专利名称：检测猫叫综合征的基因芯片及使用方法、试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种生物技术领域的基因芯片及使用方法、试剂盒，具体涉及一种检测猫叫综合征的基因芯片及使用方法、试剂盒。
背景技术：
猫叫综合征(Cri-du-chat syndrome，CDCS)是由于5号染色体短臂缺失所引起的一种较为罕见的染色体病，是常染色体结构畸变所致疾病中常见的一种。新生儿发病率为 1/50000。该病的临床特点主要是高调的猫叫样哭声，生长发育障碍和严重的智力低下，并具有特殊面容，如小头、圆脸、眼距宽、内眦赘皮、眼睑下垂、斜视、小下颂、耳位低等，此外还有低出生体重、肌张力低下、先天性心脏病等，其中，高调的猫叫样哭声是具有诊断意义的特征。猫叫综合征的大多数病例是在出生时或出生后有异常哭声而备受注意的，有关猫叫综合征的细胞分子遗传学诊断目前有以下方法染色体常规显带技术分析，常用方法有 G显带、R显带、T显带、C显带、Q显带；此外，限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphisms, RFLP)分析,短串联重复序列(short tandom repeats, STRs)多态性分析、Southern印迹技术和DOP-PCR(变性寡核苷酸引物PCR)技术都可用于猫叫综合征的诊断分析。然而尚无一种快速、低成本、大通量和自动化检测猫叫综合征基因突变的方法。比较基因组杂交(CGH)芯片分析技术是一种突破性技术，能够支持研究人员通过微阵列准确研究与疾病有关的染色体的变化。比较基因组杂交(CGH)芯片分析的原理是在一张芯片上用两份标记不同荧光素的样品(检测样品和对照样品)同时进行杂交，从而快速而又直观地检测实验样品和对照样品之间基因组DNA的拷贝数量的差异。CGH应用于疾病遗传学的研究，可以提供一个全基因组的扫描图，提示样本DNA在整个染色体组的哪个特定位置存在扩增或缺失，那些发生扩增的区域，极有可能存在致病基因，而缺失区域即可能包含一些抑制基因。因此，需要一种新的技术方案来克服现有技术的上述缺陷和不足。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种检测猫叫综合征的基因芯片及使用方法、试剂盒。本发明的基因芯片操作步骤简单，检测特异性高，稳定性好，时间短，成本低。本发明还提供了前述检测猫叫综合征的基因芯片的使用方法及试剂盒。本发明的目的是通过以下技术方案实现第一方面，本发明提供了一种检测猫叫综合征的基因芯片，包括固相载体和固定在该固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针为SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸序列。优选地，所述固相载体选自载玻片、硅片、硝酸纤维素膜、尼龙膜或聚本乙烯。第二方面，本发明还涉及前述检测猫叫综合征的基因芯片的使用方法，包括以下步骤 (a)制备样品DNA片段；
(b)荧光标记上述DNA片段；(c)洗脱上述标记产物；(d)将标记产物与所述基因芯片杂交；(e)扫描检测基因芯片的杂交信号，获得结果。第三方面，本发明还涉及一种用于检测猫叫综合征的试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1所述的基因芯片。优选地，所述试剂盒还包括标记物，所述标记物为Cy3_dUTP。优选地，该试剂盒还包括标记物，所述标记物为Cy5_dUTP。本发明具有如下的有益效果本发明的基因芯片操作步骤简单，检测特异性高，稳定性好，该芯片多次试验重复性高；时间短，从样本抽提到获得扫描结果可在一天内完成。
具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解为这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等分子克隆实验室手册见New York Cold Spring Harbor Laboratory出版社1989年版中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例本实施例的基因芯片由固相载体和固定在该固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针为SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸序列，所述固相载体为玻片。本实施例基因芯片的固相载也可选用硝酸纤维素膜、硅片、尼龙膜或聚本乙烯。本实施例的寡核苷酸探针由安捷伦公司生产，同时本实施例的基因芯片也由安捷伦公司按照常规方法生产。本实施例基因芯片的使用方法，步骤如下(1)样品DNA片段的制备取患者、正常人血液，采用常规方法抽提全基因组DNA(gDNA)。将水浴锅温度调到371和651，溶化10\8吐作『C (见下表)，短暂涡旋震荡后离心数秒。对每个反应来说，将gDNA加入到适当的无核酸酶的PCR管中，并加入无核酸酶的水使反应体积达到10. 1 μ L0在冰上准备酶切混合母液，按顺序加入以下试剂
权利要求
1.一种检测猫叫综合征的基因芯片，包括固相载体和固定在该固相载体上的寡核苷酸探针，其特征在于，所述寡核苷酸探针为SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的检测猫叫综合征的基因芯片，其特征在于，所述固相载体选自载玻片、硅片、硝酸纤维素膜、尼龙膜或聚本乙烯。
3.—种如权利要求1所述检测猫叫综合征的基因芯片的使用方法，其特征在于，包括以下步骤(a)制备样品DNA片段；(b)荧光标记上述DNA片段；(c)洗脱上述标记产物；(d)将标记产物与所述基因芯片杂交；(e)扫描检测基因芯片的杂交信号，获得结果。
4.一种用于检测猫叫综合征的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的基因芯片。
5.根据权利要求4所述的用于检测猫叫综合征的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标记物，所述标记物为Cy3-dUTP。
6.根据权利要求4所述的用于检测猫叫综合征的试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括标记物，所述标记物为Cy5-dUTP。
全文摘要
本发明涉及一种检测猫叫综合征的基因芯片及使用方法、试剂盒，所述基因芯片包括固相载体和固定在该固相载体上的探针，所述寡核苷酸探针为SEQ ID NO.1-50所示的核苷酸序列；所述使用方法包括如下步骤(a)制备样品DNA片段；(b)荧光标记上述DNA片段；(c)洗脱上述标记产物；(d)将标记产物与所述基因芯片杂交；(e)扫描检测基因芯片的杂交信号，获得结果；本发明还涉及包含前述基因芯片的试剂盒。本发明的基因芯片操作步骤简单，检测特异性高，稳定性好，从样本抽提到得到扫描结果可在一个工作日内完成，成本低，适用于临床患者基因突变检测、产前诊断和正常人杂合子携带者检测。
文档编号C12Q1/68GK102559871SQ20111041007
公开日2012年7月11日 申请日期2011年12月9日 优先权日2011年12月9日
发明者吴茜, 李笑天, 秦胜营, 贺林, 郭奇桑, 龚小会 申请人:上海交通大学, 复旦大学附属妇产科医院