专利名称：呈现核激素受体活性的胰高血糖素超家族肽的制作方法
呈现核激素受体活性的胰高血糖素超家族肽
引用电子递交材料的结合与本文同时提交且确认如下的计算机可读的氨基酸序列表通过引用以其全部结合到本文中:一个2011年4月29日创建的名为“44822B_SeqListing”的889，723字节ASCII (文本)文件。
相关申请的交叉引用本申请要求2010年5月13日递交的美国临时专利申请号61/334，435和2011年I月12日递交的61/432，077的优先权。各临时申请的公开特通过全文引用明确结合于本文。
发明背景 本公开的领域本发明提供缀合至能对核激素受体起作用的核激素受体配体的胰高血糖素超家族肽。
相关技术的简述核激素受体蛋白形成一类配体激活的蛋白，当其结合至DNA的特定序列时，充当细胞核内转录的启闭开关。这些开关控制皮肤、骨骼和大脑中行为中枢的发育和分化以及生殖组织的持续调节。核激素受体配体诸如类固醇、留醇、类维生素A、甲状腺激素和维生素D起激活核激素受体的作用。激素和受体的相互作用引发受体的构象变化，这导致基因表达的上调。配体和核激素受体的相互作用激活的细胞信号转导的水平由配体和可用于结合的可获得受体的数量和配体和受体间的结合亲合力决定。结合至核激素受体的许多配体和相应的类似物被用作药物治疗，例如，帕金森病(NURRl)、睡眠障碍(RZRii)、关节炎和小脑共济失调(RORa )、中枢神经系统障碍(NOR-URev-ErbA^、T lx,NGF1-B β、HZF_2a ,COUP-TFa、COUP-TF β、COUR-TF y、NUR77)、高胆固醇血症(LXR a，COR)、肥胖症(Rev-ErbA a )、糖尿病(HNF4 a )、免疫障碍(TOR)、代谢障碍(MB67 a、SHP、FXR、SF-1、LXR^)和不孕症和避孕(GCNF、TR2_11 a，β、TR4、ERa，β ERR a , β)。前胰高血糖素原(Pre-proglucagon)为158个氨基酸前体多肽，其在不同组织中经加工形成多种衍生自不同胰高血糖素原的肽,包括胰高血糖素、胰高血糖素样肽-1 (GLP-1)、胰高血糖素样肽-2 (GLP-2)和泌酸调节肽(OXM)，这些肽参与各种生理功能，包括葡萄糖稳态、胰岛素分泌 、胃排空和肠道生长以及调节食物摄取。胰高血糖素为一种对应于前胰高血糖素原的氨基酸33-61的29个氨基酸的肽，而GLP-1作为对应于前胰高血糖素原的氨基酸72-108的37个氨基酸的肽产生。GLP-1 (7-36)酰胺或GLP-1 (7-37)酸为GLP-1的生物学上有效形式，它们证实对GLP-1受体的基本上等效的活性。胰高血糖素用于严重低血糖症的急性治疗。已经报道泌酸调节肽具有抑制食欲和减轻体重的药理学功能。GLP-1和GLP-1受体激动剂用于治疗II型糖尿病。毒蜥外泌肽_4为希拉毒蜥(Gila monster)的唾液中存在的肽，其在结构上类似于GLP-1且像胰高血糖素和GLP-1 —样可增加胰岛素释放。
抑胃多肽(GIP)也称作葡萄糖依赖性促胰岛素释放肽，并且为激素的促胰岛素肽家族的成员。GIP衍生自GIP基因编码的153个氨基酸的原蛋白并且作为生物活性的42个氨基酸肽循环。GIP基因在小肠以及唾液腺中表达并且为胃酸分泌的弱抑制剂。除了其在胃的抑制作用以外，在葡萄糖存在下，以生理学剂量给予时GIP增强胰岛素经胰腺胰岛β细胞释放。确信GIP可作为刺胰腺胰岛素释放的肠内因子起作用并且可在维持葡萄糖稳态中起生理作用。骨钙蛋白为在骨骼和牙质中发现的非胶原蛋白。它由成骨细胞分泌并被认为在矿化和钙离子稳态中起作用。也已经报道骨钙蛋白也已经报道在体内作为激素起作用，引起胰腺中的β细胞释放更多的胰岛素，并在同时导引脂肪细胞释放激素脂连蛋白，后者增加对胰岛素的敏感性。
发明概述本文提供缀合至核激素受体配体(“NHR配体”)的胰高血糖素超家族肽。这些具有多重活性的缀合物可用于治疗多种疾病。本发明的胰高血糖素超家族肽缀合物可由下式表示:
Q-L-Y
其中Q是胰高血糖素超家族肽，Y是NHR配体和L是连接基团或键。胰高血糖素超家族肽(Q)在一些实施方案中可为对胰高血糖素受体呈现激动剂活性、对GLP-1受体呈现激动剂活性、对GIP受体呈现激动剂活性、对胰高血糖素和GLP-1受体呈现协同激动剂活性、对胰高血糖素和GIP受体呈现协同激动剂活性、对GLP-1和GIP受体呈现协同激动剂活性或对胰高血糖素、GIP和GLP-1受体呈现三重激动剂活性的胰高血糖素相关妝。在一些实施方案中，膜闻血糖素相关妝对膜闻血糖素、GLP-1或GIP受:体呈现拮抗剂活性。胰高血糖素相关肽对胰高血糖素受体、对GLP-1受体或对GIP受体的活性可与本文所阐述的任何 讲授相一致。在一些特别的实施方案中，胰高血糖素相关肽对胰高血糖素受体呈现原生胰高血糖素的至少0.1 %的活性，对GLP-1受体呈现原生GLP-1至少
0.1 %的活性，或对GIP受体呈现原生GIP至少0.1 %的活性。NHR配体(Y)完全或部分地为非肽的，并且具有与本文所阐述的任何讲授相一致的活性作用于核激素受体。在某些实施方案中，NHR配体的EC5tl或IC5tl为约ImM或更少，或100 μ M或更少，或10 μ M或更少，或I μ M或更少。在某些实施方案中，NHR配体具有最多约5000道尔顿、或最多约2000道尔顿、或最多约1000道尔顿、或最多约500道尔顿的分子量。NHR配体可对本文描述的任何核激素受体起作用或具有本文描述的任何结构。在一些实施方案中，胰高血糖素相关肽对胰高血糖素受体的EC5tl (或IC5tl)为GPCR配体对其G蛋白偶联受体的EC5tl或IC5tl的约100倍以内、或约75倍以内，或约50倍以内、或约40、30、25、20、15、10或5倍以内。在一些实施方案中，胰高血糖素相关肽对GLP-1受体的EC5tl(或IC5tl)为GPCR配体对其G蛋白偶联受体的EC5tl或IC5tl的约100倍以内、或约75倍以内，或约50倍以内、或约40、30、25、20、15、10或5倍以内。在一些实施方案中，胰高血糖素相关肽对GIP受体的EC5tl (或IC5tl)为GPCR配体对其G蛋白偶联受体的EC5tl或IC5tl的约100倍以内、或约75倍以内，或约50倍以内、或约40、30、25、20、15、10或5倍以内。在本发明一些方面中，提供Q-L-Y的前药，其中前药包含经由酰胺键共价连接于Q的活性位点的二肽前药元件(A-B)。随后在生理条件下除去二肽并在缺乏酶活性下复原Q-L-Y缀合物的完全活性。在本发明一些方面，也提供包含Q-L-Y缀合物和药学上可接受的载体的药用组合物。在本发明其它方面中，提供给予治疗有效量的本文描述的Q-L-Y缀合物用于在患者治疗疾病或医学病症的方法。在一些实施方案中，疾病或医学病症选自代谢综合征、糖尿病、肥胖症、肝脂肪变性和神经退行性疾病。
图的简述
图1呈现各种胰高血糖素超家族肽或其相关片段的氨基酸序列的比对。呈现的氨基酸序列为 GHRH (SEQ ID NO: 1619)、PHI (SEQID NO: 1622)、VIP (SEQ ID NO:1620)、PACAP-27 (SEQ ID NO: 1621)、毒蜥外泌肽-4 (SEQ ID NO: 1618), GLP-1 (SEQ ID NO:1603)、胰高血糖素(SEQ ID NO:1601)、泌酸调节肽(SEQ ID NO:1606)、GIP (SEQ IDNO:1607)、GLP-2 (SEQ ID NO:1608)和促胰液素(SEQ ID NO:1624)。比对显示胰高血糖素的氨基酸位置如何对应于其它胰高血糖素超家族肽的氨基酸位置。图2表明给予指定的GLP-1缀合物对db/db小鼠的体重和血糖水平的变化的影响。图2a表明，给予高剂量GLP-1 (Aib2A22CexK4tl)/雌激素(17-酯)缀合物的小鼠比单独给予GLP-1的小鼠经历略微更大的体重减轻，但类似于媒介组。图2b和2c显示给予高剂量的GLP-1 (Aib2A22CexK4tl)/雌激素(17-酯)缀合物的小鼠在0_14天之间经历最大的血糖水平下降，表明改善血糖的能力增强而与体重变化无关。图3表明给予指定的GLP-1缀合物对膳食诱导的肥胖小鼠的血糖、体重、脂肪量和肌肉(lean muscle)量的影响。图3a表示第21天的ipGTT测试的结果。图3b_d表明给予指定的GLP-1缀合物对膳食诱导的肥胖小鼠的体重变化(图3b)、脂肪量变化(图3c)和肌肉量变化(图3d)的影响。给予高剂量GLP-1 (Aib2A22CexK4tl)/雌激素(17-酯)缀合物的小鼠的体重和脂肪 量经历最大下降和最少量的肌肉量变化。图3e表明给予指定的GLP-1缀合物对膳食诱导的肥胖小鼠的血糖变化的影响。给予高剂量GLP-1 (Aib2A22CexK40) /雌激素(17-酯)缀合物的小鼠在0-14天之间经历最大的血糖水平下降。这些结果表明，向基于A22的弱GLP-1激动剂加入雌激素增加剂量依赖性功效。图4表明给予指定的GLP-1缀合物对血糖水平、体重变化、脂肪量变化和血糖变化的影响。图4a表明在腹膜内葡萄糖耐量试验中，给予指定的GLP-1缀合物在14天每日给药后对膳食诱导的肥胖小鼠的的血糖水平的影响。图4b-c表明给予指定的GLP-1缀合物对膳食诱导的肥胖小鼠的体重变化和脂肪量变化的影响。给予高剂量GLP-1/雌激素缀合物的小鼠经历最大的总体重下降(图4b)。相对于用媒介处理的动物，用高剂量雌激素醚缀合物处理使脂肪量下降(图4c)。图4d表明给予指定的GLP-1缀合物对膳食诱导的肥胖小鼠的血糖的影响。在高剂量下，给予任一 GLP-1 (Aib2E16CexK4ci)/雌激素缀合物的小鼠比单独给予GLP-1 (Aib2E16CexK40)的小鼠在0_21天之间的血糖水平变化更大。图5表明给予指定的GLP-1缀合物对膳食诱导的肥胖小鼠的体重变化和血糖变化的影响。给予高剂量GLP-1雌激素缀合物的小鼠体重下降最大(图5a)。给予或高或低剂量的GLP-1 (Aib2E16K40Cex)以及给予高剂量GLP-1 (Aib2E16K40Cex) /雌激素(3-醚)的小鼠经历最大的血糖变化(图5b)。图6表明给予指定的GLP-1缀合物对膳食诱导的肥胖小鼠的体重变化、脂肪量变化和血糖变化的影响。给予任一雌激素缀合物的小鼠经历最大的总体重下降(图6a)。月旨肪量(图6b)分析随总体重体减轻相对恒定。给予GLP-1 (Aib2E16K4tlCex)/雌激素(3-醚)或GLP-1 (Aib2E16K4ciCex)/雌激素(17-酯)缀合物的小鼠在0_7天间经历最大的血糖水平变化(图6c)。图7表明给予指定的GLP-1缀合物对膳食诱导的肥胖小鼠的体重和血糖变化的影响。给予GLP-1 (Aib2E16K4tlCex)/雌激素缀合物的小鼠在7天的时期经历总体重(图7a)和血糖水平(图7b)的最大下降。相对于GLP-1 (Aib2E16CexK4tl)/雌激素缀合物，含A22或含d-氨基酸的肽都不表现出大的降低。此外，GLP-1 (Aib2E16CexK4ci)的雌激素缀合物显然比相同肽的非雌激素形式更加有效。图8表明给予指定的GLP-1缀合物对体重、血糖和脂肪量的变化的影响。含有d-氨基酸的肽在所有功效测定方面明显次于含有1-氨基酸的肽。图8a表明给予指定的GLP-1缀合物对膳食诱导的肥胖小鼠的体重变化的影响。在这些剂量下含或不含雌激素的肽在体重减轻方面没有多少明显的区别。虽然如此，在图8b中显示给予指定的GLP-1缀合物对膳食诱导的肥胖小鼠的血糖变化的影响。给予GLP-1 (Aib2E16CexK4ci)/雌激素(3-酯)缀合物的小鼠在0-7天之间经历最大的体内血糖水平变化，远大于用相同但不含雌激素的肽处理的动物。这表明直接改善血糖而与体重差异无关。图8c表明给予指定的GLP-1缀合物对脂肪量变化的影响。图9表明给予指定的GLP-1缀合物对膳食诱导的肥胖小鼠的体重变化、脂肪质量的量和血糖变化的影响。以相对于对照的含有1-氨基酸的升高的剂量给予含有d-氨基酸的GLP-1/雌激素(3-酯)缀合物的小鼠经历体重的最大下降(图9a)而脂肪质量的量最少(图9b)。在O和7天之间含有d-氨基酸的GLP-1/雌激素(3-酯)缀合物存在明显的剂量依赖的血糖降低作用且相对于单独给予GLP-1的小鼠，最高剂量下有所增加(图9c)。图10表明给予指定的GLP-1缀合物对膳食诱导的肥胖小鼠的体重变化和血糖水平变化的影响。给予小鼠含有d-氨基酸的GLP-1/雌激素缀合物，其中的雌激素共价连接成任一种稳定的酰胺或体内不稳定的酯。用不稳定酯缀合物处理的动物经历总体重的最大下降(图1Oa)。图1Ob表明，给予含有d-氨基酸的GLP-1/雌激素酯缀合物的小鼠在O和7天之间经历比给予相当的含有d-氨基酸但含有稳定雌激素缀合物的肽的小鼠更大的血糖水平变化。图11表明指定的缀合物对GLP-1受体和雌激素受体的活性。活性的、亚稳态的GLP-1/雌激素缀合物对GLP-1受体的活性相当(图1la)，而对雌激素受体的活性可变(图1lb)。图12表明给予指定的GLP-1缀合物对膳食诱导的肥胖小鼠的体重、食物摄取量、血糖、肝脏重量和子宫重量的变化的影响。给予非活性的雌激素不稳定的含d-氨基酸的GLP-1/雌激素(3-酯)缀合物的小鼠经历最大的体重下降，高剂量下影响更显著(图12a)。图12b表明，给予非活性的雌激素不稳定的含d-氨基酸的GLP-1/雌激素(3-酯)缀合物的小鼠比给予单独的非活性的含d-氨基酸的GLP-1或雌激素稳定的含d-氨基酸的GLP-1/雌激素(3-醚)缀合物的小 鼠食用显著更少的食物，高剂量下影响更显著。图12c表明，相对于媒介处理的动物，高剂量的雌激素不稳定的、非活性的含d-氨基酸的GLP-1/雌激素(3-酯)缀合物降低血糖水平。图12d表明，给予雌激素不稳定的、非活性的含d-氨基酸的GLP-1/雌激素(3-醚)缀合物的小鼠经历肝脏重量的微小的但比给予雌激素稳定的、非活性的含d-氨基酸的GLP-1/雌激素(3-醚)缀合物的小鼠的更大的下降。图12e表明，与给予单独的非活性GLP-1或非活性的、雌激素稳定的含d-氨基酸的GLP-1/雌激素(3-醚)缀合物的小鼠相比，给予非活性的、雌激素不稳定的含d-氨基酸的GLP-1/雌激素(3-酯)缀合物的小鼠的子宫重量有显著更大的增加。图13表明给予指定的GLP-1缀合物对切除卵巢的小鼠的体重、脂肪量、食物摄取量、血糖水平和子宫重量的变化的影响。图13a表明，与给予单独的活性的、GLP-1激动剂、非活性的、雌激素不稳定的含d-氨基酸的GLP-1/雌酮(3-酯)缀合物或非活性的、雌激素稳定的含d-氨基酸的GLP-1/雌激素(3-醚)缀合物的小鼠的相比，给予活性的、雌激素稳定的GLP-1激动剂/雌激素(3-醚)缀合物的小鼠经历更大的体重下降。图13b表明，给予GLP-1激动剂、非活性的、雌激素不稳定的含d-氨基酸的GLP-1/雌酮(3-酯)缀合物，以及活性的、雌激素稳定的GLP-1激动剂/雌激素(3-醚)缀合物的小鼠表现出脂肪量下降。图13c表明，与给予单独的活性的、GLP-1激动剂、非活性的、雌激素不稳定的含d-氨基酸的GLP-1/雌酮(3-酯)缀合物，或非活性的、雌激素稳定的含d-氨基酸的GLP-1/雌激素(3-醚)缀合物的小鼠相比，给予活性的、雌激素稳定的GLP-1激动剂/雌激素(3-醚)缀合物的小鼠食用更少的食物。图13d表明，给予非活性的、雌激素不稳定的含d-氨基酸的GLP-1/雌酮(3-酯)缀合物，或非活性的、雌激素稳定的含d-氨基酸的GLP-1/雌激素(3-醚)缀合物，或活性的、雌激素稳定的GLP-1激动剂/雌激素(3-醚)缀合物的小鼠比给予媒介的小鼠经历更大的血糖水平的降低，并且表明给予非活性的、雌激素稳定的含d-氨基酸的GLP-1/雌激素(3-醚)缀合物的小鼠并不表现出血糖水平的下降。图13e表明，与给予单独的GLP-1、非活性的、雌激素稳定的含d-氨基酸的GLP-1/雌激素(3-醚)缀合物，或活性的、雌激素稳定的GLP-1/雌激素(3-醚)缀合物的小鼠相比，给予非活性的、雌激素不稳定的含d-氨基酸的GLP-1/雌酮(3-酯)缀合物的小鼠经历子宫重量的显著更大的增加。图14表明给予指定的GLP-1缀合物对切除卵巢的小鼠的体重、脂肪量、血糖和子宫重量的变化的影响。与 给予单独的活性的、GLP-1激动剂，或活性的、雌激素不稳定的GLP-1激动剂/雌酮(3-酯)缀合物的小鼠相比，给予亚稳态的GLP-1激动剂/雌激素缀合物的小鼠经历更大的体重和脂肪量的下降(图14a和14b)。分别给予亚稳态的酶不稳定和酸不稳定的缀合物、GLP-1激动剂/雌激素(17-组织蛋白酶)和GLP-1激动剂/雌激素(17-腙)的小鼠最初具有最大的体重下降，而亚稳态的硫醇易还原缀合物、GLP-1激动剂/雌激素(17-氨基甲酸酯二硫化物)表现出体重的全面最大下降。图14c表示，分别给予亚稳态的硫醇还原不稳定和酸不稳定的缀合物、GLP-1激动剂/雌激素(17-氨基甲酸酯二硫化物)和GLP-1激动剂/雌激素(17-腙)的小鼠比给予雌激素不稳定的GLP-1激动剂/雌酮(3-酯)缀合物的小鼠经历更多的血糖水平下降。图14d表示，与给予三种亚稳态的GLP-1/雌激素缀合物中的任何一种的小鼠相比，给予雌激素不稳定的GLP-1/雌酮(3-酯)缀合物的小鼠经历显著更大的子宫重量的增加。图15表明给予指定的GLP-1缀合物对体重和累积食物摄取量的变化的影响。与给予单独的活性的、GLP-1激动剂或活性的、雌激素不稳定的GLP-1激动剂/雌激素(3-酯)缀合物的小鼠相比，给予活性的、雌激素稳定的GLP-1激动剂/雌激素(3-醚)缀合物的小鼠经历显著更大的体重降低(图15a)。图15b表明，与给予单独的活性的、GLP-1激动剂或活性的、雌激素不稳定的GLP-1激动剂/雌激素(3-酯)缀合物的小鼠相比，给予活性的、雌激素稳定的GLP-1激动剂/雌激素(3-醚)缀合物的小鼠食用明显更少的食物。图16a_e描述表明37°C下人血浆中的指定的GLP-1/雌激素缀合物的稳定性的HPLC谱。雌激素稳定的GLP-1/雌激素(3-醚)缀合物经72小时显示无雌激素释放，而雌激素不稳定GLP-1/雌激素(3-酯)缀合物在3小时后表现出大量的雌激素释放和6小时内的完全的雌激素释放。图17a_c表明给予指定的缀合物对膳食诱导的肥胖症小鼠的体重百分比、累积食物摄取量和血糖水平的变化的影响。图18a-c表明给予指定的缀合物对膳食诱导的肥胖症野生型小鼠、雌激素受体β基因敲除(ERiiKO)小鼠和雌激素受体α基因敲除(ERaKO)小鼠的体重百分比、累积食物摄取量和血糖水平的变化的影响。图19表明指定的GLP-1缀合物随时间对血糖水平的影响。给予GLP-1激动剂的小鼠经48小时表现出血糖的最少的有效下降(除媒介外)，而给予雌激素稳定的GLP-1激动剂/雌激素(3-醚)缀合物的小鼠的血糖经48小时表现出最有效的下降。
发明详述 定义 在描述和要求的本发明中，以下术语将按照以下阐述的定义来使用。如本文所用的术语"约"意指大于或小于所述数值或数值的范围达10%，但是不打算只将任何数值或数值的范围指定在这个更宽的定义。前面有术语"约"的每一个数值或数值的范围也打算包括所述绝对值或数值范围的实施方案。本文使用的术语“药学上可接受的载体”包括任何标准药用载体，例如磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳液例如油/水或水/油乳液、以及各种类型的润湿剂。该术语也包括美国联邦政府监管机构批准或美国药典中列出用于动物，包括人的任何试剂。本文使用的术语“药学上可接受的盐”指的是保留母体化合物的生物活性的化合物的盐，并且这种盐不是生物学上或者不合需要的。本文公开的许多化合物能够通过其上存在氨基和/或羧基或类似基团形成酸和/或碱盐。药学上可接受的碱加成盐可自无机和有机碱制备。衍生自无机碱的盐包括(仅通过举例)钠、钾、锂、铵、钙和镁盐。衍生自有机碱的盐包括，但不限于伯、仲和叔胺的盐。药学上可接受的酸加成盐可自无机和有机酸制备。衍生自无机酸的盐包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。衍生自有机酸的盐包括乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对-甲苯磺酸、水杨酸等。本文使用的术语“治疗”包括预防特定的障碍或病症、或者减轻与具体障碍或病症相关的症状和/或防止或消除所述症状。例如，本文使用的术语“治疗糖尿病”通常指的是以正常水平方向改变血液葡萄糖水平，并且可包括依给定的情况而定增加或减少血液葡萄糖水平。本文使用的"有效"量或"治疗有效量"的胰高血糖素肽指的是非毒性但是足够量的提供期望的作用的肽。例如一种期望的效果应为预防或治疗低血糖症，如例如通过增加血液葡萄糖水平测量的那样。本公开的胰高血糖素肽的备选期望的效果应包括治疗高血糖症，例如如通过血液葡萄糖水平变化为更加接近于正常所测量的那样，或者诱导体重减轻/防止体重增加，例如如通过体重减少或者防止或减少体重增加，或者使身体脂肪分布正常化测量的那样。其为“有效的”量将依个体的年龄和一般状况、给药方式等而在不同受试者与受试者之间变化。因此，不总是能够指定精确的"有效量"。然而，合适的"有效"量在任何个体情况下可由本领域的普通技术人员使用常规试验来确定。术语"肠胃外"意指不通过消化道，而是通过一些其它途径，例如皮下、肌内、脊柱内或静脉内。如本文所用的术语"患者"在无进一步指定下意欲涵盖任何温血脊椎驯化动物(包括例如，但不限于家畜、马、猫、犬和其它宠物)、哺乳动物和人。如本文所用的术语“分离”意指已经从其自然环境中移出。在某些实施方案中，通过重组方法制备类似物，而自宿主细胞分离类似物。本文使用的术语"纯化的"涉及以基本上不含通常与原生或自然环境中的分子或化合物有关的污染物的形式分离分子或化合物，并且意指由于与初始组成的其它组分分离而已经增加纯度。术语"纯化的多肽"本文用于描述已经与包括，但不限于核酸分子、月旨质和碳水化合物的其它化合物分离的多肽。本文使用的术语“肽”包括2个或更多个氨基酸且通常少于50个氨基酸的序列，其中氨基酸为天然存在的或者为编码或非天然存在的或者为非编码的氨基酸。非天然存在的氨基酸指的是不是体内天然存在的，然而可向本文描述的肽结构中增加的氨基酸。本文使用的“非编码的”指的是不为以下20种氨基酸中任何一种的L-异构体的氨基酸:Ala、Cys、Asp、Glu、Pheλ Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、VaK Trp、Tyr0如本文所用的，“部分非肽”指其中一部分分子是具有生物学活性且不包括氨基酸序列的化合物或取代基的分子。
如本文所用的，“非肽的”指具有生物学活性和不包括氨基酸序列的分子。如本文所用的术语"多肽"和"蛋白"是可交换使用的术语，指氨基酸聚合物，而不考虑聚合物的长度。通常，多肽和蛋白的聚合物长度大于"肽"的。在某些情况下，蛋白包括不止一个共价或非共价相互连结的多肽链。贯穿本申请，用数字对具体氨基酸位置的所有加注(例如位置28)指的是原生胰高血糖素中的位置的氨基酸(SEQ ID NO:1601)或其任何类似物中的相应氨基酸位置。例如，本文提及的“位置28”应意指其中SEQ ID NO:1601的第一个氨基酸已经缺失的胰高血糖素的类似物的相应位置27。类似地，本文提及的“位置28”应意指其中已经在SEQ ID NO:1601的N-末端之前增加一个氨基酸的胰高血糖素的类似物的相应位置29。本文使用的“氨基酸修饰”指的是⑴用不同的氨基酸(天然存在的或者编码或非编码的或者非天然存在的氨基酸)取代或替代参考肽的氨基酸(例如SEQ ID NOs:160U1603,1607), (ii)向参考肽(例如SEQ ID NOs:1601、1603、1607)增加氨基酸(天然存在的或者编码或非编码的或者非天然存在的氨基酸)，或者(iii)自参考肽(例如SEQID NOs:1601、1603、1607)缺失一个或多个氨基。在一些实施方案中，氨基酸取代或替代为保守的氨基酸取代，例如在位置1、2、5、
7、8、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21、24、27、28 或 29 中一个或多个位置的氨基酸的保守取代。本文使用的术语"保守性氨基酸取代"为一个氨基酸用具有类似性质例如大小、电荷、疏水性、亲水性和/或芳香性的另一个氨基酸替代，并且包括在以下五组的一组内的交换:1.小的脂肪族、非极性或略带极性的残基:
Ala、Serλ Thr、Pro、Gly ；
I1.极性的、荷负电残基及其酰胺和酯:
Asp、Asn、Glu、Gin、半胱氨酸和同型半胱氨酸；
II1.极性的、荷正电残基:
His、Arg、Lys ;鸟氨酸(Orn)
IV.大的、脂肪族、非极性残基:
Met、Leu、Ile、Val、CyS、正亮氨酸(Nle)、同型半胱氨酸；
V.大的、芳族残基:
Phe> Tyr> Trp、乙酰苯丙氨酸在一些实施方案中，氨基酸取代不是保守的氨基酸取代，例如为非保守的氨基酸取代。本文使用的术语"氨基酸"包括含有氨基和羧基官能团两者的任何分子，其中氨基和羧基连接于相同的碳( α碳)。该α碳任选地可具有一个或两个其它的有机取代基。对于本公开的目的，指明氨基酸而不指定其立体化学打算包括氨基酸的L或D形式，或者外消旋混合物。然而，在其中氨基酸用其3个字母代码指明并且包括上标数字的情况中(即Lys—1)，这种指明打算指定氨基酸的原生L形式，而D形式通过包含3个字母代码前的小写字母d和上标数字来指定(即ClLyiT1)。本文使用的术语“羟基酸”指的是已被修饰，以用羟基替代α碳氨基的氨基酸。本文使用的术语"带电氨基酸"指的是包含在生理pH下的水溶液中具有负电荷(即去质子化)或正电荷(即质子化)的侧链的氨基酸。例如荷负电的氨基酸包括天冬氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、同型半胱氨酸和高谷氨酸，而荷正电的氨基酸包括精氨酸、赖氨酸和组氨酸。荷电氨基酸包括20种编码氨基酸以及非典型或非天然存在的或非编码氨基酸中的荷电氨基酸。如本文所用的术语"酸性氨基酸"指包括第二个酸性部分(除氨基酸的α羧酸外)，包括例如，侧链羧酸或磺酸基团的氨基酸。本文使用的“酰基化”氨基酸为包含酰基的氨基酸，其为非天然-天然存在的氨基酸，与其生成途径无关。生产酰化氨基酸和酰化肽的示例性方法为本领域已知的，并且包括在包含于肽中或肽合成之前酰化氨基酸，随后化学酰化肽。在一些实施方案中，酰基造成肽具有以下作用的一种或多种:(i)延长循环中的半衰期，(ii)延迟作用的起效，(iii)延长作用的持续时间，(iv)改善对蛋白酶例如DPP-1V的抗性，和(V)增加对胰高血糖素超家族肽受体的功效。本文使用的“烷基化”氨基酸为包含烷基的氨基酸，其为非天然-天然存在的氨基酸，与其生成途径无关。产生烷基化氨基酸和烷基化肽的示例性方法为本领域已知的，并且包括在包含于肽中或肽合成之前烷基化氨基酸，随后化学烷基化肽。不受任何具体的理论所束缚，认为肽的烷基化将与肽的酰化获得类似(如果不相同的话)效果，例如循环中的半衰期延长、延迟作用的起效、作用的持续时间延长、对蛋白酶例如DPP-1V的抗性改善和对膜闻血糖素超家族妝受:体的功效增加。本文所用的术语"C1-Cn烷基"，其中η可为1-18，表示具有1-指定数量的碳原子的支链或直链烷基。例如，C1-C6烷基表示具有1-6个碳原子的支链或直链烷基。代表性的C1-Cli^基包括，但不限于，甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等。烧基任选可被例如，轻基(OH)、齒代、芳基、竣基、硫代、C3-C8环烧基和氣基取代。本文所用的术语"Ctl-Cn烷基"，其中η可为1-18，表示具有最多18个碳原子的支链或直链烷基。例如，术语“(Ctl-C6烷基)0Η”表示连至具有最多6个碳原子的烷基取代基的羟基母体部分(例如-OH、-CH2OH' -C2H4OH' -C3H6OH' -C4H8OH' -C5H10OH, -C6H12OH)。本文所用的术语"(:2_(；链烯基"，其中η可为2-18，表示具有2-指定碳原子数和至少一个双键的不饱和支链或直链基团。这类基团的实例包括，但不限于，1-丙烯基、2-丙烯基(-CH2-CH = CH2)、I，3- 丁二烯基(-CH = CHCH = CH2)、1-丁烯基(-CH = CHCH2CH3)、己稀基、戍稀基等。链稀基任选可被例如轻基(OH)、1 代、芳基、竣基、硫代、C3-C8环烧基和氣基取代。术语"C2-Cn炔基"，其中η可为2-18，指具有2-n个碳原子和至少一个三键的不饱和支链或直链基团。这类基团的实例包括，但不限于，1-丙炔基、2-丙炔基、1- 丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基等。炔基任选可被例如，羟基(OH)、齒代、芳基、羧基、硫代基、C3-C8环烧基和氣基取代。本文所用的术语"芳基"指单环或多环(例如，双环、三环或四环)芳族基团。芳基环的大小通过指出存在的碳的数量表示。例如，术语"(C1-C3烷基)(C6-Cltl芳基)"指经1-3元烷基链连着母体部分的6-10元芳基。除非另有说明，芳基可未被取代或被独立地选自例如，齒代、烷基、链烯基、OCF3、NO2、CN、NC、0H、烷氧基、氨基、C02H、C3-C8环烷基、C (O) O烷基、芳基和杂芳基的一个或多个，并且特别是1-5个基团取代。示例性芳基包括，但不限于，苯基、萘基、四氢萘基、氯苯基、茚满基、茚基、甲基苯基、甲氧基苯基、三氟甲基苯基、硝基苯基、2，4_甲氧基氣苯基等。如本文所用的术语"杂芳基"指含有一个或多个芳环且在芳环上含有至少一个氮、氧或硫原子的单环或多环系统。指明存在的碳的数量表明杂芳环的大小和取代基或连接基团的存在。例如，术语"(C1-C6烷基)(C5-C6杂芳基)"指经1-6元烷基链连着母体部分的5或6元杂芳基。除非另有说明，杂芳基可未被取代或被独立地选自例如，卤代、烷基、链烯基、OCF3> NO2, CN、NC、0H、烷氧基、氨基、CO2H, C3-C8环烷基、C (O) O烷基、芳基和杂芳基的一个或多个，并且特别是1-5个基团取代。杂芳基的实例包括，但不限于噻吩基、呋喃基、吡啶基、噁唑基、喹啉基、噻吩基、异喹啉基、吲哚基、三嗪基、三唑基、异噻唑基、异噁唑基、咪唑基、苯并噻唑基、吡嗪基、嘧啶基、噻唑基和噻二唑基。如本文使用的术语“杂烷基”指的是在结构骨架中含有指明数目的碳原子和至少一个杂原子的直链或支链烃。用于本文目的的合适杂原子包括，但不限于N、S和O。杂烷基任选地可例如被羟基(O H)、卤代、芳基、羧基和氨基取代。本文使用的术语“卤素”或“卤代”指的是由氟、氯、溴和碘组成的基团中的一个或多个成员。
本文使用的术语“胰高血糖素相关肽”指的是对胰高血糖素、GLP-1、GLP-2和GIP受体中的任何一个或多个具有生物活性(作为激动剂或拮抗剂)，并且包含与原生胰高血糖素、原生泌酸调节肽、原生毒蜥外泌肽-4、原生GLP-1、原生GLP-2或原生GIP中的至少一个共有至少 40%序列同一性(例如 45 %,50 %,55 %,60 %,65 %,70 %,75 %,80 %,85 %,90%,95%)的氨基酸序列的那些肽。除非另外指明，对胰高血糖素相关肽中氨基酸位置的任何加注(例如NHR配体、缀合部分、亲水性聚合物、酰化或烷基化的连接)指的是相对于原生胰高血糖素氨基酸序列(SEQ ID NO:1601)的对应位置。本文使用的术语分子对于第一种受体相对于第二种受体的“选择性”指的是以下比率:分子对第二种受体的EC5tl除以分子对第一种受体的EC5tlt5例如，对第一种受体具有InM的EC5tl的和对第二种受体具有IOOnM的EC5tl的分子对于第一种受体相对于第二种受体具有100倍的选择性。本文使用的术语“同一性”涉及两种或更多种序列之间的相似性。同一性通过相同的残基数除以残基总数并把结果乘以100以获得百分数来测量。因此，两份完全相同的序列具有100%的同一性，而相对于彼此具有氨基酸缺失、增加或取代的两个序列具有较低程度的同一性。本领域的技术人员应认识到，几种计算机程序，例如采用算法例如BLAST(Basic Local Alignment Search Tool,Altschul 等(1993) J.Mol.Biol.215:403-410)的那些计算机程序可用于测定序列同一性。本文使用的术语“胰高血糖素超家族肽”指的是在其N-末端和C-末端区域结构相关的一组妝(参见例如 Sherwood et al., Endocrine Reviews 21:619-670 (2000))。该组的成员包括所有的胰高血糖素相关肽，以及生长激素释放激素(GHRH;SEQ ID NO:1619)、血管活性肠肽(VIP ;SEQ ID NO:1620)、垂体腺苷酸环化酶激活多肽27 (PACAP-27 ;SEQ IDNO:1621)、组氨酸异亮胺酸肽(PHI ；SEQ ID NO:1642)、组胺酸蛋氨酸肽(PHM ；SEQ ID NO:1622)、促胰液素(SEQ ID NO:1623)和相对于原生肽具有最多1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种氨基酸修饰的类似物、衍生物或缀合物。这种肽优选地保留与胰高血糖素受体超家族的受体相互作用的能力(激动剂或拮抗剂)。除非另外指明，对胰高血糖素超家族肽的氨基酸位置的任何加注(例如N HR配体、缀合部分、亲水性聚合物、酰化或烷基化的连接)指的是相对于原生胰高血糖素氨基酸序列的相应位置(SEQ ID NO: 1601)，对于代表性胰高血糖素超家族肽的比对参见图1。术语“胰高血糖素激动剂肽”指的是结合于并激活胰高血糖素受体的下游信号传导的化合物。然而，该术语不应视为将化合物限于仅对胰高血糖素受体具有活性。当然啦，本公开的胰高血糖素激动剂肽可如本文进一步讨论的那样，对其它受体呈现另外的活性。胰高血糖素激动剂肽例如可对GLP-1受体和/或GIP受体呈现活性(例如激动剂活性)。而且，术语“胰高血糖素激动剂肽”不应视为将化合物仅限于肽。相反地，除肽以外的化合物也被包括在该术语内。因此，胰高血糖素激动剂肽在一些方面为以缀合物形式(杂二聚体、多聚体、融合肽)存在的肽、化学衍化的肽、肽的药用盐、肽模拟物等。术语“GLP-1激动剂肽”指的是结合于并激活GLP-1受体的下游信号传导的化合物。然而，该术语不应视为将化合物限于仅对GLP-1受体具有活性。相反，本公开的GLP-1激动剂肽可如本文进一步讨论的那样，对其它受体呈现另外的活性。GLP-1激动剂肽例如可对胰高血糖素受体和/或GIP受体呈现活性(例如激动剂活性)。而且，术语“GLP_1激动剂肽”不应视为将化合物仅限于肽。相反，除肽以外的化合物也被该术语涵盖。因此，GLP-1激动剂肽在一些方面为以缀合物形式(杂二聚体、多聚体、融合肽)存在的肽、化学衍化的肽、肽的药用盐、肽模拟物等。术语“GIP激动剂肽”指的是结合于并激活GIP受体的下游信号传导的化合物。然而，该术语不应视为将化合物限于仅对GIP受体具有活性。相反，本公开的GIP激动剂肽可如本文进一步讨论的那样，对其它受体表现出另外的活性。GIP激动剂肽例如可对GLP-1受体表现出活性(例如激动剂活性)。同样，术语“GIP激动剂肽”不应视为将化合物仅限于肽。相反，该术语涵盖除肽以外的化合物。因此，GIP激动剂肽在一些方面为以缀合物形式(杂二聚体、多聚体、融合肽)存在的肽、化学衍化的肽、肽的药用盐、肽模拟物等。术语"胰高血糖素拮抗剂肽"指抵消胰高血糖素活性或阻止胰高血糖素功能的化合物。例如，胰高血糖素拮抗剂对胰高血糖素受体呈现由胰高血糖素获得的最大应答的至少60%抑制作用(例如至少70%、80%、90%或者更大的抑制作用)。在一个特别的实施方案中，约I μ M浓度的胰高血糖素拮抗剂呈现经胰高血糖素对胰高血糖素受体实现的少于约20% (例如少于约10%或5%)的最大激动剂活性。该术语不应视为将化合物限于仅对胰高血糖素受体具有活性。相反，本公开的胰高血糖素拮抗剂肽可对胰高血糖素受体(例如部分激动)或其它受体呈现另外的活性。胰高血糖素拮抗剂肽例如可对GLP-1受体表现出活性(例如激动 剂活性)。同样，术语“胰高血糖素拮抗剂肽”不应视为将化合物仅限于肽。相反，这些术语涵盖除肽之外的化合物。因此，在一些方面，胰高血糖素激动剂肽为以缀合物形式存在的肽、化学衍化的肽、肽的药用盐、肽模拟物等。术语“GLP-1拮抗剂肽”指的是抵消GLP-1活性或阻止GLP-1功能的化合物。例如，GLP-1拮抗剂对GLP-1受体呈现由GLP-1获得的最大应答的至少60%抑制作用(例如至少70%、80(%、90(%或者更多的抑制作用)。在一个特别的实施方案中，约I μ M浓度的GLP-1拮抗剂呈现通过GLP-1对GLP-1受体实现的少于约20% (例如少于约10%或5% )的最大激动剂活性。术语不应被解释为限定化合物仅对GLP-1受体具有活性。相反，本公开的GLP-1拮抗剂肽可对GLP-1受体(例如部分激动)或其它受体呈现另外的活性。GLP-1拮抗剂肽例如可对胰高血糖素受体表现出活性(例如激动剂活性)。同样，术语“GLP-1拮抗剂肽”不应被解释为将化合物仅限于肽。相反，这些术语涵盖除肽之外的化合物。因此，在一些方面，GLP-1激动剂肽为以缀合物形式存在的肽、化学衍化的肽、肽的药用盐、肽模拟物
坐寸ο术语"GIP拮抗剂肽"指抵消GIP活性或阻止GIP-1的功能的化合物。例如，GIP拮抗剂呈现通过GIP对GIP受体实现的至少60%抑制(例如，至少70%、80%、90%或更多抑制)的最大应答。在一个特别的实施方案中，约I μ M浓度的GIP拮抗剂呈现经GIP对GIP受体实现的少于约20% (例如少于约10%或5%)的最大激动剂活性。该术语不应被解释为限定化合物仅对GIP受体具有活性。相反，本公开的GIP拮抗剂肽可对GIP受体(例如，部分激动作用)或其它受体表现出另外的活性。GIP拮抗剂肽，例如，可对胰高血糖素受体表现出活性(例如，激动剂活性)。同样，术语“GIP拮抗剂肽”不应被解释为限定化合物仅为肽。相反，这些术语涵盖除肽之外的化合物。因此，在一些方面，GIP激动剂肽为以结合形式存在的肽、化学衍化的肽、肽的药用盐、肽模拟物等。本文所用的术语“胰高血糖素类似物”和“胰高血糖素肽”可相互交换使用，指对胰高血糖素相关肽受体具有所指活性的胰高血糖素的类似物。本文所用的术语“原生胰高血糖素”指由SEQ ID NO:1601序列组成的肽。本文所用的术语“原生GLP-1”是指明GLP-1 (7-36)酰胺(SEQ ID NO:1603),GLP-1 (7-37)酸(SEQ ID NO:1604)或这两种化合物的混合物的通用术语。本文所用的术语“原生GIP”指由SEQ ID NO:1607组成的肽。本文所用的分子的“胰高血糖素功效”或“与原生胰高血糖素相比较的功效”指分子对胰高血糖素受体的EC5tl除以原生胰高血糖素对胰高血糖素受体的EC5tl的比率。本文使用的分子的“GLP-1功效”或“与GLP-1相比较的功效”指的是分子对GLP-1受体的EC5tl除以原生GLP-1对GLP-1受体的EC5tl的比率。本文使用的分子的“GIP功效”或“与原生GIP相比较的功效”指的是分子对GIP受体的EC5tl除以原生GIP对GIP受体的EC5tl的比率。本文使用的“NHR配体”指对核激素受体(NHR)具有生物学活性(或者激动剂或者拮抗剂)的疏水或亲脂部分。NHR配体为完全或部分非肽的。在某些实施方案中，NHR配体是结合至NHR并活化其的激动剂。在其它实施方案中，NHR配体是拮抗剂。在某些实施方案中，NHR配体是通过完全或部分阻断原生配体结合至活化位点起作用的拮抗剂。在其它实施方案中，NHR配体是通过结合至活化位点或变构位点和阻止NHR的活化或使其失活起作用的拮抗剂。如本文所用的“核 激素受体”(NHRs)指有时与其它共活化剂和共抑制剂协作(concert)在细胞核中调节基因表达的配体活化的蛋白。如本文所用的“类固醇及其衍生物”指或者天然存在或者合成的具有式A结构的化合物:
18 p4
12 Mej
(R1)O^V^T 7
式A
其中R1和R2，当存在时，独立地为在式A化合物结合至核激素受体时允许或促进激动剂或拮抗剂活性的部分；R3和R4独立地为当式A化合物结合至核激素受体时允许或促进激动剂或拮抗剂活性的部分；和各虚线表示任选的双键。式A可进一步包括位置1、2、3、4、5、
6、7、8、9、11、12、14、15、16和17中的一个或多个位置上的一个或多个取代基。期望的任选的取代基包括，但不限于，OH、NH2、酮和C1-C18烷基。类固醇及其衍生物的特别的非限制性实例包括胆固醇、胆酸雌二醇、睾酮和氢化可的松。如本文所用的，“胆汁酸及其衍生物”指或者天然存在或者合成的式M化合物:
权利要求
1.一种包含结构Q-L-Y的化合物； 其中Q为胰高血糖素超家族肽； Y是活化核激素受体的NHR配体，具有约I μ M或者更小的EC5tl,并且具有最多约1000道尔顿的分子量；和 L为连接基团或键。
2.权利要求1的化合物，其中Q对GLP-1受体表现出原生GLP-1的至少0.1 %的活性。
3.权利要求1或2的化合物，其中Q对胰高血糖素受体表现出原生胰高血糖素的至少0.1 %的活性。
4.权利要求1、2或3中任何一项的化合物，其中Q对GIP受体表现出原生GIP的至少0.1 %的活性。
5.任何一项前述权利要求的化合物，其中Q对GLP-1受体具有Y对对核激素受体的EC5tl的10倍以内的EC5Q。
6.任何一项前述权利要求的化合物，其中Q对胰高血糖素受体具有Y对核激素受体的EC50的10倍以内的EC5tl。
7.任何一项前述权利要求的化合物，其中Q对GIP受体具有Y对核激素受体的EC5tl的10倍以内的EC5tl。
8.任何一项前述权利要求的化合物，其中的Y是对I型或II型核激素受体起作用的NHR配体。
9.权利要求8的化合物，其中的Y是对选自雌激素受体、糖皮质激素受体、盐皮质激素受体、孕酮受体、雄激素受体、甲状腺激素受体、视黄酸受体、过氧化物酶体增殖物激活受体、肝X受体、法呢酯衍生物X受体、维生素D受体、RAR相关孤儿受体和娠烷X受体的核激素受体起作用的NHR配体。
10.权利要求9的化合物，其中Y是激活雌激素受体、雄激素受体、糖皮质激素受体或RAR相关孤儿受体的NHR配体。
11.权利要求10的化合物，其中的Y是激活雌激素受体的NHR配体。
12.任何一项前述权利要求的化合物，其中的Y选自脂肪酸及其衍生物、胆汁酸及其衍生物、胆固醇及其衍生物和类固醇及其衍生物。
13.权利要求12的化合物，其中的Y选自雌二醇及其衍生物、雌酮及其衍生物、睾酮及其衍生物和皮质醇及其衍生物。
14.任何一项前述权利要求的化合物，其中的L是体内稳定的。
15.任何一项前述权利要求的化合物，其中的L是可体内水解的。
16.任何一项前述权利要求的化合物，其中的L是体内亚稳态的。
17.权利要求14的化合物，其中的L包括醚部分或酰胺部分。
18.权利要求15的化合物，其中的L包括酯部分。
19.权利要求16的化合物，其中的L包括酸不稳定、易还原或酶不稳定的部分。
20.权利要求19的化合物，其中的L包含腙部分、二硫化物部分或组织蛋白酶可裂解的部分腙。
21.任何一项前述权利要求的化合物，其中的Q包括与原生胰高血糖素至少50%相同的氨基酸序列，该序列保留对应于原生胰高血糖素(SEQ ID NO:1601)的氨基酸12-29的氨基酸的α -螺旋构象。
22.任何一项前述权利要求的化合物，其中的Q包括与原生GLP-1至少50%相同的氨基酸序列，该序列保留对应于原生GLP-1 (SEQ ID NO: 1603)的氨基酸12-29的氨基酸的α -螺旋构象。
23.任何一项前述权利要求的化合物，其中Q包含以下氨基酸序列: X1-X2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Z (SEQ ID NO:839)，其上具有 1-3 个氨基酸修饰， (a)其中X1和/或X2为减少胰高血糖素肽对经二肽基肽酶IV(DPP-1V)裂解的敏感性的非原生氨基酸序列(相对于SEQ ID NO:1601), (b)其中Z 选自-COOH、-Asn-COOH、Asn-Thr-COOH 和 W-C00H，其中 W 为 1-2 个氨基酸或GPSSGAPPPS, (c)其中Q包含选自以下的修饰: (i)在i和i+4位的氨基酸侧链之间的内酰胺桥，其中i为12、16、 20或24，和 (ii)在胰高血糖素肽的16、20、21和24位的I个、2个、3个或全部氨基酸被α，α二取代的氨基酸取代； 其中Q表现出胰高血糖素激动剂活性。
24.权利要求23的化合物，其中Q包括氨基酸序列SEQID NO:1601并包括: (a)选自以下的至少一个氨基酸修饰: (i)用荷电氨基酸取代29位的Thr； (ii)用选自Lys、Arg、His、Asp、Glu、半胱氨酸和同型半胱氨酸的荷电氨基酸取代29位的Thr ； (iii)在29位用Asp、Glu或Lys取代； (iv)在29位用Glu取代； (V)在29位之后插入1-3个荷电氨基酸； (vi)在29位之后插入Glu或Lys； (vii)在29 位之后插入 Gly-Lys 或 Lys-Lys ； (viii)在3-位用包含以下结构1、II或III的侧链的氨基酸取代Gln:
25.权利要求1-22中任一项的化合物， 其中Q包含具有以下修饰的 SEQ ID NO:1601的胰高血糖素相关肽: (a)赋予GIP激动剂活性的在I位的氨基酸修饰， (b)选自以下的修饰: (i)在i和i+4位的氨基酸侧链之间或在j和j+3位的氨基酸侧链之间的内酰胺桥，其中i为12、13、16、17、20或24，和其中j为17，和 (ii)在类似物的16、20、21和24位的I个、2个、3个或全部氨基酸被α，α二取代的氨基酸取代， (c)1-10个其它的氨基酸修饰； 其中Q对GIP受体表现出活性。
26.权利要求25的化合物，其中的1-10处另外的氨基酸修饰选自: (i)在2 位用 D-Ser、Ala、D_Ala、Gly、N-甲基-Ser、Aib、Val 或 ε -氨基-N- 丁酸取代丝氨酸； (ii)在16位用Glu、Gin、高谷氨酸、同型半胱氨酸、Thr、Gly或Aib取代丝氨酸； (iii)在20位用Ser、Thr、Ala、Lys、瓜氨酸、Arg、Orn或Aib取代谷氨酰胺； (iv)在27位用Leu取代蛋氨酸； (V)在28位用Ala取代精氨酸； (vi)在29位用Gly取代苏氨酸；^)在2、5、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、20、21、24、27、28和 29 位中的任何位置的保守取代； (viii)向C-末端增加1-21个氨基酸； (ix)向C-末端增加氨基酸序列GPSSGAPPPS； (X)向C-末端增加氨基酸序列GPSSGAPPPSX，其中X为任何氨基酸；(xi)用酰胺或羧酸酯取代C-末端羧基，和(xii)其组合。
27.权利要求1-22中任一项的化合物，其中Q包括氨基酸序列:X1—X2—Gln—Gly—Thr—Phe—Thr—Ser—Asp—X3—Ser—X4—Tyr—Leu—X5—X6—X7—X8—Ala-Xg-X1Q-Phe-X11-X12-Trp-Leu-X13-X14-X15 (SEQ ID NO:55)，或其类似物，其中所述类似物与 SEQ ID NO:55的不同之处在于1-3个选自1、2、3、5、7、10、11、13、14、17、18、19、21和25位的氨基酸修饰，其中: (a) X1 为 His、D-HiS、(脱-氛基)His、轻基-His、乙酸基-His、闻-His或α，α-二甲基咪唑乙酸(DMIA)、N-甲基His、α-甲基His或咪唑乙酸；(b) X2为Ser、D-Ser、Ala、D-Ala、Val、Gly、N-甲基 Ser、氨基异丁酸(Aib)或 N-甲基 Ala; (c)X3> X4> X5、X10> X11和X14各自为任何氨基酸； (d)X6为Ser、Glu、Gin、高谷氨酸或同型半胱氨酸； (e)X7为Arg、Gin、Lys、Cys>Orn>同型半胱氨酸或乙酰基苯丙氨酸； (f)X8为Arg、Ala、Lys、Cys> Orn>同型半胱氨酸或乙酰基苯丙氨酸；(g) X9为Gin、Lys>Arg、Orn或瓜氨酸； (h)X12为Ala、Gin、Glu、Lys、Cys> Orn>同型半胱氨酸或乙酰基苯丙氨酸；(i)X13SMet、Leu或 Nle ； (j)Xi5为Thr、Gly、Lys、Cys、Orn、同型半胱氨酸或乙酰基苯丙氨酸；并且任选地包含以下修饰之一: (a)在28-29位氨基酸缺失； (b)在29位氨基酸缺失； (c)向C-末端增加氨基酸序列GPSSGAPPPS;和 (d)向C-末端增加氨基酸序列GPSSGAPPPSX，其中X为任何氨基酸；和 (e)其组合。
28.权利要求1-22中任一项的化合物，其中Q包括因不超过十处氨基酸修饰而不同于SEQ ID NO:1601的氨基酸序列，修饰包括: (a)在16、20、21和/或24位的一个或多个氨基酸用Aib取代，和 (b)提供对经二肽基肽酶IV的裂解的敏感性减少的在I和/或2位的氨基酸修饰，并且 任选地包含一种或多种以下的修饰: (a)在28和29位氨基酸缺失； (b)在29位氨基酸缺失； (c)向C-末端增加氨基酸序列GPSSGAPPPS； (d)向C-末端增加氨基酸序列GPSSGAPPPSX，其中X为任何氨基酸；(e)用酰胺或羧酸酯取代C-末端羧基，并且 其中Q表现出GLP_1激动剂活性和胰高血糖素激动剂活性。
29.任何一项前述权利要求的化合物，其中L-Y共价缀合于Q的N-末端、C-末端或氨基酸侧链。
30.权利要求26的化合物，其中L-Y被缀合至对应于原生胰高血糖素(SEQID NO:1601)的 10、30、37、38、39、40、41、42 或 43 位的 Q 的氨基酸侧链。
31.权利要求27的化合物，其中L-Y被缀合至对应于包含原生胰高血糖素(SEQID NO:1601)的序列的10和/或40位的Q的氨基酸侧链。
32.—种包含结构A-B的前述权利要求中任一项中的化合物的前药，其中 A为氨基酸或含氧酸； B为通过在B的羧基部分和Q的胺之间的酰胺键连接于Q的N-烷基化氨基酸； A、B或者A-B被连接的Q的氨基酸为非编码的氨基酸，进一步地其中在生理条件下，A-B自Q在PBS中的化学裂解半衰期(t1/2)为至少约I小时-约I周。
33.权利要求32的化合物，其中A-B包括结构:
34.任何一项前述权利要求的化合物，所述化合物进一步包含经烷基胺、酰胺、醚、酯、硫醚或硫代酸酯连键共价连接于酰基或烷基的Q上的氨基酸侧链，其酰基或烷基相对于天然存在的氨基酸而言为非原生的。
35.权利要求34的化合物，其中酰基或烷基所连的氨基酸在对应于包含原生胰高血糖素的序列的10、20、24、30、37、38、39、40、41、32或43位或C-末端氨基酸的的位置。
36.权利要求35的化合物，其中酰基或烷基所连的氨基酸在对应于包含原生胰高血糖素的序列的10和/或40位的位置。
37.权利要求36的化合物，其中的酰基或烷基经间隔区连至氨基酸的侧链。
38.权利要求37的化合物，其中的间隔区是酸性氨基酸或酸性二肽。
39.任何一项前述权利要求的化合物，其中的Q共价连至一个或多个异源部分。
40.权利要求39的化合物，其中的一个或多个异源部分选自肽、多肽、核酸分子、其片段抗体、聚合物、量子点、小分子、毒素、诊断剂和任何前述物质的组合。
41.任何一项前述权利要求的化合物，其中Q选自:SEQID NOs:1-564、566-570、573-575、577、579-580、585-612、616、618_632、634_642、647、657_692、694_695、715-718、.722、724-725、729、731-760、801-878、883-919、1001-1275、1301 — 1371、1401-1518 和1601-1650。
42.一种二聚体或多聚体，其包含任何一项前述权利要求的化合物。
43.一种药用组合物，所述组合物包含任何一项前述权利要求的化合物、权利要求42的二聚体或多聚体，或其组合，以及药学上可接受的载体。
44.一种治疗患者的疾病或医学病症的方法，其中所述疾病或医学病症选自代谢综合征、糖尿病、肥胖症、脂肪肝和神经退行性疾病，所述方法包括以有效治疗疾病或医学病症的量给予患者权利要求43的药用组合物。
全文摘要
本文提供能对核激素受体起作用的与NHR配体缀合的胰高血糖素超家族肽。本文还提供含有本发明缀合物的药用组合物和药剂盒。本文进一步提供治疗疾病，例如，代谢障碍，诸如糖尿病和肥胖症的方法，其包括给予本发明的缀合物。
文档编号A61K38/26GK103079587SQ201180037112
公开日2013年5月1日 申请日期2011年5月10日 优先权日2010年5月13日
发明者R·D·戴马志, 杨彬, B·费南 申请人:印第安纳大学研究及科技有限公司