前往就医。在这3百万患者当中，在美国超过一百五十万人患有肾结石相关疾病。肾结石是一种极为常见且令人痛苦的尿路疾病。最常见的类型为与草酸或者磷酸结合形式的钙结石，其中大约有70%为草酸钙。(Tsujihata， Μ. (2008)草酸 钙肾结石形成和肾小管细胞损伤的机制，《国际泌尿系统杂志》15，115-120; Daudon, Μ.，Dore, J. C.，Jungers, P.,和 Lacour, B. (2004)结石成分随患者年龄和性别变化一种多变量流行病学方法，《泌尿科杂志》32，241-247。)多种疾病状态与体内草酸过量有关，包括原发性高草酸尿、继发性高草酸尿、自闭症、外阴疼痛、终末期肾病相关草酸沉积、心脏传导障碍、克罗恩病、炎症性肠病、结肠炎、尿石症、终末期肾病相关草酸沉积、结节病、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、纤维肌痛、脑-肝-肾综合征、减肥手术和其它肠道疾病。草酸通常形成于植物中，且主要集中在叶子、坚果、水果和皮中。在食物中，草酸特别在以下植物性食物中含量较高蔬菜、谷物、坚果、豆类和饮料。一般草酸每日摄入量在 80-120mg之间，但是可能从44-350mg/天不等。膳食中草酸可以在食物中形成钠、钾或钙盐。草酸可以通过整个胃肠道(GI)吸收，包括胃、小肠和大肠。因此，从这些器官中清除膳食中草酸可以有效地阻止草酸吸收。尿路中分泌的草酸有10-70%来源于膳食中草酸的吸收，因此膳食吸收极有可能是尿路中草酸钙过度饱和的主要原因。(Holmes，R. P.， Goodman, H. O.和Assimos, D. G. (2001)膳食草酸对泌尿草酸排泄的贡献，《国际肾脏期刊》 59,270-276。)据认为，草酸钙过度饱和是草酸钙结石形成过程中起决定性作用的推动力。 因此，通过减少草酸钙过度饱和，结石形成风险也可能会显著降低。已知的治疗方法几乎没有通过减少或阻止系统膳食草酸吸收来显著降低结石形成的风险。限制膳食草酸吸收的方法之一是口服给予草酸降解酶，与胃、小肠和大肠接触。 提供此类治疗的一大难点在于胃内强酸环境，使得酶很难在低PH值和高胃蛋白酶活性环境下持续存在并发挥功能。小肠和大肠内由于胰蛋白酶和糜蛋白酶活性较高，也为酶的持续存在造成了环境困难因素。胃中PH值受多种因素的影响，包括个体胃健康相关条件、膳食量和膳食内容等。所有这些因素使得胃内PH值可能在1.9-5.5这一大范围内变动。人的胃内由于存在酸袋，使得PH值具有不均一性。因此，关键在于找到一种在该酸性pH值范围内稳定和强效的草酸降解酶，作为有效的人体治疗药物。此外，这种草酸降解酶还必须能够在5. 5-8. O的pH范围内保持稳定，才能经受住肠道内环境。这种草酸降解酶必须免受胃中蛋白酶的消化，以及小肠和大肠中胰蛋白酶和糜蛋白酶的消化。
概述本发明提供了一个实施例，一种草酸降解组合物，其中包括至少一种草酸降解酶。 该组合物包括一种浓缩的不可溶真菌生物样品组分，能够在PH值I. 9及以上环境中有效地降解草酸。名词“生物样品”在本文中是指大量来自相关物种的细胞或含有细胞的组织。在典型的实施例中，生物样品为匀浆或经其它方式碎裂，从而使生物样品中细胞破裂或溶解。 草酸脱羧酶(OxDC)和草酸氧化酶(OxOx)在不可溶细胞组分中均有发现，即细胞中蛋白质和其它非水溶性结构(细胞壁/膜)。生物样品中的不可溶组分可以通过去除非水溶性组分中至少一部分水和水溶性细胞组分进行浓缩。不可溶组分的浓缩可以通过行业传统方法实现，例如过滤、离心、冷冻干燥和/或简单地干燥。在另一个实施例中，提供了一种减少对象体内草酸含量的方法。该方法包括给予对象有效治疗剂量的一种组合物，其中包括至少一种草酸降解酶。至少一种草酸降解酶包括一种酶，在PH为I. 9-6. 3下具有活性，能够降解对象消化道内可溶性草酸。在另一个实施例中，提供了一种预防/治疗对象草酸相关临床状况的方法。该方法包括给予需要对象有效治疗剂量的一种含有至少一种草酸降解酶的组合物。草酸相关临床状况包括以下中的一种原发性高草酸尿、自闭症、继发性高草酸尿、克罗恩病、炎症性肠病、 结肠炎、心脏传导障碍、尿石症、外阴疼痛、减肥手术、结节病、哮喘、慢性阻塞性肺病 (COPD)、纤维肌痛、脑-肝-肾综合征、终末期肾病相关草酸沉积和其它肠道疾病。另一个实施例提供了一种产品，其中包括封装材料和有效剂量的草酸降解酶。封装材料包括以下中至少一种丸剂、糖丸、袋装、片剂、散装、棒和/或食物添加剂。另一个实施例提供了一种治疗草酸相关临床状况的治疗方法。该方法包括联合给予需要该治疗对象有效剂量的第一种组合物和第二种组合物，前者组合物在对象胃内释放酶，后者在对象肠道内释放酶。该方法揭示了当酶释放时，第一种组合物在胃中降解草酸， 而第二种组合物在肠道内降解草酸。另一个实施例提供了一种衍生自一种真菌源的草酸降解组合物。该组合物包括至少第一种组合物和第二种组合物。第一种组合物包括至少一种草酸降解酶，其中第一种组合物在pH值I. 9-6. 3范围内pH值下释放至少一种草酸降解酶。第二种组合物包括至少一种草酸降解酶，其中所述第二种组合物在PH值5. 5-8. O范围内pH值下释放至少一种草酸降解酶。另一个实施例提供了一种产品，其中包括封装材料和有效剂量的草酸降解酶。该产品包括一种第一种组合物，其中第一种组合物在第一个PH值范围内pH值下能够发挥作用。该产品还包括一种第二种组合物，其中第二种组合物在第二个PH值范围内pH值下能够发挥作用。该产品包括至少一种第一种草酸降解酶和一种第二种草酸降解酶。


图I是显示pH值I. 9-6. 3来自三种真菌种类的OxDC的pH活性特征图。图2显示来自三种真菌种类的OxDc的热稳定性。图3 是显不 pH 值 5. 0-8. 5 来自 Bougainvillea buganvilla 的 OxOx 的 pH 活性特征的图。图4显不来自牛肝菌(Boletus flaviporus)、鸡腿燕(Coprinus cometus)的 OxDC 和来自鸡腿菇的配方OxDC的pH活性。图5显示在pH值为2. 4、3. 4和5. 2的3种食物混合样品中来自柱状田头菇 (Agrocybe aegerita)的OxDC对可溶性草酸的降解。
发明详述本发明基于发明者研发一种在对象体内降解草酸的新组合物。对OxDC活性在本发明继承的超过一百二十种不同蘑菇种类中进行了评估，详见实施例2。它们中间很多是可使用或医用蘑菇。很多来自这些蘑菇真菌的OxDC活性在pH值I. 9-2. 5,2. 5-3. 0,3. 0-3. 5、
3.5-4. 0,4. 0-4. 5,4. 5-5. 0,5. 0-5. 5,5. 5-6. O 和 6. 0-6. 3 能够保持稳定和有效，并且能够防止胃蛋白酶消化。此外，部分真菌品系在温度超过70°C时能够保持稳定并显示出OxDC活性。这一特性非常有助于预测活性。因此，本发明包括这些PH值和热稳定草酸降解酶。与之相应，本发明中的一个实施例提供了一种包括至少一种草酸降解酶的草酸降解组合物。该组合物包括一种浓缩的不可溶真菌生物样品组分，能够在PH值I. 9及以上环境中有效地降解草酸。本发明另一方面提供了一种组合物，其中至少有一种草酸降解酶包括一种在I. 9-5. 5pH值范围内pH值下能进行配方且具有活性的酶，和/或第二种在5. 0-8. OpH值范围内pH值下具有活性的酶，或者一种第一种和第二种酶的组合。本发明另一个较为详细的实施例中包括了一种组合物，其中酶包括以下至少一种草酸氧化酶 (OxOx)和/或草酸脱羧酶(OxDC)。草酸脱羧酶(OxDC)是一种能够降解草酸的酶。本文中公布的OxDC组合物一般来自于可食用或无毒真菌，具有作为潜在的治疗性、医用食物、膳食补充或其它治疗方案的理想特性，因为它们在例如 pH 水平 I. 9-2. 5,2. 5-3. 0,3. 0-3. 5,3. 5-4. 0,4. 0-4. 5,4. 5-5. O、 5. 0-5. 5,5. 5-6. O下能够保持稳定和活性。本发明OxDC组合物可以进入细胞，或者可以与细胞膜相结合或以其它方式与细胞壁相关联。OxDC组合物能够防止胃蛋白酶消化，能够降解胃、小肠和大肠中吸收的大部分草酸。OxDC可以通过发酵培植的真菌菌丝或这些真菌形成的子实体或蘑菇制备。这些含有OxDC的真菌菌丝或清洁后的蘑菇或子实体可以通过研磨、捣碎、溶解成悬液、混合或其它本行业技术员熟知的适当处理方法制成溶液、粉末或其它剂型。然后可以将菌丝、蘑菇或子实体制剂干燥并制成片剂或胶囊，包装成小袋，制成棒状，制成糖丸，加入到食物混合物中，或者采取其它本行业技术员熟知的适当给药方法。一方面，本发明的草酸降解组合物可以与正餐和含草酸的零食一起食用。这种产品可以广泛应用于形成草酸钙结石人群或人或动物中其它草酸相关状况。这种组合物特殊的一方面在于设计用于降解非全身性草酸，胃肠道中草酸，尤其是胃中草酸，预防外源性草酸(如来自食物)进入全身循环。在一个较为详细的实施例中，该酶在PH值I. 9-6下保持活性和稳定。根据一个替代实施例，一种草酸降解酶据发现与细胞壁结合后在pH值3. 0-6. 5下具有活性，但是提纯和支撑微粒后只能在PH值3. 0-7. O下具备活性。根据另一个替代实施例，含有草酸降解酶的组合物包括第一种在胃中保持稳定和活性的酶和第二种在胃中保持稳定但是只在肠道中具备活性的酶。另一类草酸降解酶,草酸氧化酶(OxOx)在更高等植物和真菌中表达,能够催化草酸通过氧气依赖氧化成C02，同时形成H202。本发明其中一方面是关于从植物和真菌中找到的草酸氧化酶(OxOx)，它们在例如pH值水平I. 9-2. 5、2. 5-3. O、3. 0-3. 5、3. 5-4. O、
4.0-4. 5,4. 5-5. 0,5. 0-5. 5,5. 5-6. O下能够保持稳定和具备如上所述的活性。一种来自 Bouganvillea buganvillea 的特定 OxOX 在 pH 值 5. 5-8. O 下显不出活性。这些OxOx和OxDC酶可以直接从这些植物或真菌中制备，或者通过编码OxOx和 OxDC的基因分别制备，通过克隆这些基因，使用普遍接受的适当流程亚克隆到重组表达系统中，重组表达系统包括但不限于大肠杆菌、细菌、酵母、真菌和哺乳动物细胞。经提纯以后，所表达的OxOx酶可以通过不同的方法制成能够抵抗胃中胃蛋白酶和小肠和大肠中胰蛋白酶和糜蛋白消化的制剂，这些方法包括但不限于微囊法、附着于大分子如PEG或修饰OxOx酶分子表面。酶制剂可以制成包括但不限于片剂、胶囊、小袋、糖丸、棒，或加入到其它食物组合物或其它各种给药模式制剂。因此，本发明为关于一种组合物，其中这些草酸降解酶嵌入到一种聚合物材料中，该材料可以保护酶在胃内环境下不被降解。这些含有OxOx的真菌菌丝或清洁后的蘑菇或子实体可以通过研磨、捣碎、溶解成悬液、混合或其它本行业技术员熟知的适当处理方法制成溶液、粉末或其它物理外观。然后可以将菌丝、蘑菇或子实体制剂或植物材料干燥并制成片剂或胶囊，包装成小袋，制成棒状， 制成糖丸，加入到食物混合物中，或者采取其它本行业技术员熟知的适当给药方法。
另一个实施例提供了一种产品，其中包括封装材料和有效剂量的草酸降解酶。该封装材料包括以下中至少一种丸剂、糖丸、袋装、片剂、散装、棒和/或食物添加剂。另一个实施例提供了一种产品，其中包括封装材料和有效剂量的草酸降解酶。该产品包括第一种组合物和第二种组合物，其中前者在第一个PH值范围内pH值下能够发挥作用，后者在第二个PH值范围内pH值下能够发挥作用。该产品包括至少一种第一种草酸降解酶和一种第二种草酸降解酶。第一种草酸降解酶可以包括第一种口服剂量组分，而第二种草酸降解酶可以包括第二种口服剂量组分。第一种口服单元组分可以包绕第二种口服单元组分，或者相反。第一个PH值范围包括pH值I. 9-5. 5，第二个pH值范围包括5. 5-8. O。 在一个特定的实施例中，产品是指一种含两种 组分的丸剂或片剂，其中第一种组分包含在第二种组分之中。本文中所使用的术语“口服单元”是指单独的、预先确定的剂量，为一种适合口服的固体、半固体和/或液体体积和大小。口服单元例子包括但不仅限于胶囊、片剂、 液体悬液、粉末和锭剂等。并且，口服单元可以是指一种组合物预先确定的量，装于一个安瓿、小袋或其它打开后可以释放出口服给药内容物的容器中。本文中，术语“对象”和“患者”是可以交换使用的。本文中，术语“对象”是指一种动物，优选一种哺乳动物，如非灵长类(如奶牛、猪、马、狗、大鼠等)和灵长类(如猴子和人)，最优选人。在替代实施例中，本发明是关于可以通过重组表达生产的OxDC。本发明其中一方面是关于从植物和真菌中找到的多种草酸脱羧酶(OxDC)，它们在例如pH值水平5. 0-5. 5、
5.5-6. O和6. 0-6. 5下能具备活性。来自这些真菌的编码OxDC基因可以通过本行业技术人员普遍接受的适当的流程在包括但不限于大肠杆菌、细菌、酵母、真菌或哺乳动物细胞中克隆和外源性表达。由包括但不限于大肠杆菌、细菌、酵母或哺乳动物细胞克隆、亚克隆和表达的重组OxDC可以通过色谱方法和本领域人员熟悉的多种其它方法进行提纯。纯化 OxDC可以进一步制成不被胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶消化的产品，同时获得其它有益特性，包括有效期长和更宽的pH值活性。制剂可以使OxDC酶在pH水平5. 0-5. 5,5. 5-6. O、6.0-6. 5和6. 5-7. O下具有活性。在另一个实施例中，本发明为关于第二类草酸降解酶，草酸氧化酶(E. C. I. 2. 3. 4， OxOx)，在高等植物中表达。该酶在种子发芽或防御寄生虫入侵时催化草酸通过氧气依赖氧化成CO2,同时产生H2O2 (40)。部分真菌据报告能够生成这种酶(41)。本发明测试的几种真菌确实表现出OxOx活性。来自本发明测试的几种植物和真菌的OxOx在pH值I. 9-5. 5下保持稳定和活性，适合用于降解人体胃中膳食性草酸。来自本发明测试的几种植物和真菌的其它OxOx在pH值5. 0-8. 5下保持稳定和活性，适合用于降解非人体胃中、小肠和大肠中膳食性草酸。本发明是关于来自植物和真菌中的OxOx酶，可以直接从这些有机体中制备(40) (41) (42)。植物或真菌可以在能够获得高OxOx含量的条件下培养。生产流程可以与其它食物加工流程类似，包括但不限于清洁、消毒、碾磨、干燥和包装。在一个替代实施例中，本发明是关于可以通过重组表达生产的OxOx。来自这些植物或真菌的编码OxOx的基因可以在包括但不限于大肠杆菌、细菌、真菌、酵母(43，44)或其它植物类型中克隆和外源性表达(40，45，46)。带有重组OxOx的植物可以与使用天然表达 OxOx的植物相同的方式用作原材料。由包括但不限于大肠杆菌、细菌、真菌或酵母或其它合适的表达系统表达的重组OxOx可以通过普遍接受的流程提纯并进一步制成最终产品。在另一个实施例中，本发明是关于OxOx或OxDC酶干粉、溶液或其它能够加工成各种不同给药方法的物理外观，给药方法包括但不限于片剂、胶囊、不同类型的糖丸或棒、袋装或直接作为粉剂。另一个实施例提供了一种组合物，其中至少有一种草酸降解酶来自以下有机体的细胞样品美味齿菌(Dentinum reparandum)、绿燕(Russula virescens)、发光假蜜环菌 (Armillaria tabescens)、红鸡油菌(Cantharellur cinnabarinur)、Boletur rubellus var fraternus、堆金钱菌(Collybia acervata)、软靴耳(Crepidotus mollis)、亚抚柄牛肝菌(Boletur subglabripes)、网柄牛肝菌(Boletus ornatipes)、黄多孔菌(Polyporus elegans)、灰光柄燕(Pluteus cervinus)、澄黄硬皮马勃(Sderoderma citrinum)、平恭(Pleurotus ostreatus)、长根 (Xerula radicata)、Telephoro vlalis、猪肚 (Clitocybe)、丝膜菌(Cortinarius cedretorun)、蓝绿乳燕(Lactarius indigo)、密裙紅 (Russula densifolia) > Amanita rhopalopus、Clitocybe hydrograma、黄盖我鸟骨菌(Amanita gemmata)、Cortinarius lewisii、白腐菌(Pleurotus eryngii)、裂丝盖伞(Inocybe rimosa)、Lactarius atrorividus、花盖红 (Russula cyanoxhanth)、多根硬皮马勃(Sderoderma polyrhizum)、香燕(Lentinula edodes)、真姬燕(Hypsizygus tessellates)、金针 (Flammulina velutipes)、Leucangia carthusiana、Tuber oregonese、灰树花菌(Grifola frondosa)、Boletus rubricitrinus、兄弟牛月干菌 (Boletus fraternus) > Gyroporus subalbellus、Leucoagaricus americanus、发光类胳燕(Omphalotus olearius)、假鬼伞(Coprinus disseminates)、黑褐鹅膏菌(Amanita brunnescens)、叶绿红 (Russula helerophylla) > Mycorrhaphium adustum、假密环菌 (Armillaria tabescense)、Boletus flaviporus、Russula pectintoides、Lentinula boryana、Amanita mutabilis、Gyroporus subalbellus 2nd、靴状金钱菌(Collybia peronata)、皱盖乳 (Lactarius corrugis)、平红盖 (Rhodocybe)、Macrocybe titaus、金钱菌(Collybia)、变形菌(Pluteus) ΛLactarius yazooensis、山杨抚柄牛肝菌(Leccinum insigne)、鸡腿燕(Coprinus comatus)、块莖形多孔菌(Polyporus tuberaster)、柱状田头燕(Agrocybe aegerita)、变色栓菌(Trametes versicolor)、灵芝(Ganoderma Iucidum)、 偷燕(Hypsizygus ulmarius)、暖季型香燕(Lentinula edodes (warm))、冷季型香燕 (Lentinula edodes (cold))、宽范围型香燕(Lentinula edodes (wide range))、Russula amoenolens λ Lactarius tomentosu 和 / 或姬松鸾(Agaricus blazei) 0 研究发现从这些筛选的真菌中获得的OxDC和/或OxOx的最佳pH值范围为I.9-6.3。研究发现从这些筛选的真菌中获得的Ox DC和/或OxOx的活性pH值范围为I. 9-6. 3，如表I所示。
表I来自筛选真菌的OxDC和OxOx的最佳和活性pH值范围
权利要求
1.草酸降解组合物，该组合物包括至少一种草酸降解酶，所述组合物包括一种浓缩的不可溶真菌生物样品组分，其中所述组和物能够在pH值I. 9及以上环境中有效地降解草酸。
2.根据权利要求I的组合物，其中所述至少有一种草酸降解酶包括一种在I.9-6. 3pH 值范围内pH值下具有活性的第一种酶，和/或在5. 0-8. OpH值范围内pH值下具有活性的第二种酶，或者第一种和第二种酶的组合。
3.根据权利要求I的组合物，其中所述至少一种草酸降解酶包括草酸氧化酶(OxOx)和 /或草酸脱羧酶(OxDC)中至少一种。
4.权利要求I的组合物，其中所述至少一种草酸降解酶来源于以下中的一种美味齿菌(Dentinum reparandum)、绿 (Russula virescens)、发光假蜜环菌(Armillaria tabescens)、 红鸡油菌(Cantharellur cinnabarinur)、Boletur rubellus var fraternus、堆金钱菌(Collybia acervata)、软靴耳(Crepidotus mollis)、亚抚柄牛肝菌(Boletur subglabripes)、网柄牛肝菌(Boletus ornatipes)、黄多孔菌(Polyporus elegans)、灰光柄燕(Pluteus cervinus)、禮黄硬皮马勃(Sderoderma citrinum)、 平燕(Pleurotus ostreatus)、长根 (Xerula radicata)、Telephoro vlalis、猪肚 ^ (Clitocybe)、Cortinarius cedretorun、蓝绿乳 (Lactarius indigo)、密糟紅燕(Russula densifolia)、Amani ta rhopalopus、Clitocybe hydrograma、黄盖我鸟嘗菌(Amanita gemmata)、Cortinarius lewisii、白腐菌(Pleurotus eryngii)、裂丝盖伞 (Inocybe rimosa)、Lactarius atrorividus、花盖红 (Russula cyanoxhanth)、多根硬皮马勃(Sderoderma polyrhizum)、香燕(Len tinula edodes)、真姬燕(Hypsizygus tessellates)、金针 (Flammulina velutipes)、Leucangia carthusiana、Tuber oregonese、灰树花菌(Grifola frondosa)、Boletus rubricitrinus、兄弟牛月干菌 (Boletus fraternus)、Gyroporus subalbellus、Leucoagaricus americanus、发光类胳燕(Omphalotus olearius)、假鬼伞(Coprinus disseminates)、黑褐我鸟膏菌(Amanita brunnescens)、叶绿红 (Russula helerophylla)、Mycorrhaphium adustum、假密环菌 (Armillaria tabescense)、Boletus flaviporus、Russula pectintoides、Lentinula boryana、Amanita mutabilis、Gyroporus subalbellus 2nd、靴状金钱菌(Collybia peronata)、皱盖乳 (Lactarius corrugis)、平红盖 (Rhodocybe)、Macrocybe titaus、 金钱菌(Collybia)、变形菌(Pluteus)、Lactarius yazooensis、山杨抚柄牛肝菌(Leccinum insigne)、鸡腿燕(Coprinus comatus)、块莖形多孔菌(Polyporus tuberaster)、柱状田头燕(Agrocybe aegerita)、变色栓菌(Trametes versicolor)、灵芝(Ganoderma Iucidum)、 偷燕(Hypsizygus ulmarius)、暖季型香燕(Lentinula edodes (warm))、冷剂型香燕 (Lentinula edodes (cold))、宽范围型香燕(Lentinula edodes (wide range))、Russula amoenolens、Lactarius tomentosu 和 / 或姬松驾(Agaricus blazei)。
5.根据权利要求4的组合物，其中所述至少一种草酸降解酶获得自以下中的两种或以上金针燕(Flammulina velutipes)、柱状田头燕(Agrocybe aegerita)和鸡腿燕 (Coprinus comatus)，或其任意组合，其中所述酶在pH值范围I. 9-6. 3内pH值下具有活性。
6.—种降低对象体内草酸含量的方法，包括给予所述对象有效治疗剂量的一种组合物，其中包括至少一种草酸降解酶，所述至少一种草酸降解酶包括一种在pH值范围I. 9-6. 3内pH值下具有活性的酶，其中所述酶降解所述对象消化道内可溶性草酸。
7.根据权利要求6的方法，其中所述有效治疗剂量的所述组合物经口服给予所述对象。
8.根据权利要求6的方法，其中所述至少一种草酸降解酶包括草酸氧化酶(OxOx)和/ 或草酸脱羧酶(OxDC)中至少一种。
9.根据权利要求6的方法，其中所述酶为草酸氧化酶。
10.根据权利要求9的方法，其中所述酶从真菌分离。
11.权利要求6的方法，其中所述酶为草酸脱羧酶。
12.根据权利要求11的方法，其中所述酶从一种真菌或细菌分离。
13.根据权利要求11的方法，其中所述酶从一种在发酵环境下培育的真菌或细菌分离。
14.根据权利要求6的方法，其中所述至少一种草酸降解酶包括一种在pH值I.9-5. 5 范围内PH值下具有活性的酶。
15.根据权利要求6的方法，其中所述至少一种草酸降解酶包括一种在pH值5.5-8. O 范围内PH值下具有活性的酶。
16.根据权利要求6的方法，其中所述至少一种草酸降解酶来源于金针菇 (Flammulina velutipes)、柱状田头燕(Agrocybe aegerita)和鸡腿燕(Coprinus comatus)，其中所述酶在pH值范围I. 9-5. 5内pH值下具有活性。
17.草酸相关临床状况的治疗方法，其中所述方法包括给予需要对象有效治疗剂量的权利要求I的组合物，其中所述草酸相关临床状况包括以下中的一种原发性高草酸尿、自闭症、继发性高草酸尿、克罗恩病、炎症性肠病、结肠炎、心脏传导障碍、尿石症、外阴疼痛、 减肥手术、终末期肾病相关草酸沉积和其它肠道疾病状态。
18.根据权利要求17的方法，其中所述至少一种草酸降解酶包括一种在I.9-6. 3内pH 值下具有活性的酶。
19.根据权利要求17的方法，其中所述至少一种草酸降解酶包括一种在5.5-8. O内pH 值下具有活性的酶。
20.根据权利要求17的方法，其中所述至少一种草酸降解酶包括草酸氧化酶(OxOx)和 /或草酸脱羧酶(OxDC)中至少一种。
21.根据权利要求17的方法，其中所述至少一种草酸降解酶来源于金针菇 (Flammulina velutipes)、柱状田头燕(Agrocybe aegerita)和鸡腿燕(Coprinus comatus),或其任意组合,其中所述酶在1.9-6. 3内pH值下具有活性。
22.根据权利要求17的方法，其中需要患者由患者表现出的状况和患者体内草酸浓度水平确定。
23.根据权利要求17的方法，其中所述给药步骤为经口服给药。
24.一种产品，包括封装材料和有效剂量的草酸降解酶，其中所述封装材料包括以下中至少一种丸剂、糖丸、袋装、片剂、散装、棒和/或食物添加剂。
25.根据权利要求24的产品，其中所述草酸降解酶包括草酸氧化酶(OxOx)和/或草酸脱羧酶(OxDC)中至少一种。
26.一种治疗草酸相关临床状况的方法，包括给予需要此类治疗的对象联合应用有效齐U量的(a) —种第一种组合物，其中所述第一种组合物在对象胃内释放出酶；和(b) 一种第二种组合物，其中所述第二种组合物在对象肠道内释放出酶，当所述酶释放时，所述第一种酶组合物降解胃内草酸，所述第二种组合物降解肠道内草酸。
27.根据权利要求26的方法，其中联合应用为序贯给药。
28.根据权利要求26的方法，其中联合应用为同时给药。
29.根据权利要求26的方法，其中第一种组合物和第二种组合物通过相同的给药模式给药。
30.根据权利要求26的方法，其中第一种组合物和第二种组合物分别包括第一种口服单元和第二种口服单元。
31.根据权利要求26的方法，其中第一种组合物包括OxOx和/或OxDC中至少一种。
32.—种来源于真菌的草酸降解组合物，包括至少第一种组合物和第二种组合物，所述第一种组合物包括第一种草酸降解酶，其中所述第一种组合物在PH值范围I. 9-6. 3内pH 下释放所述第一种草酸降解酶，所述第二种组合物包括第二种草酸降解酶，其中所述第二种组合物在PH值范围5. 5-8. 5内pH下释放所述第二种草酸降解酶。
33.根据权利要求32的组合物，其中第一种草酸降解酶与在pH值范围I.9-6. 3内pH 下溶解的第一种聚合物结合，其中所述第二种草酸降解酶与在PH值范围5. 5-8. 5内pH下溶解的第二种聚合物结合。
34.根据权利要求32的方法，其中所述至少一种草酸降解酶包括草酸氧化酶(OxOx)和 /或草酸脱羧酶(OxDC)中至少一种。
35.一种包括口服给药剂量的草酸降解酶的产品，所述产品包括第一种组合物，其中所述第一种组合物在第一个PH值范围内pH值下发挥作用，和第二种组合物，其中所述第二种组合物在第二个PH值范围内pH值下发挥作用，其中所述产品包括至少一种第一种草酸降解酶和一种第二种草酸降解酶。
36.根据权利要求35的产品，其中第一种草酸降解酶包括口服单元的第一种组合物， 其中所述第二种草酸降解酶包括口服单元的第二种组合物。
37.根据权利要求35的产品，其中第一种组分在口服单元中包绕第二种组分。
38.根据权利要求35的产品，其中第二种组分在口服单元中包绕第一种组分。
39.根据权利要求35的产品，其中第一个pH值范围包括pH值I.9-6. 3，其中第二个pH 值范围包括5. 5-8.5。
40.根据权利要求26的方法，其中第一种组合物和第二种组合物通过同一个口服单元给药。
41.一种草酸降解组合物，所述组合物包括至少一种草酸降解酶，所述组合物包括一种浓缩的不可溶植物生物样品组分，其中所述组合物能够在PH值范围5. 0-8. O内pH下有效地降解草酸。
42.根据权利要求41的组合物，其中所述组合物还包括另一种在pH值I.9-6. 3范围内 PH值下具有活性的草酸降解酶。
43.根据权利要求41的组合物，其中所述至少一种草酸降解酶包括草酸氧化酶(OxOx) 和/或草酸脱羧酶(OxDC)中至少一种。
44.根据权利要求41的组合物,其中所述至少一种草酸降解酶来源于Bouganvillea buganvillea0
45.降低对象体内草酸含量的方法，包括给予所述对象有效治疗剂量的一种包括至少一种草酸降解酶的组合物，所述至少一种草酸降解酶包括一种在PH值范围5. 0-8.0内pH值下具有活性的酶，其中所述酶降解所述对象消化道内可溶性草酸。
46.根据权利要求45的方法，其中所述有效治疗剂量的所述组合物经口服给予所述对象。
47.根据权利要求45的方法，其中所述至少一种草酸降解酶包括草酸氧化酶(OxOx)和 /或草酸脱羧酶(OxDC)中至少一种。
48.根据权利要求45的方法，其中所述组合物的配方使所述至少一种草酸降解酶在所述对象胃内保持稳定。
全文摘要
本发明一方面是关于一种草酸降解组合物，其中包括至少一种草酸降解酶。该组合物包括一种浓缩的不可溶真菌生物样品组分，并且该组合物能够在pH值1.9及以上环境中有效地降解草酸。该组合物免受蛋白酶如胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶降解。该组合物能够耐受对象胃、小肠和/或大肠环境。
文档编号C12P1/00GK102725403SQ201080062401
公开日2012年10月10日 申请日期2010年11月23日 优先权日2009年11月25日
发明者李青山, 艾如·B·考利 申请人:凯普托杰姆有限责任公司