专利名称：脆性x综合症致病基因突变检测试剂盒及应用的制作方法
技术领域：
本发明属生物技术领域，具体涉及检测脆性X综合症致病基因是否发生突变的试剂盒。
背景技术：
脆性X综合征是一种发病率仅次于先天愚型的遗传性智能低下综合征，发病率占全部儿童的0. 05%，呈X连锁遗传，占X连锁智能低下的40%。其外显率因性别不同有差异，男性80%，女性30%。95%以上的脆性X综合征患者发病的分子遗传学基础是FMRl基因(CGG)n结构扩展的动态突变引起的，约5%以下则是由于FMRl基因的错义突变和缺失型突变影响了 FMRP的正常结构导致的。FMRl基因位于染色体Xq27. 3，在基因组序列约381Λ，由17个外显子和16个内含子组成，编码脆性X智能低下基因蛋白(FMRP)。FMRl基因是一个高度保守的基因，其5’ 端外显子上的非翻译区有一个(CGG) n三核苷酸串联重复序列，(CGG)n在重复片段长度和 AGG嵌入模式上都存在多态性，并且可以遗传，在其上游大约250bp处有一个CpG岛。正常 FMRl基因(CGG)n中η介于7-60之间。当η扩展到60-200时，携带者虽表型正常，但在传代过程中易发生进一步扩展，称FMRl基因的前突变。前突变CpG岛一般不甲基化，FMRl基因具有相对正常的转录和蛋白质水平，不表现出临床症状。当η扩展达200以上时，男性表现100%为典型的脆性X综合征，女性也有30%-50%表现轻重程度不等的智能低下。这种 FMRl基因的突变称全突变，前突变至全突变的扩展是严格母系的，全突变(066) 重复序列大量扩展，引起FMRl 5’(CGG) 侧CpG岛异常甲基化，使FMRl基因失活，导致FMRP的缺失引起智能低下。脆性X综合征发病率高，临床表现复杂，遗传规律独特，目前无有效的治疗方法， 要降低其发病率，关键是查出携带者及病人，然后通过遗传咨询、产前诊断、阻止患儿出生。
发明内容
本发明的目的是提供一种采用DNA测序技术检测脆性X综合症致病基因FMRl是否突变的试剂盒。本检测试剂盒主要包括以下成分(I)FMRl基因第1到第17外显子区PCR扩增与测序引物20对，各对引物序列见表 1 ；(2)常规PCR扩增试剂，如dNTP、Taq DNA聚合酶等；(3)常规PCR产物纯化试剂，如SAP酶、ExoI酶等；(4)常规DNA测序试剂，如BigDye mix、EDTA溶液、乙醇溶液、HIDI溶液等。表1 FMRl基因第1-17外显子区的PCR扩增与测序引物序列
权利要求
1.一种检测脆性X综合征致病基因FMRl基因是否发生突变的试剂盒，其特征在于包括以下成分=(I)FMRl基因第1到第17外显子区PCR扩增与测序引物20对，O)PCR扩增试剂，(3) PCR产物纯化试剂，G) DNA测序试剂；所述的20对引物序列如下第 1 对F -ctccgtttcggtttcacttd'，R -agtccttccctcccaacaad' 第 2 对F -cttcaaaaactgaccttcatttg-S'，R -ccattcctgaaaagcactca-3‘ 第 3 对F -ttgtgtggtatcttctctcctttg-S'，R -ccattcctgaaaagcactca-3‘ 第 4 对F :5，-cctcggggtacatagacagg-3，，R :5，_tgaccaacagaaacatactgaaca_3， 第 5 对F -tgttcagtatgtttctgttggtca-3'，R -aagtttaaacaagcgcaagg-3‘ 第 6 对- ttcagaaatgtacagaaaaggagcta-3'，R 5， -gaacctaaggaattgttaagaagca-3‘第 7 对F -ttcagaaatgtacagaaaaggagcta-3'，R -tttccaactatagaacctaaggaat tg-3，第 8 对F -Sacccctcatatacagggtcaa-S', R -tttcaattaaatgataccctcca-S' 第 9 对F :5，-aaaaagtacttaggctgtgagagg-3，，R :5，_cattgtgcacatgtaccctaaaa_3， 第 10 对:F -tgaaaagagtctctactttggttttg-3'，R -cagcaggcatgcttgataat-3‘ 第 11 :F- ttcggtaattttataaaccaaaactg-S', R 5， -gcctacaagtctaaccagagaaaa-3‘第 12 对:F -aaaagtcctgcagtgaaagtcc-S'，R -Bctcctccctccagtcccta-S' 第 13 对:F :5，-catttgtatacctgctgttcacc-3，，R :5，-cagtgttttgcacaggctaga-3， 第 14 对:F :5，-aaggagatcattcaatttcctg-3，，R :5，_cccactgtgaattggaaacc_3， 第 15 对:F :5，-gaagagttttggattaccc-3，，R :5，-gggagagatgggatcttggt-3， 第 16 对:F -ttcagattctgtggttggttt-3'，R -cataaactggatttgtaatctttgaa-3‘ 第 17 对:F -gcacttcttctgttctcatctcd'，R -cacacacatttcagggtcca-3‘ 第 18 对:F -tctcgtatagaagtcttcatgaaatg-3'，R -aacaaaaccaaaccccaaca-3‘ 第 19 对F 5 ‘ - cagaattggaaaagactaagatcg-3'，R -ttttaaaagcaatcatttgtaagga-3‘ 第 20 对:F Igacatttgtttggttatagtgcaa-S^Rf -ttttgccttttaagggctcat-3'0
2.根据权利1所述的试剂盒用于检测FMRl基因突变体。
全文摘要
本发明公开了一种检测脆性X综合症致病基因FMR1基因是否发生突变的试剂盒。该试剂盒的主要成分包括(1)FMR1基因第1到第17外显子区PCR扩增与测序引物20对，(2)PCR扩增试剂，(3)PCR产物纯化试剂，(4)DNA测序试剂。本发明的试剂盒用于检测假脆性X综合症致病基因FMR1的突变体，可以快速方便地查出致病基因的携带者以及病人，可应用于产前诊断、阻止患儿出生，降低脆性X综合症的发病率。
文档编号C12Q1/68GK102230000SQ20111014860
公开日2011年11月2日 申请日期2011年6月3日 优先权日2011年6月3日
发明者王桢媚, 秦胜营, 贺林, 陈伟坚, 陈培华, 马端 申请人:上海佰真基因组学与人类健康研究院, 上海佰真生物科技有限公司