专利名称：一种slc22a6基因多态性检测特异性引物和液相芯片的制作方法
技术领域：
本发明属于分子生物学领域，涉及医 学和生物技术，具体的是涉及一种SLC22A6基因多态性检测特异性引物和液相芯片。
背景技术：
SLC22A6 基因(solute carrier family 22 member 6)编码有机阴离子转运蛋白I (organic anion transporterl, 0AT1)蛋白，转运蛋白属于溶质载体超家族,是动物及人体内重要的膜转运蛋白，广泛分布于胃肠道、肝脏、肾脏、血脑屏障等处，介导内外源物质的跨细胞转运。目前，对SLC22A6基因多态性进行检测和分析的方法很少，主要有直接测序法和PCR-RFLP分析法，其中最常用的方法有PCR-RFLP分析法。PCR-RFLP法是基于基因突变造成的限制性内切酶识别位点的改变，如位点丢失或产生新位点，通过PCR扩增某一特定片段，再用限制性内切酶酶切扩增产物，电泳观察片段的大小，这种方法用于检测酶切位点改变的基因突变，可直接判断基因型，但该法不能用于没有产生新酶切位点的基因突变检测。再次，以上这些方法都存在着检测通量的局限性，每次只能检测一种突变类型，不能满足实际应用的需要。本发明目标检测的SLC22A6基因突变位点，如表所示
权利要求
1.一种SLC22A6基因多态性检测液相芯片，其特征是，包括有 (A).针对不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物每种ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为针对G129A位点的SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 8 ;针对A109T位点的SEQ ID NO. 9和SEQ ID NO. 10 ;和 / 或针对 G108C 位点的 SEQ ID NO. 11 和 SEQ ID NO. 12 ;所述 tag 序列选自 SEQ ID NO. I SEQ ID NO. 6 ； (B).有anti-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球,所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti-tag序列选自SEQ ID NO. 13 SEQ ID NO. 18，且所述anti-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对； (C).用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。
2.根据权利要求I所述的SLC22A6基因多态性检测液相芯片，其特征是，所述扩增引物为:针对 G129A位点的 SEQ ID NO. 19 和 SEQ ID NO. 20 ;针对 A109T 位点的 SEQ ID NO. 21和 SEQ ID NO. 22 ;和 / 或针对 G108C 位点的 SEQ ID NO. 23 和 SEQ ID NO. 24。
3.根据权利要求I所述的SLC22A6基因多态性检测液相芯片，其特征是，所述ASPE引物为针对G129A位点的由SEQ ID NO. I和SEQ ID NO. 7组成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 8组成的序列；针对A109T位点的由SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 9组成的序列及由SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 10组成的序列；和/或针对G108C位点的由SEQ ID NO. 5和SEQ ID NO. 11组成的序列及由SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 12组成的序列。
4.根据权利要求I所述的SLC22A6基因多态性检测液相芯片，其特征是， (A).所述ASPE弓丨物为针对G129A位点的由SEQID NO. I和SEQ ID NO. 7组成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 8组成的序列；针对A109T位点的由SEQ ID NO. 3和SEQID NO. 9组成的序列及由SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 10组成的序列；和针对G108C位点的由SEQ ID NO. 5和SEQ ID NO. 11组成的序列及由SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 12组成的序列； (B).有anti-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球,所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti-tag序列选自SEQ ID NO. 13 SEQ ID NO. 18，且所述anti-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对； (C).所述扩增引物为:针对G129A位点的SEQID NO. 19和SEQ ID NO. 20 ;针对A109T位点的 SEQ ID NO. 21 和 SEQ ID NO. 22 ;和针对 G108C 位点的 SEQ ID NO. 23 和 SEQ IDNO. 24。
5.根据权利要求1-4任一项所述的SLC22A6基因多态性检测液相芯片，其特征是，所述间隔臂为5-10个T。
6.用于SLC22A6基因多态性检测液相芯片的特异性引物，其特征是，所述特异性引物序列为针对G129A位点的SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 8 ;针对A109T位点的SEQ ID NO. 9和 SEQ ID NO. 10 ;和 / 或针对 G108C 位点的 SEQ ID NO. 11 和 SEQ ID NO. 12。
全文摘要
本发明公开了一种SLC22A6基因多态性检测相芯片和特异性引物，该液相芯片主要包括有每种由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成的ASPE引物，所述特异性引物序列为针对G129A位点的SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8；针对A109T位点的SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10；针对G108C位点的SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12；有anti-tag序列包被的微球；扩增引物。本发明所提供的检测液相芯片的检测结果与测序法的吻合率高达100％，实现多个突变位点的野生型和突变型并行检测。
文档编号C12Q1/68GK102952867SQ20111025123
公开日2013年3月6日 申请日期2011年8月29日 优先权日2011年8月29日
发明者许嘉森, 郭靖 申请人:广州益善生物技术有限公司