专利名称：一种适用于致病水霉菌保藏的简易方法
技术领域：
本发明涉及微生物保藏方法，具体涉及一种适用于致病水霉菌保藏的简易方法。
背景技术：
水霉菌是危害极大的淡水致病菌，几乎能够感染包括斑点叉尾鮰、虹鳟、花鲈等在内的所有淡水鱼类。因此，开展致病水霉菌简易高效保藏方法的研究对从事水产动物水霉病病原学与防治学的科学研究具有重要的意义。然而，从现有的文献资料来看，水霉菌的保藏大多是采用传代培养保藏法、冷冻干燥保藏法等一些常规的微生物保藏方法，而专门针对水霉菌保藏的简易高效方法极其匮乏。鉴此，本发明专门针对致病水霉菌保藏建立了一种简易高效的方法，旨在提高水霉菌保藏方法的简易性及其在保藏期间的存活率，延长保藏时间。
发明内容
本发明的目的在于提供一种适用于致病水霉菌保藏的简易方法。本发明提供的一种适用于致病水霉菌保藏的简易方法，包括如下步骤1)水霉菌菌丝的诱生将水霉菌接种于放有无菌油菜籽粒的马铃薯葡萄糖琼脂培养基平板上，于25°C恒温培养直至油菜籽粒上长满菌丝；2)水霉菌的保藏将长满菌丝的油菜籽粒分别放入若干个IOmL无菌具塞塑料离心管中，每个塑料离心管中放置3-5粒，然后再用ImL玻璃移液管吸取8. SmL的无菌蒸馏水和lmLpH5. 6的液体沙氏培养基于每个IOmL无菌具塞塑料离心管中，置于4°C恒温冰箱保藏即可。所述的水霉菌是寄生水霉，其保藏号为ATCC200013 。经测定表明，4 °C恒温冰箱保藏的IOmL无菌具塞塑料离心管中的寄生水霉 ATCC200013 保藏12个月仍生长正常，而且形态特征未发生明显改变。说明本实验的保藏方法可以有效保藏期至少12个月。本发明与传代培养保藏法相比保藏期更长，与冷冻干燥保藏法相比，操作更简易， 成本更低，是一种简易高效的致病性水霉保藏方法。
具体实施例方式实施例11材料与方法1.1实验材料寄生水霉ATCC200013 ，购于美国标准生物品收藏中心；沙氏液体培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基平板、无菌蒸馏水、IOmL无菌具塞塑料离心管、ImL玻璃移液管，购于国药集团(上海)化学试剂有限公司；油菜籽粒，购于上海市古棕路菜市场；4°C恒温冰箱，购于青岛海尔公司；生化培养箱，购于日本三洋公司；pH5. 6的沙氏液体培养基、镊子、油菜籽粒、ImL玻璃移液管在1 X IO5Pa高压湿热灭菌20min后备用。1.2水霉菌的保藏1. 2. 1水霉菌菌丝的诱生将寄生水霉ATCC200013 接种于放有无菌油菜籽粒的马铃薯葡萄糖琼脂培养基平板上，于25°C恒温培养直至油菜籽粒上长满菌丝。1.2. 2水霉菌的保藏实验设10个平行组，分别命名为A、B、C、D、E、F、G、H、I、J，每个平行组中包括12 个IOmL无菌具塞塑料离心管。具体操作如下将360个长满菌丝的油菜籽粒分别放入120 个IOmL无菌具塞塑料离心管中，即每个IOmL无菌具塞塑料离心管中含3个长满菌丝的油菜籽粒，然后再用ImL玻璃移液管吸取8. SmL的无菌蒸馏水和ImL pH5. 6的液体沙氏培养基于每个IOmL无菌具塞塑料离心管中，置于4°C恒温冰箱保藏。1. 2. 3水霉菌保藏期的测定每个月从平行组中分别随机取出一个4°C恒温冰箱保藏的IOmL无菌具塞塑料离心管，无菌操作用镊子从4°C恒温冰箱保藏的IOmL无菌具塞塑料离心管中取出长满菌丝的油菜籽粒，接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基平板上，于25°C恒温培养，连续2天观察菌丝的生长情况及其形态。2实验结果实验结果见表1。实验结果表明，4°C恒温冰箱保藏的IOmL无菌具塞塑料离心管中的寄生水霉ATCC200013 保藏12个月仍生长正常，而且形态特征未发生明显改变。说明本实验的保藏方法可以有效保藏期至少12个月。表1寄生水霉ATCC200013 在不同保藏时间下的存活情况
权利要求
1.一种适用于致病水霉菌保藏的简易方法，其特征在于，包括如下步骤1)水霉菌菌丝的诱生将水霉菌接种于放有无菌油菜籽粒的马铃薯葡萄糖琼脂培养基平板上，于25°C恒温培养直至油菜籽粒上长满菌丝；2)水霉菌的保藏将上述3-5粒长满菌丝的油菜籽粒放入IOmL无菌具塞塑料离心管中，再用玻璃移液管吸取8. SmL的无菌蒸馏水和ImL pH5. 6的液体沙氏培养基于无菌具塞塑料离心管中，置于4°C恒温冰箱保藏即可。
2.如权利要求1一种适用于致病水霉菌保藏的简易方法，其特征在于，所述的水霉菌是寄生水霉，其保藏号为ATCC200013 。
全文摘要
本发明提供了一种适用于致病水霉菌保藏的简易方法，步骤包括将水霉菌接种于放有无菌油菜籽粒的马铃薯葡萄糖琼脂培养基平板上，于25℃恒温培养直至油菜籽粒上长满菌丝；将长满菌丝的油菜籽粒放入无菌具塞塑料离心管中，然后再用玻璃移液管吸取无菌蒸馏水和液体沙氏培养基于无菌具塞塑料离心管中，置于4℃恒温冰箱保藏即可。本发明与传代培养保藏法相比保藏期更长，可以有效保藏至少12个月，与冷冻干燥保藏法相比，操作更简易，成本更低，是一种简易高效的致病性水霉保藏方法。
文档编号C12R1/645GK102382774SQ201110347570
公开日2012年3月21日 申请日期2011年11月7日 优先权日2011年11月7日
发明者何珊, 卫若鹏, 曹海鹏, 欧仁建 申请人:上海海洋大学, 山西卫氏鱼康实业有限公司