专利名称：一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒及其应用方法
技术领域：
本发明涉及一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒及其应用方法，应用于妇科阴道分泌物的细菌感染的快速筛查领域。
背景技术：
细菌性阴道病((Bacterial Vaginosis，简称BV)是育龄妇女最常见的阴道感染性疾病，占外阴阴道感染的40% _50%，近年来研究发现细菌性阴道病不仅与盆腔炎、阴道炎、泌尿系感染等妇科疾病有夫，还可以引起羊膜腔感染、胎膜早破、产褥感染、低出生体重、新生儿感染及新生儿黄疸等导致不良围产结局，因此越来越被人们重视。此病的典型临床症状为阴道异常分泌物明显增多，呈稀薄均质状或稀糊状，为灰 白色、灰黄色或乳黄色，带有特殊的鱼腥臭味。由于碱性前列腺液可造成胺类释放，故表现为性交时或性交后臭味加重。月经期阴道PH值升高，故经期时或经期后臭味也可加重。患者外阴有不适感，包括不同程度的外阴瘙痒，一般无明显时间性，但在休息状态及心情紧张状态下痒感更加明显。尚有不同程度的外服灼热感，有的患者出现性交痛。极少数患者出现下腹疼痛、性交困难及排尿异常感。阴道粘膜上皮在发病时无明显充血表现。本病常可合并其它阴道性传播疾病，故其临床表现可受到合并症的影响而有所不同。如当合并淋球菌感染时，阴道分泌物可表现为明显脓性状，并可出现尿痛、排尿困难等尿路刺激症状；合并滴虫感染时，可出现泡沫状阴道分泌物，且瘙痒加剧，呈奇痒；合并念珠菌感染吋，阴道分泌物可呈现为凝乳状或豆腐渣样。Amsel法是目前作为诊断BV传统的使用方法，该方法提供了以下四点诊断标准并规定至少三点标准符合，则可诊断为BV (I)薄均质的阴道分泌物，粘附于阴道壁但易于擦拭。(2)阴道PH大于4.7。(3)在阴道分泌物中见到线索细胞(clue cell)。(4)氨气味试验(whiff test)阳性。但四项指标均受外来因素的影响，pH与胺实验敏感性不足、特异性差，并受月经、精液、阴道灌洗、取材部位等多种因素影响，作为四项指标敏感度、特异性最高的线索细胞识别时主要受检验者的经验所限。ES-chenbaeh认为，将pH提高到4. 7诊断可能更准确。Spiegel等提出Gram染色诊断BV Gardner菌及其他致病菌存在；姆个油镜视野乳酸杆菌< 5个，Krohn等调查表明该实验特异性为95%，但敏感度只有62%，阳性预测值为76%。国产细菌性阴道病(BV)多胺快速检测试剂盒的原理是检测分泌物中胺的含量，但几乎所有的阴道感染都伴有胺的增加，其灵敏度可达98%，但特异度仅有50%左右。细菌性阴道病系列妇检试剂盒选取阴道分泌物的H202浓度、唾液酸苷酶、白细胞酯酶和多胺作为检测指标。H202直接由产H202的乳酸杆菌分泌，其浓度与乳酸杆菌的数量成正比，直接反应维持阴道正常内生态的乳酸杆菌数量，能直接反应阴道内生态状況。唾液酸酶是由阴道菌群中厌氧菌分泌的，其活性与厌氧菌数量成正比，酶活性高反映阴道内厌氧菌过度生长，特异性较好。临床资料分析结果显示与Amsel法比较，其灵敏度89. 4%、特异度95. 8%、阳性预测值82. 0%、阴性预测值97. 7%、符合率94. 7%，基本达到对BV筛查诊断要求。但有部分引发BV的厌氧菌不产生唾液酸酶或产酶量少，造成部分BV漏检。故将唾液酸酶活性与H202浓度结合分析作为临床诊断BV的指标，兼顾阴道内产H202乳酸杆菌的数量，減少了部分造成唾液酸酶假阴性或假阳性的发生，使诊断BV指标更客观。白细胞酯酶属广泛的非特异性指标，较敏感，阳性者提示阴道分泌物内有大量多核白细胞，结合清洁度结果，可帮助临床医生了解患者阴道壁有无实质性粘膜受损，给予消炎治疗。多胺是由阴道细菌自营酶分解阴道黏液蛋白，产生该类细菌的营养物质为多胺。正常阴道分泌物中只能检出少量的单胺，少数人可检测到多胺。阴道感染时，分泌物中可检出大量的单胺和多胺，这些胺类是阴道分泌物产生异味的主要原因。胺是碱性的，使分泌物PH増加。由于几乎所有的阴道感染都伴有胺的增加，因此，胺測定已在妇科检查中得到广泛使用。使用BV系列妇检试剂盒可帮助医生了解疗效和治愈标准的判定，给予重建阴道微生态平衡治疗。与传统检验方法相比，细菌性阴道病系列妇检试剂盒具有快速、操作简单、结果稳定、易判读，指标更客观，无需特殊设备等特点，可作为临床妇科评估患者阴道内微生态环境状況、白带异常病原体的初步确定、疗效的观察和治愈标准判定的指标。结合阴 道分泌物的清洁度、滴虫、霉菌检查，可取代传统白带常规检查的旧指标。在基层医院妇产科作为阴道分泌物异常患者、孕妇、妇科手术之前的常规筛及治愈标准的判定，有较好的临床应用价值。
发明内容
本发明是为避免上述细菌性阴道病传统诊断方法所存在的不足之处，提供ー种快速、操作简单、结果稳定、易判读，指标更客观的ー种细菌性阴道病系列妇检试剂盒及其应用。本发明提供了一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒，包括盒体，在所述的盒体上表面设置有四个反应孔，这四个反应孔分别是过氧化氢反应孔、白细胞酯酶反应孔、唾液酸苷酶反应孔、多胺反应孔，在所述的四个反应孔下面对应安装有过氧化氢活性试剂垫、白细胞酯酶活性试剂垫、唾液酸苷酶活性试剂垫、多胺活性试剂垫，所述的四个反应孔的上面设置有一封条，所述的盒体为长方体。所述的唾液酸酶活性试剂垫是由5-溴-4氯-3-吲哚神经氨酸、糖、血清蛋白、PH=6±0. 5的磷酸盐或醋酸盐缓冲液组成，其中5-溴-4氯-3-吲哚神经氨酸在溶液中的浓度是O. I 2g/L，糖在溶液中的浓度是50 200g/L，血清蛋白在溶液中的浓度是5 30g/L ；所述的白细胞酯酶活性试剂垫是由5-溴-4氯-3-吲哚こ酷、糖、血清蛋白、こ醇、PH = 6±0. 5的磷酸盐缓冲液组成，其中5-溴-4氯-3-吲哚こ酯在溶液中的浓度是20 100g/L，糖在溶液中的浓度是50 200g/L，血清蛋白在溶液中的浓度是5 30g/L，こ醇在溶液中的浓度是10 50% ;所述的过氧化氢活性试剂垫是由辣根过氧化物酶、こ醇、PH = 7±0. 5的磷酸盐缓冲液组成，其中辣根过氧化物酶在溶液中的浓度是O. I 2g/L，こ醇在溶液中的浓度是50 90% ；所述的多胺活性试剂垫是由亚硝基铁氰化钠、こ醇、水组成，其中亚硝基铁氰化钠在溶液中的浓度是O. I I. Og/L,こ醇在溶液中的浓度是50 90%。所述的活性试剂垫由活性试剂加在载体垫上干燥而成。
所述的载体垫可以是吸水纸、聚酯膜、玻璃纤维膜中的任意ー种。本发明的另ー技术方案是公开了一种细菌性阴道病系列妇检试剂的应用方法，其应用步骤为步骤I、取出反应装置、稀释液、显色液等试剂恢复置室温；步骤2、样本采集插入窥阴器，长棉拭子从阴道侧壁或后穹窿处尽可能多采集分泌物，滴加样本稀释液洗涤得样本液；步骤3、在反应装置的四个反应孔中每孔滴加样本液，之后在过氧化氢反应孔滴加过氧化氢显色液，在唾液酸酶反应孔中滴加唾液酸酶显色液，在多胺反应孔中滴加多胺显色液，置37°C温育10分钟，观察显色結果。所述的唾液酸酶显色液是O. 05 2%重氮试剂；
所述的过氧化氢显色液是O. 01 O. I %四甲基联苯胺溶液；所述的多胺显色液是I 5%的苯酚溶液和含O. I 1%次氯酸钠、O. I 1%氢氧化钠的溶液。所述的稀释液是O. 8 O. 9%氯化钠溶液。本发明具有以下明显的优势和有益效果I、细菌性阴道病系列妇检试剂盒具有快速、操作简单、结果稳定、易判读，指标更客观，无需特殊设备等特点。2、可作为临床妇科评估患者阴道内微生态环境状况、白带异常病原体的初步确定、疗效的观察和治愈标准判定的指标。3、结合阴道分泌物的清洁度、滴虫、霉菌检查，可取代传统白带常规检查的旧指标。4、在基层医院妇产科作为阴道分泌物异常患者、孕妇、妇科手术之前的常规筛及治愈标准的判定，有较好的临床应用价值。
图I为本发明一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒的结构示意图；图2为本发明一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒的侧面剖示图。其中1-盒体；2-多胺反应孔；3-唾液酸苷酶反应孔；4-白细胞酯酶反应孔；5-过氧化氢反应孔；6_封条；21_多胺活性试剂垫；31_唾液酸苷酶活性试剂垫；41_白细胞酯酶活性试剂垫；51_过氧化氢活性试剂垫。
具体实施例方式如图I、图2所示，一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒，包括盒体1，在所述的盒体上I表面设置有四个反应孔，这四个反应孔分别是过氧化氢反应孔5、白细胞酯酶反应孔4、唾液酸苷酶反应孔3、多胺反应孔2，在所述的四个反应孔下面对应安装有过氧化氢活性试剂垫51、白细胞酯酶活性试剂垫41、唾液酸苷酶活性试剂垫31、多胺活性试剂垫21，所述的四个反应孔的上面设置有一封条6，所述的盒体I为长方体。所述的唾液酸酶活性试剂垫31是由5-溴-4氯-3-吲哚神经氨酸、糖、血清蛋白、PH = 6±0. 5的磷酸盐或醋酸盐缓冲液组成，其中5-溴-4氯-3-吲哚神经氨酸在溶液中的浓度是O. I 2g/L，糖在溶液中的浓度是50 200g/L，血清蛋白在溶液中的浓度是5 30g/L ；所述的白细胞酯酶活性试剂垫41是由5-溴-4氯-3-吲哚こ酷、糖、血清蛋白、こ醇、PH = 6±0. 5的磷酸盐缓冲液组成，其中5-溴-4氯-3-吲哚こ酯在溶液中的浓度是20 100g/L，糖在溶液中的浓度是50 200g/L，血清蛋白在溶液中的浓度是5 30g/L，こ醇在溶液中的浓度是10 50% ;所述的过氧化氢活性试剂垫51是由辣根过氧化物酶、こ醇、PH = 7±0. 5的磷酸盐缓冲液组成，其中辣根过氧化物酶在溶液中的浓度是O. I 2g/L，こ醇在溶液中的浓度是50 90% ；所述的多胺活性试剂垫21是由亚硝基铁氰化钠、こ醇、水组成，其中亚硝基铁氰化钠在溶液中的浓度是O. I I. Og/L,こ醇在溶液中的浓度是50 90% ; 所述的活性试剂垫由活性试剂加在载体垫上干燥而成。所述的载体垫可以是吸水纸、聚酯膜、玻璃纤维膜中的任意ー种。本发明的另ー技术方案是公开了一种细菌性阴道病系列妇检试剂的应用，其应用步骤为步骤I、取出反应装置、稀释液、显色液等试剂恢复置室温；步骤2、样本采集插入窥阴器，长棉拭子从阴道侧壁或后穹窿处尽可能多采集分泌物，滴加样本稀释液洗涤得样本液；步骤3、在反应装置的四个反应孔中每孔滴加样本液，之后在过氧化氢反应孔滴加过氧化氢显色液，在唾液酸酶反应孔中滴加唾液酸酶显色液，在多胺反应孔中滴加多胺显色液，置37°C温育10分钟，观察显色結果。所述的唾液酸酶显色液是O. 05 2%重氮试剂；所述的过氧化氢显色液是O. 01 O. I %四甲基联苯胺溶液；所述的多胺显色液是I 5%的苯酹溶液和含O. I I %次氯酸钠、O. I 1%氢氧化钠的溶液。所述的稀释液是O. 8 O. 9%氯化钠溶液。最后应说明的是以上实施例仅用以说明本发明而并非限制本发明所描述的技术方案；因此，尽管本说明书參照上述的各个实施例对本发明已进行了详细的说明，但是，本领域的普通技术人员应当理解，仍然可以对本发明进行修改或等同替换；而一切不脱离本发明的精神和范围的技术方案及其改进，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。
权利要求
1.一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒,包括盒体,其特征在于在所述的盒体上表面设置有四个反应孔，这四个反应孔分别是过氧化氢反应孔、白细胞酯酶反应孔、唾液酸苷酶反应孔、多胺反应孔，在所述的四个反应孔下面对应安装有过氧化氢活性试剂垫、白细胞酯酶活性试剂垫、唾液酸苷酶活性试剂垫、多胺活性试剂垫，所述的四个反应孔的上面设置有一封条，所述的盒体为长方体。
2.根据权利要求I所述的ー种细菌性阴道病系列妇检试剂盒，其特征在于所述的过氧化氢活性试剂垫、白细胞酯酶活性试剂垫、唾液酸苷酶活性试剂垫、多胺活性试剂垫，均为活性试剂加在载体垫上干燥而成。
3.根据权利要求2所述的ー种细菌性阴道病系列妇检试剂盒，其特征在于所述的载体垫为吸水纸、聚酯膜、玻璃纤维膜中的任意ー种。
4.根据权利要求I所述的ー种细菌性阴道病系列妇检试剂盒，其特征在于所述的唾液酸酶活性试剂垫是由5-溴-4氯-3-吲哚神经氨酸、糖、血清蛋白、PH = 6±0. 5的磷酸盐或醋酸盐缓冲液组成，其中5-溴-4氯-3-吲哚神经氨酸在溶液中的浓度是O. I 2g/L，糖在溶液中的浓度是50 200g/L，血清蛋白在溶液中的浓度是5 30g/L ； 所述的白细胞酯酶活性试剂垫是由5-溴-4氯-3-吲哚こ酷、糖、血清蛋白、こ醇、PH =6±0. 5的磷酸盐缓冲液组成，其中5-溴-4氯-3-吲哚こ酯在溶液中的浓度是20 IOOg/L，糖在溶液中的浓度是50 200g/L，血清蛋白在溶液中的浓度是5 30g/L，こ醇在溶液中的浓度是10 50% ; 所述的过氧化氢活性试剂垫是由辣根过氧化物酶、こ醇、PH = 7±0. 5的磷酸盐缓冲液组成，其中辣根过氧化物酶在溶液中的浓度是O. I 2g/L，こ醇在溶液中的浓度是50 90% ； 所述的多胺活性试剂垫是由亚硝基铁氰化钠、こ醇、水组成，其中亚硝基铁氰化钠在溶液中的浓度是O. I I. Og/L,こ醇在溶液中的浓度是50 90%。
5.根据权利要求I所述制得一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒应用方法，其特征在于应用步骤为 步骤I、取出反应装置、稀释液、显色液等试剂恢复置室温； 步骤2、样本采集插入窥阴器，长棉拭子从阴道侧壁或后穹窿处尽可能多采集分泌物，滴加样本稀释液洗涤得样本液； 步骤3、在反应装置的四个反应孔中每孔滴加样本液，之后在过氧化氢反应孔滴加过氧化氢显色液，在唾液酸酶反应孔中滴加唾液酸酶显色液，在多胺反应孔中滴加多胺显色液，置37°C温育10分钟，观察显色結果。
6.根据权利要求5所述的ー种细菌性阴道病系列妇检试剂的应用方法，其特征在于所述的唾液酸酶显色液是O. 05 2%重氮试剂；所述的过氧化氢显色液是O. 01 O. 1%四甲基联苯胺溶液；所述的多胺显色液是I 5%的苯酚溶液和含O. I 1%次氯酸钠、O. I I %氢氧化钠的溶液。
7.根据权利要求5所述的ー种细菌性阴道病系列妇检试剂的应用方法，其特征在于所述的稀释液是O. 8 O. 9%氯化钠溶液。
全文摘要
本发明公开了一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒，包括盒体，在所述的盒体上表面设置有四个反应孔，这四个反应孔分别是过氧化氢反应孔、白细胞酯酶反应孔、唾液酸苷酶反应孔、多胺反应孔，在所述的四个反应孔下面对应安装有过氧化氢活性试剂垫、白细胞酯酶活性试剂垫、唾液酸苷酶活性试剂垫、多胺活性试剂垫，所述的四个反应孔的上面设置有一封条，所述的盒体为长方体。本发明还公开了一种细菌性阴道病系列妇检试剂盒的应用方法，本发明具有体积小、快速、操作简单、结果稳定、易判读，指标更客观，无需特殊设备的优点。
文档编号C12Q1/04GK102690861SQ20111007324
公开日2012年9月26日 申请日期2011年3月25日 优先权日2011年3月25日
发明者张超, 洪莲, 陈奉玲 申请人:安徽深蓝医疗科技有限公司