专利名称：一种鱼骨小分子多肽螯合钙及制备方法
技术领域：
本发明属于营养食品或功能性食品加工技术领域，具体涉及一种鱼骨小分子多肽螯合钙粉，以及它的制备方法。
背景技术：
鱼骨中的钙含量丰富，与人体骨骼钙的组成相似，是一种优良的天然钙源。但鱼骨中的钙主要是以羟基磷灰石形式存在，不利于人体吸收。采取生物或化学方法提高鱼骨中钙的溶出率是增加钙的利用率的常用途径。目前主要采用酶解或酸处理(醋酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸)等方法制备鱼骨活性钙粉，可以提高钙的溶出率，有利于人体吸收。蛋白多肽是蛋白质经蛋白酶降解后得到的分子量约为2 IOkD的具有特殊生理活性的生物活性肽。如专利《一种鱼骨生物活性多肽钙粉及制备方法》(CN101731666A)公开了将鱼骨蛋白多肽粉和可溶性钙直接混合得到的鱼骨生物活性多肽钙粉，但并没有进行螯合，因此，其产品中钙的吸收效果和应用范围受到较大的限制。经检索，没有发现有关鱼骨小分子多肽与鱼骨钙通过螯合作用产生的鱼骨小分子多肽螯合钙粉的报道。
发明内容
本发明目的在于提供一种鱼骨小分子多肽螯合钙粉。本发明另一目的在于提供上述鱼骨小分子多肽螯合钙粉的制备方法。本发明还一目的在于提供上述鱼骨小分子多肽螯合钙粉作为食品添加剂或营养食品直接食用的用途。为实现上述目的，本发明的技术方案如下本发明一种鱼骨小分子多肽螯合钙粉，按照如下方法制备(1)将冷冻的鱼骨解冻，去除鱼骨表面残留的鱼肉、清洗干净；在压力为0. 145 0. 165Mpa、温度为110 120°C条件下蒸煮鱼骨15 20min，再用组织捣碎机将鱼骨打浆， 经冷却、浙干，得到鱼骨泥；冻结至-5 -10°C保存；(2)按照水与鱼骨泥之间质量比为1. 5 2. 5 1的比例，向步骤⑴所得冷冻的鱼骨泥中加入水解冻，然后搅拌3 6min，得鱼骨浆；按照复合蛋白酶与鱼骨浆之间质量比为1 450 500的比例向鱼骨浆中加入复合蛋白酶，然后在50 70°C、pH为6. 5 7. 5 条件下进行酶解反应10 30min ；再在90 95°C下保温3 5min，接着在室温、4000 6000g条件下离心3 5min，去脂肪，分别取上清液和沉淀物；(3)用分子量为3ku的过滤膜超滤步骤( 所得的上清液2 3次，收集滤液，浓缩，得到鱼骨小分子多肽液；(4)将步骤( 所得的沉淀物用水清洗、烘干、粉碎，得鱼骨粉；按照鱼骨粉与复合酸溶液之间Ig 5 IOmL重量体积比将鱼骨粉置于复合酸中进行酸化处理30 60min， 得到鱼骨钙液；所述复合酸溶液的浓度为10 20% ；
(5)将步骤( 所得鱼骨小分子多肽液和步骤(4)所得鱼骨钙液混合于生物反应器中搅拌3 5min，然后在40 50°C，pH值为7. 5 8. 5下，于生物反应器中搅拌螯合反应20 40min，干燥，得鱼骨小分子多肽螯合钙粉。上述鱼骨小分子多肽螯合钙粉步骤(1)中所述的鱼骨为鲽鱼鱼骨。上述鱼骨小分子多肽螯合钙粉步骤O)中所述的复合蛋白酶由风味蛋白酶和木瓜蛋白酶组成，其中风味蛋白酶和木瓜蛋白酶之间的质量比为1 1。上述鱼骨小分子多肽螯合钙粉中步骤中所述的复合酸溶液由柠檬酸和乳酸组成，柠檬酸和乳酸之间的体积比为1 1 ；其中所述柠檬酸的浓度为10 20%;所述乳酸的浓度为10 20%。上述鱼骨小分子多肽螯合钙粉步骤(1)中所述的用组织捣碎机将鱼骨打浆时组织捣碎机的转速为12000rpm。上述鱼骨小分子多肽螯合钙粉的制备方法，包括如下步骤(1)将冷冻的鱼骨解冻，去除鱼骨表面残留的鱼肉、清洗干净；在压力为0. 145 0. 165Mpa、温度为110 120°C条件下蒸煮鱼骨15 20min，再用组织捣碎机将鱼骨打浆， 再经冷却、浙干，得到鱼骨泥；冻结至-5 -10°C保存；(2)按照水与鱼骨泥之间质量比为1. 5 2. 5 1的比例，向步骤(1)所得冷冻的鱼骨泥中加入水解冻，搅拌3 6min，得鱼骨浆；按照复合蛋白酶与鱼骨浆之间质量比为 1 450 500的比例向鱼骨浆中加入复合蛋白酶，然后在50 70°C、pH为6. 5 7. 5条件下进行酶解反应10 30min ；再在90 95°C下保温3_5min，接着在室温、4000 6000g 条件下离心3 5min，去脂肪，分别取上清液和沉淀物；(3)用分子量为3ku的过滤膜超滤步骤( 所得的上清液2 3次，收集滤液，浓缩，得到鱼骨小分子多肽液；(4)将步骤( 离心所得的沉淀物用水清洗、烘干、粉碎，得鱼骨粉；按照鱼骨粉与复合酸溶液之间Ig 5 IOmL重量体积比将鱼骨粉置于复合酸中进行酸化处理30 60min，得到鱼骨钙液；所述复合酸溶液的浓度为10 20% ；(5)将步骤(3)所得到的鱼骨小分子多肽液和步骤⑷所得到的鱼骨钙液混合于生物反应器中搅拌3 5min，然后在40 50°C，pH值为7. 5 8. 5下，于生物反应器中搅拌螯合反应20 40min，干燥，得鱼骨小分子多肽螯合钙粉。上述制备方法步骤(1)中所述的鱼骨为鲽鱼鱼骨。上述制备方法步骤O)中所述的复合蛋白酶由风味蛋白酶和木瓜蛋白酶组成，它们之间的质量比为1 1。上述制备方法步骤(4)中所述的复合酸溶液由柠檬酸和乳酸组成，它们之间的体积比为1 1 ；其中所述柠檬酸的浓度为10 20% ；所述乳酸的浓度为10 20%。上述制备方法步骤(1)中所述的用组织捣碎机将鱼骨打浆时组织捣碎机的转速为 12000rpmo本发明具有的优点和有益效果(1)、本发明鱼骨小分子多肽螯合钙粉的钙螯合率高，可达90%以上；其次，钙的生物吸收率高，可达70%以上。( 、本发明鱼骨小分子多肽螯合钙粉无副作用，产品有淡淡的乳香味，具体较好的风味。(3)、本发明制备方法简便易行，成本低。(4)、本发明所制备的鱼骨小分子多肽螯合钙粉以多肽的整体形式直接从肠黏膜吸收，从而免遭一些理化因素，如PH值、脂类、纤维、草酸、植酸、磷酸盐等的影响，有效解决了传统钙源溶解性差、吸收率低、副作用大、产生结石等问题。(5)、与传统补钙制剂如磷酸钙、碳酸钙、葡萄糖酸钙、醋酸钙、乳酸钙等相比，本发明鱼骨小分子多肽螯合钙粉既能满足生命体对钙元素的需要，又能达到补充蛋白多肽的双重功效。
具体实施例方式实施例1鱼骨小分子多肽螯合钙粉的制备(1)取鲽鱼骨1000克，经解冻、去表面残留的鱼肉、清洗，在压力为0. 165Mpa、温度为120°C条件下蒸煮鱼骨20min，再用组织捣碎机在12000转/分下打浆，冷却、浙干，得到 380克鱼骨泥，冻结至-10°C，备用；(2)向冷冻的鱼骨泥中加入水760mL解冻，然后搅拌5分钟，加复合蛋白酶(风味蛋白酶和木瓜蛋白酶以质量比1 1混合)2.5克，在60°〇、 !1为7.0条件下进行酶解反应 20min,再在95°C下保温3分钟灭酶，冷却至室温后6000g离心％iin，去脂肪，得到上清液和沉淀物。(3)对步骤( 所得的上清液经过分子量为3ku的过滤膜超滤2次，得到鱼骨小分子多肽液450ml。(4)对步骤( 所得的离心沉淀物进行清洗、烘干、粉碎，得鱼骨粉，鱼骨粉经过复合酸(柠檬酸和乳酸按照1 1体积比混合)酸化(鱼骨粉与12%的酸溶液以 Ig IOml (w/v)处理40min，得到鱼骨钙液150ml。(5)对步骤( 和步骤(4)所得到的鱼骨小分子多肽液和鱼骨钙液于生物反应器中搅拌混合5分钟，然后在50°C，pH值为8. 0条件下，于生物反应器中搅拌螯合反应40min， 再经过冷冻干燥(FD-1PF，北京德天佑科技发展有限公司)得到鱼骨小分子多肽螯合钙粉 62克。经测定，钙螯合率为96%。钙螯合率的计算方法
螯合率％ —5 χ100%
(1)式(1)中W1 螯合反应前鱼骨钙液中钙的含量(mg) ,W2 鱼骨小分子多肽螯合钙粉中未螯合钙的含量(mg)。钙含量测定方法(1)试剂配置1. 25mol/L氢氧化钾溶液精确称取70. 13g氢氧化钾，用水稀释至1000M1。0. 05mol/L柠檬酸钠溶液称取14. 7g柠檬酸钠(Na3C6H7 · 2H20)，用水稀释至 1000mL。EDTA溶液准确称取4. 50g EDTA(乙二胺四乙酸二钠)，用水稀释至lOOOmL，贮存于聚乙烯瓶中，4°C保存。使用时稀释10倍即可。钙标准溶液准确称取0. IMSg碳酸钙(纯度大于99. 99%，105°C 110°C烘干2h)，加20ml水及3mL, 0. 5mol/L.盐酸溶解，移入500ml 容量瓶中，加水稀释至刻度，贮存于聚乙烯瓶中，4°C保存。此溶液每毫升相当于IOOyg钙。 钙红指示剂称取0. Ig钙红指示剂(C21O7N2SH14),用水稀释至100ml，溶解后即可使用。贮存于冰箱中可保持一个半月以上。 (2)标定EDTA浓度吸取0. 5mL钙标准溶液，以EDTA滴定，标定其EDTA的浓度，根据滴定结果计算出每毫升EDTA相当于钙的毫克数，即滴定度(T)。(3)试样及空白滴定分别吸取0. ImL试样于空白于试管中，加0. ImL柠檬酸钠溶液，用滴定管加1. 5ML 1. 25mol/L氢氧化钾溶液，加3滴钙红指示剂，立即以稀释10倍EDTA 溶液滴定，至指示剂由紫红色变蓝为止。(4)计算方法
权利要求
1.一种鱼骨小分子多肽螯合钙粉，其特征在于按照如下方法制备(1)将冷冻的鱼骨解冻，去除鱼骨表面残留的鱼肉、清洗干净；在压力为0.145 0. 165Mpa、温度为110 120°C条件下蒸煮鱼骨15 20min，再用组织捣碎机将鱼骨打浆， 经冷却、浙干，得到鱼骨泥；冻结至-5 -10°C保存；(2)按照水与鱼骨泥之间质量比为1.5 2. 5 1的比例，向步骤(1)所得冷冻的鱼骨泥中加入水解冻，然后搅拌3 6min，得鱼骨浆；按照复合蛋白酶与鱼骨浆之间质量比为 1 450 500的比例向鱼骨浆中加入复合蛋白酶，然后在50 70°C、pH为6. 5 7. 5条件下进行酶解反应10 30min ；再在90 95°C下保温3 5min，接着在室温、4000 6000g 条件下离心3 5min，去脂肪，分别取上清液和沉淀物；所述的复合蛋白酶由风味蛋白酶和木瓜蛋白酶组成；(3)用分子量为3ku的过滤膜超滤步骤( 所得的上清液2 3次，收集滤液，浓缩，得到鱼骨小分子多肽液；(4)将步骤( 所得的沉淀物用水清洗、烘干、粉碎，得鱼骨粉；按照鱼骨粉与复合酸溶液之间Ig 5 IOmL重量体积比将鱼骨粉置于复合酸中进行酸化处理30 60min，得到鱼骨钙液；所述复合酸溶液的浓度为10 20% ；所述的复合酸溶液由柠檬酸和乳酸组成；(5)将步骤( 所得鱼骨小分子多肽液和步骤(4)所得鱼骨钙液混合于生物反应器中搅拌3 5min，然后在40 50°C，pH值为7. 5 8. 5下，于生物反应器中搅拌螯合反应 20 40min，干燥，得鱼骨小分子多肽螯合钙粉。
2.按照权利要求1所述的鱼骨小分子多肽螯合钙粉，其特征在于其步骤(1)中所述的鱼骨为鲽鱼鱼骨。
3.按照权利要求1或2所述的鱼骨小分子多肽螯合钙粉，其特征在于其步骤O)中所述的复合蛋白酶中风味蛋白酶和木瓜蛋白酶之间的质量比为1 1。
4.按照权利要求3所述的鱼骨小分子多肽螯合钙粉，其特征在于其步骤中所述的复合酸溶液中柠檬酸和乳酸之间的体积比为1 1 ；其中所述柠檬酸的浓度为10 20% ； 所述乳酸的浓度为10 20%。
5.按照权利要求3所述的鱼骨小分子多肽螯合钙粉，其特征在于其步骤(1)中所述的用组织捣碎机将鱼骨打浆时组织捣碎机的转速为12000rpm。
6.权利要求1所述的鱼骨小分子多肽螯合钙粉的制备方法，其特征在于包括如下步骤(1)将冷冻的鱼骨解冻，去除鱼骨表面残留的鱼肉、清洗干净；在压力为0.145 0. 165Mpa、温度为110 120°C条件下蒸煮鱼骨15 20min，再用组织捣碎机将鱼骨打浆， 再经冷却、浙干，得到鱼骨泥；冻结至-5 -10°C保存；(2)按照水与鱼骨泥之间质量比为1.5 2.5 1的比例，向步骤(1)所得冷冻的鱼骨泥中加入水解冻，搅拌3 6min，得鱼骨浆；按照复合蛋白酶与鱼骨浆之间质量比为 1 450 500的比例向鱼骨浆中加入复合蛋白酶，然后在50 70°C、pH为6. 5 7. 5条件下进行酶解反应10 30min ；再在90 95°C下保温3_5min，接着在室温、4000 6000g 条件下离心3 5min，去脂肪，分别取上清液和沉淀物；所述的复合蛋白酶由风味蛋白酶和木瓜蛋白酶组成，它们之间的质量比为1 1;(3)用分子量为3ku的过滤膜超滤步骤( 所得的上清液2 3次，收集滤液，浓缩，得到鱼骨小分子多肽液；(4)将步骤( 离心所得的沉淀物用水清洗、烘干、粉碎，得鱼骨粉；按照鱼骨粉与复合酸溶液之间Ig 5 IOmL重量体积比将鱼骨粉置于复合酸中进行酸化处理30 60min， 得到鱼骨钙液；所述复合酸溶液的浓度为10 20%;所述的复合酸溶液由柠檬酸和乳酸组成，它们之间的体积比为1 1 ；其中所述柠檬酸的浓度为10 20% ；所述乳酸的浓度为 10 20% ；(5)将步骤(3)所得到的鱼骨小分子多肽液和步骤⑷所得到的鱼骨钙液混合于生物反应器中搅拌3 5min，然后在40 50°C，pH值为7. 5 8. 5下，于生物反应器中搅拌螯合反应20 40min，干燥，得鱼骨小分子多肽螯合钙粉。
7.按照权利要求6所述的制备方法，其特征在于步骤(1)中所述的鱼骨为鲽鱼鱼骨。
8.权利要求1-5任一所述的鱼骨小分子多肽螯合钙粉作为食品添加剂或营养食品的用途。
全文摘要
本发明公开了属于功能性食品或添加剂领域的鱼骨小分子多肽螯合钙，主要是将鱼骨在高温、高压下蒸煮，打浆得鱼骨泥；然后用复合蛋白酶对鱼骨泥进行酶解，离心，得上清液和沉淀物；将上清液过滤得鱼骨小分子多肽液；将沉淀物用柠檬酸和乳酸组成的复合酸酸化，得鱼骨钙液；将鱼骨小分子多肽液和鱼骨钙液混合，在40～50℃，pH值为7.5～8.5条件下进行螯合反应，干燥，即得鱼骨小分子多肽螯合钙粉。本发明钙螯合率高，可达90％以上；其次，钙的生物吸收率高，可达70％以上；本发明无副作用，风味好；食用后可直接从肠黏膜吸收，解决了传统钙源溶解性差、吸收率低、副作用大、产生结石等问题；另外，本发明制备方法简便，成本低。
文档编号A23L1/29GK102406176SQ20111029505
公开日2012年4月11日 申请日期2011年10月8日 优先权日2011年10月8日
发明者刘栋, 吕元萌 申请人:山东荣信水产食品集团股份有限公司