专利名称：致癌剂诱导的高产杆状病毒细胞系及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种昆虫细胞系及其制备方法和应用，尤其是一种来源于昆虫蛹卵巢组织，通过致癌剂甲基硝基亚硝基胍(MNNG)诱导转化的细胞系，及通过人工体外诱导转化获得永生化细胞系的方法，属于转基因动物技术领域。
背景技术：
昆虫是世界上种类最多的生物群体，有着丰富的细胞遗传学系统，无论科学研究还是实际应用，昆虫细胞系日益受到重视。昆虫细胞系一直是生理学、发育生物学、细胞生物学、分子生物学和生物化学等科学研究的重要工具；它是四大表达系统之一的杆状病毒表达载体系统的主要组成成分，可表达具有重大经济价值和科学意义的外源蛋白质；作为生物反应器扩增昆虫杆状病毒，特别是含有外源基因的重组杆状病毒，用于病毒生物杀虫剂的研制与生产。自Grace在1962年建立了第一个可连续培养的昨蚕(Autheraea pernyi)卵巢细胞系以来，40年的时间内，已经建立的昆虫细胞系超过500种，它们分别来源于170多种昆虫，其中包括鳞翅目、双翅目、同翅目、膜翅目、直翅目和鞘翅目等。昆虫细胞培养虽然受到了众多科学家的青睐，近年来也得到了不断深化与发展，但一株昆虫细胞系的建立往往需要消耗大量的时间和精力，尤其与哺乳动物细胞日益成熟多样的培养技术相比，昆虫细胞的培养手段老化、单一，缺乏创新。到目前为止，来自甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)的细胞系共有6株，通常来源于初孵幼虫、血细胞和脂肪体。甜菜夜蛾第一个细胞系UCR-SE-1由Gelernter和Federici(Gelernter, ff. D.和 B. A. Federici J.1nvertebr. Pathol. 1986,48 199 207)建立，第二株细胞系 Se3FH 是 Hara 等(Hara, K.，K. Tsuda, M. Funakoshi 和 T. KawarabataIn Vitro Cell. Dev. Biol. 1993,29A(12) :904 907)建立的，两株细胞系均来源于甜菜夜蛾初孵幼虫组织。第三株Le-H_HNU 7细胞系和第四株SeHe920-la细胞系来源于甜菜夜蛾血细胞，该细胞系对斜纹夜蛾核多角体病毒敏感。另外两株是由本实验室建立的来源于甜菜夜蛾幼虫脂肪体的细胞系，这两株细胞系对甜菜夜蛾核型多角体病毒和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒均非常敏感。尽管前述文献已有甜菜夜蛾细胞系的有关报道，然而到目前为止，还没有来源于甜菜夜蛾卵巢的细胞系。昆虫的卵巢通常是成对的，是卵子发生和发育的场所。卵巢是由卵巢管(ovariole)组成，在各类昆虫中卵巢管的数目差异很大，鳞翅目昆虫一般为4、6或8条。自Grace利用卵巢组织建立了第一个昆虫细胞系以来，卵巢一直是细胞系建立的重要组织来源。解剖将要羽化的蛹获得的卵巢组织更易于操作，减少污染机会。更多种类的昆虫细胞系仍存在很大的需求，建立新的来源于昆虫卵巢的细胞系，构建更加高效的杆状病毒表达载体系统是十分有意义的。传统的昆虫细胞系建立方法通常是等待细胞自发转化，因条件难以控制，常常由于污染而前功尽弃。体外培养细胞成功传代后，当培养到一定代数时，会进入生长抑制状态，生命力明显减弱，增殖能力下降，生长停滞并最终死亡。人工诱导体外培养细胞转化是获得细胞永生化的重要手段。在人工设计的诱变因素下使细胞发生转化，转化率较高，传代细胞生长周期长、性状稳定。在体外细胞培养过程中，人工诱发转化包括化学、物理、生物(病毒)等各种诱变因素影响。在诱变剂存在下，体外培养的细胞DNA发生损伤，但此时细胞仍存活，细胞为了自己的生存而进行DNA的自我修复，因细胞本身就有许多自我修复DNA的酶存在，其修复过程是复杂的，但在这复杂的DNA修复过程中，也难免会发生修复错误，错误的修复可引起DNA结构的改变，修复结束，这种改变了的DNA结构就被固定下来，而不可逆。这就标志着细胞DNA发生了遗传性改变。在合适的条件下这种细胞就能不断生长繁殖。单独用化学致癌物诱导动物正常细胞系转化，国内外均有报道(Nes now S，Garland H，Curt is G. Cancer let t, 1989 ；47 (1-2) :91 97. ；Tsuch iya T, UmedaM. Carcinogenes is. 1995 ；16 (8) : 1887 1894.)。甲基硝基亚硝基狐(MNNG)是人工合成的亚硝酰胺代表物，为常用的化学致癌剂，其烷化基团能与DNA鸟嘌呤的0-6位发生共价结合，形成加合物，导致碱基错配，从而诱发细胞转化(范虹，董惠芬，蒋明森，明珍平，钟沁萍，甲基硝基亚硝基胍对日本血吸虫成虫培养细胞骨架作用的研究，中国地方病学杂志，2001,20(6) :401-403)。据国内报道，甲基硝基亚硝基胍多用于研究哺乳动物细胞的增殖。例如，1994年胡静等报道的甲基硝基亚硝基胍对血管平滑肌细胞增殖的影响，明显增强了细胞的DNA合成，显著促进了细胞的分裂增殖(胡静，温进坤，魏素珍，左连富，甲基硝基亚硝基胍对血管平滑肌细胞增殖的影响，中华物理医学杂志，1994，16 (4) :211-213)。张文庚等利用MNNG诱导转化并建立了人胎儿皮肤成纤维细胞系(张文庚，徐刚，王艳萍，陈晓兵，MNNG诱导转化的人胎儿皮肤成纤维细胞系的建立，1994，16 (3) :125-128)。在无脊椎动物方面，MNNG多集中于对日本血吸虫细胞诱导作用的研究,对日本血吸虫成虫培养细胞骨架、磷酸酶和鸟氨酶脱羧酶的作用；核仁组织区相关嗜银蛋白的影响；对日本血吸虫成虫培养细胞增殖的研究等均有报道(范虹，董惠芬，蒋明森，明珍平，钟沁萍，甲基硝基亚硝基胍对日本血吸虫成虫培养细胞骨架作用的研究，中国地方病学杂志，2001，20 (6) =401-403 ;刘晴，董惠芬，蒋明森，明珍平，钟沁萍，甲基硝基亚硝基胍对日本血吸虫成虫培养细胞磷酸酶影响的研究，中国血吸虫病防治杂志 ，2002,14(1) :14-16 ;范虹，黄敏，王倩，李曼军，MNNG对日本血吸虫成虫细胞鸟氨酸脱羧酶活性作用的初步研究，中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2002，20(1) 35-36 ;钟沁萍，明珍平，蒋明森，董惠芬，MNNG诱导对日本血吸虫成虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的影响，中国血吸虫病防治杂志，2009，21卷(5) =378-381 ；董惠芬，蒋明森，明珍平，钟沁萍，杨明义，甲基硝基亚硝基胍诱导日本血吸虫成虫培养细胞增殖的研究，中国公共卫生，2000，16 (10) =883-884)。目前未见甲基硝基亚硝基胍(MNNG)用于鳞翅目昆虫细胞诱导转化的报道。通过甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对甜菜夜蛾蛹卵巢原代细胞体外诱导并建立细胞系，为昆虫细胞系的建立提供了新的方法与途径。
发明内容
因此，本发明的目的是针对目前尚无甲基硝基亚硝基胍(MNNG)用于鳞翅目昆虫细胞诱导转化的不足，提供一种致癌剂诱导的高产病毒细胞系及其制备方法和应用，以为昆虫细胞系的建立提供了新的方法与途径。一方面，本发明提供一种致癌剂诱导的高产病毒卵巢细胞系，该细胞系的名称为I0ZCAS-Spexl2，其保藏号为CGMCC No. 4808(分类命名甜菜夜蛾蛹卵巢细胞株，保藏日期，2011年05月03日，保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址，北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码100101)。优选地，所述致癌剂为甲基硝基亚硝基胍。优选地，所述卵巢细胞系为甜菜夜蛾卵巢细胞系。另一方面，本发明提供一种致癌剂诱导的高产病毒卵巢细胞系的制备方法，在无菌的条件下进行，具体包括以下步骤步骤1:培养甜菜夜蛾卵巢细胞；步骤2 :用致癌剂诱导转化步骤I中获得的甜菜夜蛾卵巢细胞；和步骤3 :获得致癌剂诱导转化的高产杆状病毒卵巢细胞系。优选地，在步骤I中，所述培养甜菜夜蛾卵巢细胞，包括以下步骤步骤1.1 :将甜菜夜蛾雌性蛹浸没在3%次氯酸溶液中5分钟，75%乙醇溶液中10-20分钟，进行表面消毒，然后用无菌蒸馏水清洗昆虫，再吸干蛹表面水分；步骤1. 2 :解剖昆虫，取出甜菜夜蛾卵巢组织；步骤1. 3 :用生理盐水清洗步骤1. 2中获得的组织2-3次，再用细胞培养液清洗，清洗后把该组织放入含有ImL细胞培养液I润洗过的细胞培养瓶中，盖紧瓶盖，放入27°C无光照的细胞培养箱中培养24小时；步骤1. 4 :加 入适量的细胞培养液II，使组织完全或大部分浸没在该培养液中，在与步骤1. 3同样条件下培养；步骤1. 5 :每7-10天吸出半量的培养液，并同时换入半量新的细胞培养液II，直至观察到不断扩展并开始增殖的细胞充满了整个培养瓶。优选地，在步骤2中，所述致癌剂为甲基硝基亚硝基胍。优选地，所述步骤2的具体反应步骤如下换用含有3 U g/mL甲基硝基亚硝基胍(MNNG)的细胞培养液III，继续在与步骤1. 3同样条件下培养。优选地，在步骤3的具体反应步骤如下步骤3.1 :用含甲基硝基亚硝基胍(MNNG)的细胞培养液III培养甜菜夜蛾卵巢组织72小时后，相差显微镜观察细胞状态，换细胞培养液II，成功转化的细胞继续与步骤1. 3 :同样条件下培养；步骤3. 2 :再与步骤1. 5相同的条件下培养细胞，直至获得致癌剂诱导的高产病毒卵巢细胞系。再一方面，本发明提供一种致癌剂诱导的高产病毒卵巢细胞系在杆状病毒生产中的应用，并且可使用杆状病毒表达载体表达重组蛋白。优选地，所述杆状病毒为甜菜夜蛾核型多角体病毒(SeNPV)和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)。本发明方法所使用细胞培养液的说明本发明所使用的细胞培养液是常规采用的昆虫细胞培养液与青霉素、链霉素和胎牛血清的混合物，配成的细胞培养液PH在6. 0-6. 8之间。昆虫细胞培养液可以是各种商品化的昆虫细胞培养液，如TNM-FH，GraCe’s，Sf 900，TC-100, IPL-41, Ex-Cel 1400 等等。其中细胞培养液I为昆虫细胞培养液与青霉素、链霉素、苯基硫脲和胎牛血清的混合物；细胞培养液II为昆虫细胞培养液与青霉素、链霉素和胎牛血清的混合物；细胞培养液III为昆虫细胞培养液与青霉素、链霉素、甲基硝基亚硝基胍(MNNG)和胎牛血清的混合物。通常，细胞培养液中青霉素含量为100U/mL、链霉素含量为100U/mL ;诱导转化培养液为上述培养液含甲基硝基亚硝基胍(MNNG) 3 ii g/mL ;动物血清含量为细胞培养液的10% (体积比)。本发明利用甜菜夜蛾蛹卵巢细胞为实验材料，通过致癌剂甲基硝基亚硝基胍(MNNG)诱导转化的方法，建成了一株甜菜夜蛾蛹卵巢细胞系，该细胞系对甜菜夜蛾核型多角体病毒和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒高度敏感。本发明中诱导转化的甜菜夜蛾蛹卵巢细胞系的生物学特征观察和测定1.经实验观察，该细胞系大部分为贴壁细胞，也有部分悬浮于培养液中。细胞的形状有3种类型大部分细胞圆形、少部分梭形，较少椭圆形，易聚集形成细胞团。(图1);2.10ZCAS-Spexl2对甜菜夜蛾核型多角体病毒及苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒敏感，可以观察到典型的细胞病理特 征，即细胞核增大，内含大量的多角体颗粒，感染率分别为91. 4%和65. 5% ;并且至少可以连续传代3代。(图2-3)3.按照McIntosh和 Ignoffo, 1989 (McIntosh, A. H.和 C. M.1gnoffo J.1nvertebr.Pathol. 1989，54 :97 102)的方法，测定第11代细胞生长曲线和群体倍增时间。以1.54X IO5细胞/mL的浓度接种到24孔培养板中，27°C培养，每48h测定细胞浓度，绘制生长曲线，并按公式T = tlg2/[lg(N/N0)]计算，第11代的细胞群体倍增时间为71. 06小时。其中T =在对数期平均增长一倍所需的时间t =接种到测定细胞数的时间NO =接种时的细胞数N =时刻t所测定的细胞总数4.按照 Takahashi 等 (Takahashi, Mitsuhashi and Ohtaki(1980)Develop.Growth and Differ. 22 :11-19)的方法，测定了第12代细胞的核型。由于甜菜夜蛾的染色体数目 n = 31 (Hara,Tsuda,Funakoshi and Kawarabata In Vitro Cell. Dev. Biol. 1993,29A(12) :904 907)，而I0ZCAS_Spexl2的染色体数目在116-131之间，因此，新建立的细胞系I0ZCAS-Spexl2由4倍体细胞组成(图2)。5.使用 DAF-PCR 的方法(McIntosh, Grasela and Matteri (1996), Insect Mol.Biol. 5 187 195)鉴定了细胞系I0ZCAS-Spexl2确是来源于甜菜夜蛾，而非其它细胞系的污染(图4)。由I0ZCAS-Spexl2提取的DNA与甜菜夜蛾蛹DNA、甜菜夜蛾卵巢DNA、来源于甜菜夜蛾幼虫脂肪体的IOZCAS-SpexI1-A的DNA扩增后主要的带型相同；而与对照，来源于草地贪夜蛾的Sf9、美洲棉铃虫蛹卵巢的BCIRL-Hz-AMl的细胞带型明显不同。6.使用传统细胞冻存的方法对一定代次的部分细胞进行冻存处理，保存细胞的种资，并成功复苏。本发明中诱导转化的甜菜夜蛾蛹卵巢细胞系的差异基因表达分析I0ZCAS-Spexl2与IOZCAS-Spexll (对照，同样来源于甜菜夜蛾蛹卵巢组织，未经MNNG处理)有10个基因在表达上具有显著或极显著差异。IOZCAS-SpexlI为本实验室建立，同样来源于甜菜夜蛾蛹卵巢组织，未经过MNNG处理的细胞系。其保藏号为CGMCC No. 4807(分类命名甜菜夜蛾蛹卵巢细胞株，保藏日期，2011年05月03日，保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址，北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码100101)。
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中图1为本发明所述的I0ZCAS_Spexl2的培养形态图，图中标尺所示为400 ii m ;图2为本发明所述的I0ZCAS-Spexl2感染甜菜夜蛾核型多角体病毒后获得大量的病毒多角体的形态图，图中标尺所示为200 y m ;图3为本发明所述的I0ZCAS-Spexl2感染苜蓿银纹夜蛾多粒包埋核型多角体病毒获得大量的病毒多角体的形态图，图中标尺所示为200 ii m ;图4为本发明所述的I0ZCAS_Spexl2的生长曲线；图5为本发明所述的I0ZCAS_Spexl2的核型；图6为DAF-PCR鉴定I0ZCAS_Spexl2的DNA指纹扩增图谱，图中I为甜菜夜蛾卵巢(Spodoptera exigua ovary)的图谱，2 为甜菜夜蛾蛹(Spodoptera exigua pupa)的图谱，3为脂肪体的IOZCAS-Spex I1-A的图谱，4为草地贪夜蛾的Sf9的图谱，5为美洲棉铃虫蛹卵巢的 BCIRL-Hz-AMl 的图谱，6 为 I0ZCAS_Spexl2 的图谱，7 为 DNA 标记(DNA Marker)的图谱。
图7为使用微管蛋白(tubulin)作为内参通过Real-Time PCR方法分析十个基因表达图中纵坐标为基因相对表达量，横坐标依次为SUM0-1激活酶(activatingenzyme), BCCIP-类蛋白(like protein)，小 HSP (small HSP), IOkDa HSP, GST, CypA,激活的 PKC 的受体(receptor for activated PKC), PDI 类蛋白 ERp57 (PDI like proteinERp57)，ALDH, ATP 依赖性的 RNA 解旋酶-类蛋白 DEAD 盒(DEAD box ATP-dependent RNAhelicase-like protein)。生物材料的保藏信息本发明的名称为I0ZCAS_Spexl2的细胞系的保藏号为CGMCC No. 4808，分类命名甜菜夜蛾蛹卵巢细胞株，保藏日期，2011年05月03日，保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。名称为IOZCAS-Spexll的细胞系的保藏号为CGMCC No. 4807，分类命名甜菜夜蛾蛹卵巢细胞株，保藏日期，2011年05月03日，保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
具体实施例方式实施例1 MNNG诱导甜菜夜蛾蛹卵巢细胞系的建立取末龄的甜菜夜蛾5天雌性蛹(来源于中国科学院动物研究所农业虫害鼠害综合治理研究国家重点实验室，甜菜夜蛾幼虫使用人工饲料在26±1.5%°C，相对湿度65% -75%的条件下饲养。)浸没在3%次氯酸溶液中5分钟，75%乙醇溶液中10-20分钟，进行表面消毒。解剖该蛹取出卵巢组织，操作时尽量保持其完整。用生理盐水清洗该组织2-3次，再用细胞培养液I (以TNM-FH为主，含100U/mL的青霉素，100U/mL的链霉素和10%(v/v)的胎牛血清，pH = 6. 2)清洗2-3次，放入使用ImL细胞培养液润洗过的25cm2的细胞培养瓶中，放入摄氏27°C无光照的细胞培养箱中培养24小时。然后加入3mL细胞培养液II，放入同样条件下培养。注意该方法成功建立细胞系的关键是要使组织紧贴在细胞培养瓶底，勿使组织悬浮在细胞培养液中。以后每7-10天左右吸出半量的培养液，并同时换入半量的新培养液II。在此操作第3天后可以观察到组织周围游离出大量单个的细胞，并逐渐向外围扩展。当原代细胞增殖至9天时，换用含3 ii g/mL甲基硝基亚硝基胍(MNNG)的细胞培养液III，72小时后换用正常细胞培养液II，27°C无光照的细胞培养箱中培养。诱导初期，并非所有细胞受到损伤，只有一小部分进入转化发展阶段，称为癌前细胞，分散于未受损伤的细胞中。细胞继续培养过程中正常细胞由于接触抑制而停止分裂直至死亡，那些癌前细胞则由于失去接触抑制的限制加快了繁殖生长的速度，进而持续不断地分裂增殖。转化的细胞接触抑制消失，有堆积生长的趋势。60天后当细胞增殖至将要铺满整个培养瓶时，细胞连同全部的培养液吸出放入新培养瓶中，并加入2mL新的细胞培养液II。细胞系建立初步成功。在细胞开始传代的第8天后开始第二次半量分瓶传代，以后传代时间维持在7天。传到第11代时，传代比1: 3，传代时间维持在6天，细胞生长开始稳定，传至第12代时，传代时间已缩短至4-5天。最终该细胞系被命名为IOZCAS-Spexl2。实施例2 I0ZCAS-Spexl2的牛物学特件观察和测定(I)形态特征如图1所示，经显微镜观察，该细胞系细胞易于形成细胞团且可忍受高密度生长环境，突破了接触抑制。细胞的形状有3种类型圆形、梭形和椭圆形。大部分细胞贴壁。·(2)细胞的生长27°C下，细胞系第11代在含10%胎牛血清、100U/mL的青霉素、100U/mL的链霉素、g/mL甲基硝基亚硝基胍(MNNG)的TNM-Hl培养液中，群体倍增时间为71.06h。如图4所示，细胞最高密度约可达1. 6X IO6个细胞/mL。(3)核型分析I0ZCAS-Spexl2第12代细胞是4倍体细胞，染色体数目范围116-131 (2n = 62)，见图 5。(4) DAF-PCR鉴定如图6所示，细胞系I0ZCAS_Spexl2确是来源于甜菜夜蛾，而非其它细胞系的污染。由I0ZCAS-Spexl2提取的DNA同于甜菜夜蛾蛹、甜菜夜蛾卵巢(均来源于中国科学院动物研究所农业虫害鼠害综合治理研究国家重点实验室，甜菜夜蛾幼虫使用人工饲料在26±1. 5% °C，相对湿度65%-75%的条件下饲养。)和脂肪体(来源于中国科学院动物研究所农业虫害鼠害综合治理研究国家重点实验室，甜菜夜蛾幼虫使用人工饲料在26 ±1. 5 % °C，相对湿度65 % -75 %的条件下饲养。请说明其来源)的DNA指纹扩增图谱，而不同于草地贪夜蛾(来源于中国科学院动物研究所农业虫害鼠害综合治理研究国家重点实验室)的Sf9、美洲棉铃虫蛹卵巢(来源于中国农业科学研究院生物技术研究所)的 BCIRL-Hz-AMl 的图谱。(5)冻存和复苏使用传统细胞冻存的方法对一定代次的部分细胞进行冻存处理，保存细胞的种资，并可以成功复苏。实施例3.病毒敏感件I0ZCAS-Spexl2对多种核型多角体病毒敏感将SeNPV、AcMNPV及SpltNPV出芽型病毒粒子BV(均来源于中国科学院动物研究所农业虫害鼠害综合治理研究国家重点实验室)以0. 001幼虫当量/毫升的浓度接种I0ZCAS-Spexl2，培养7天后，通过倒置显微镜可以观察到典型的细胞病理特征，如图2-3，即细胞核增大，内含大量的多角体颗粒。并且至少可以连续传代3代。病毒感染率分别为91. 4%,81. 4%和31. 9%。实施例4.10ZCAS~Spexl2与IOZCAS-Soexll的差异某闵表汰分析使用Invitrogen 公司 Trizol 分别提取 I0ZCAS_Spexl2 与 IOZCAS-Spexll (对照，同样来源于甜菜夜蛾蛹卵巢组织，未经MNNG处理)细胞的RNA，然后使用DNase I处理除去基因组 DNA。用 TakaRa 公司PrimeScript RT reagent Kit Perfect Real Time 试剂盒，将RNA反转录成完整的cDNA后，进行实时定量PCR反应，如图7所示，表明I0ZCAS-Spexl2与IOZCAS-Spexll相比有10个基因在表达上具有显著或极显著差异。这10个基因及内参的反转录反应引物见表I。表1.实时定 量PCR反应引物序列.
权利要求
1.一种致癌剂诱导的高产杆状病毒卵巢细胞系，该细胞系的名称为I0ZCAS-Spexl2，其保藏号为CGMCC No. 4808。
2.根据权利要求1所述的卵巢细胞系，其特征在于，所述致癌剂为甲基硝基亚硝基胍。
3.根据权利要求1所述的卵巢细胞系，其特征在于，所述卵巢细胞系为甜菜夜蛾卵巢细胞系。
4.根据权利要求1至3任一项所述的卵巢细胞系的制备方法，包括以下步骤 步骤1:培养甜菜夜蛾卵巢细胞； 步骤2 :用致癌剂诱导转化步骤I中获得的甜菜夜蛾卵巢细胞；和 步骤3 :获得致癌剂诱导转化的高产杆状病毒卵巢细胞系。
5.根据权利要求4所述的卵巢细胞系的制备方法，其特征在于，在步骤2中，所述致癌剂为甲基硝基亚硝基胍。
6.根据权利要求1至3任一项所述的卵巢细胞系在杆状病毒生产中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述杆状病毒为甜菜夜蛾核型多角体病毒和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒。
全文摘要
本发明提供一种致癌剂诱导的高产杆状病毒卵巢细胞系及其制备方法和应用，所述细胞系的名称为IOZCAS-Spex12，其保藏号为CGMCC No.4808，所述致癌剂诱导的高产杆状病毒卵巢细胞系的制备方法，包括以下步骤培养甜菜夜蛾卵巢细胞；用致癌剂诱导转化步骤1中获得的甜菜夜蛾卵巢细胞；获得致癌剂诱导转化的高产杆状病毒卵巢细胞系；及所述致癌剂诱导的高产杆状病毒卵巢细胞系在杆状病毒生产中的应用。
文档编号C12N5/07GK103060258SQ20111031740
公开日2013年4月24日 申请日期2011年10月18日 优先权日2011年10月18日
发明者李瑄, 张寰, 王红托, 秦启联, 张继红, 苗麟, 张宁, 孟茜, 朱未, 周桂灵, 杨青 申请人:中国科学院动物研究所