专利名称：一种耐氧耐酸性长双歧杆菌的制作方法
技术领域：
本发明涉及食品科学技术领域，尤其是一种耐氧耐酸性长双歧杆菌。
背景技术：
2002年，FA0/WH0将益生菌定义为“活的，服用足够数量后对宿主具有健康影响的微生物”。作为益生菌的细菌应该具备以下条件(1)对宿主有益；( 无毒性作用和无致病作用；C3)能在消化道存活；(4)能适应胃酸和胆盐；( 能在消化道表面定殖；(6)能够产生有用的酶类和代谢物；(7)在加工和贮存过程中能保持活性；(8)具有良好的感官特性。2005年5月四日我国家食品药品监督管理局颁布了《益生菌类保健食品申报与评审规定》，并公布了一批可用于保健食品的益生菌菌种包括两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)、青春双歧杆菌 (Bifidobacterium adolescentis)、德氏ILfflifi呆力口禾1J亚禾中(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、干酪乳杆菌干酪亚种 (Lactobacillus casei subsp. Casei)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、罗伊氏乳杆菌(LactcAacillus reuteri)。目前用于制造功能食品的益生菌主要是乳酸杆菌类和双歧杆菌类，不同类型的益生菌作用强弱是有差异的，相比而言，双歧杆菌调节胃肠道功能更强一些。双歧杆菌广泛存在于人和暖体动物的肠道、女性生殖道及反刍动物的瘤胃等环境中，它在婴儿和成人的肠道内都占有很高的比例，是母乳喂养婴幼儿肠道的主要微生物。早在1899年，由法国巴斯德研究所的Henry Tissier第一次从母乳喂养婴幼儿的粪便中分离得到双歧杆菌，此后，它的益生作用越来越受到人们的重视，现在已经成为益生菌研究领域的焦点。双歧杆菌的保健功能包括(1)抑制病原菌，防止腹泻和便秘，对腐败菌、病原性大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、痢疾志贺菌、变形菌等具有抑制作用；( 防治高血压和动脉硬化，双歧杆菌可以将胆固醇转化为人体不吸收的类固醇，降低血液中胆固醇的浓度，对高血压和动脉硬化有一定的防治作用，双歧杆菌还可以降低血清胆固醇和甘油二酯，具有改善脂质代谢紊乱的作用；(3)营养作用，双歧杆菌能合成多种维生素，如VB1, VB2, VB6, VB12, 叶酸，尼古酸，泛酸等，代谢产生的有机酸可降低环境中的PH值和肪值，有利于二价铁、钙及VD的吸收；(4)免疫和抗衰老作用，激活机体免疫系统，使之保持免疫监视和免疫清除功能，不断地清除衰老、死亡的细胞及突变细胞，使机体不至因死亡细胞、废物堆积而衰老； 双歧杆菌能增加血液中超氧化物歧化酶的活性和含量，从而减少自由基参与的氧化反应导致的机体衰老；(5)减少肠源性内毒素的产生和吸收，双歧杆菌在肠道内可吸收利用含氮有害物质，抑制产胺的腐败菌，降低肠道内的PH值，使氨变为难于吸收的离子型，达到降低血氨的功效，从而减小对肝的危害；(6)抑制肿瘤的作用，双歧杆菌可以激活机体的免疫系统中的巨噬细胞，增强免疫功能，减少体内癌诱变剂的含量，使产生癌诱变剂的酶失活。另外，肠道腐生菌在代谢中会产生许多胺类致癌物质，有的还能将一些致癌前体物转化为致癌物，双歧杆菌通过抑制腐生菌的生长和分解致癌物质而起到预防肠道癌的作用；(7)改善和调节肠道菌群失调，菌群失调(双歧杆菌大量减少)可导致肠道功能减退，儿童可引起迁延和复发性感染，高水平适宜的双歧杆菌在肠道通过可以阻止病原体的致病作用，从而就可以纠正肠菌群失调引起的腹泻。当然，人体内的双歧杆菌要在达到一定数量之后才能发挥其益生作用，目前普遍认为每克肠内含物中的活双歧杆菌量至少要达到IXIO7个左右，而且还要在其特定的肠道部位才发挥作用。影响双歧杆菌最终存活率的因素有很多，包括菌种自身、氧分压、PH值、胆盐含量等，双歧杆菌是专性厌氧菌，且不耐酸，在氧气和酸度较低的条件下，生长缓慢且容易死亡，造成培养的难度大，生产的成本高，给生产双歧杆菌制品的厂家带来很大的困难。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，通过对长双歧杆菌进行连续的耐氧和耐酸驯化，得到耐氧耐酸性长双歧杆菌CC-I，本菌种培养后活菌数能达到4. 7 X IO7CFU/
mLo本发明的目的是通过以下技术方案实现的一种耐氧耐酸性长双歧杆菌，名称为CC-1，分类名称Bif idcAacterium longum,保藏编号为=CGMCC No. 4730，保藏日期2011年4月2日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。而且，所述耐氧耐酸性长双歧杆菌CC-I的活菌数为4. 7 X 107CFU/mL。本发明的优点和积极效果如下本发明有效改善了双歧杆菌的生理生化性能，增强了双歧杆菌对氧和酸的耐受性，将耐氧耐酸长双歧杆菌在PH值4. 0的PTYG液体培养基中于普通有氧条件下37°C培养， 由倾注法活菌计数结果可知，耐氧耐酸长双歧杆菌CC-I的活菌数能达到4. 7 X 107CFU/mL, 该浓度对双歧杆菌制品的研究与应用将有极其重要的作用。
图1是本发明的耐氧耐酸长双歧杆菌CC-I和初始长双歧杆菌在pH值7. 0的PTYG 液体培养基中于厌氧条件下37°C培养后的菌体OD6tltl值的变化曲线。图2是本发明的耐氧耐酸长双歧杆菌CC-I和初始长双歧杆菌在pH值7. 0的PTYG 液体培养基中于厌氧条件下37 °C培养后的菌体pH值的变化曲线。
具体实施例方式下面结合实施例，对本发明进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的， 不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。1.长双歧杆菌的驯化双歧杆菌基础培养基PTYG成分大豆蛋白胨5g，胰蛋白胨5g，酵母浸膏10g，葡萄糖10g，L-半胱氨酸盐酸盐0. 5g，微量盐溶液40mL，水IOOOmL,调pH值7. 0。微量盐溶液成分为(IOOOmL 水)=CaCl2 0. 2g, MgSO4 · 7H20 :0. 48g, KH2PO4 :1. 0g, NaHCO3 :10. 0g, K2HPO4 1. 0g, NaCl :2. Og0
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初始菌株为实验室现有长双歧杆菌。接种量5%，培养温度37°C(1)长双歧杆菌的耐氧驯化通过逐渐增加培养基中氧气分压的方法来驯化，在每个氧气分压梯度下传代5-8次反复驯化，再接种到下一个氧气分压梯度中培养，每次耐氧驯化后挑选耐氧的长双歧杆菌单菌落。本发明通过以下途径来增加培养基中的氧气分压一是在厌氧箱中培养，每次增加0. 02个氧分压，最后再转到普通培养条件下培养；二是在改变培养环境的同时，在培养器皿一定的条件下，逐渐减少装液量，即采用IOOmL的厌氧瓶，装液量依次为100mL、80mL、 60mL、40mL、20mL。(2)长双歧杆菌的耐酸驯化将耐氧驯化完得到的耐氧长双歧杆菌再进行耐酸驯化，通过逐渐降低培养基PH值的方法驯化，pH值依次为7. 0,6. 5,6. 0,5. 5,5. 0,4. 5,4. 0，每个PH值梯度传代5-8次，反复驯化，再接种到下一个pH值，每次耐酸驯化后挑选耐酸的长双歧杆菌单菌落，最终得到生长能力最强的CC-I。2.耐氧耐酸长双歧杆菌的生长特性通过分析比较初始菌和耐氧耐酸长双歧杆菌生长的菌体0D_值、pH值、及活菌数等指标，从而可知耐氧耐酸长双歧杆菌的生长特性。由耐氧耐酸长双歧杆菌CC-I和初始菌同时在pH值7. 0的PTYG液体培养基中于厌氧条件下37°C培养后的菌体OD6tltl值和pH值的变化曲线可以看出，耐氧耐酸的菌株生长情况要好，并且延滞期略有缩短，活菌数相对较高，产酸能力也有所提高。将耐氧耐酸长双歧杆菌CC-I和初始菌同时在pH值4. 0的PTYG液体培养基中于普通有氧条件下37°C培养，由倾注法活菌计数结果可知，耐氧耐酸长双歧杆菌的活菌数能达到4. 7X107CFU/mL,而初始菌株只能达到2. 1 X 103CFU/mL。
权利要求
1.一种耐氧耐酸性长双歧杆菌，其特征在于名称为CC-1，分类名称BifidcAacterium Iongum，保藏编号为CGMCC No. 4730，保藏日期2011年4月2日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
2.根据权利要求1所述的耐氧耐酸性长双歧杆菌，其特征在于所述耐氧耐酸性长双歧杆菌CC-I的活菌数为4. 7X 107CFU/mL。
全文摘要
本发明涉及一种耐氧耐酸性长双歧杆菌，其特征在于名称为CC-1，分类名称Bifidobacterium longum，保藏编号为CGMCC No.4730，保藏日期2011年4月2日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本发明有效改善了双歧杆菌的生理生化性能，增强了双歧杆菌对氧和酸的耐受性，将耐氧耐酸长双歧杆菌在pH值4.0的PTYG液体培养基中于普通有氧条件下37℃培养，由倾注法活菌计数结果可知，耐氧耐酸长双歧杆菌CC-1的活菌数能达到4.7×107CFU/ml，该浓度对双歧杆菌制品的研究与应用将有极其重要的作用。
文档编号C12R1/01GK102206599SQ20111008949
公开日2011年10月5日 申请日期2011年4月11日 优先权日2011年4月11日
发明者曹月婷, 李江, 李玉, 王春霞, 王稳航, 路福平 申请人:天津科技大学