专利名称：重编程癌细胞的制作方法
技术领域：
本申请描述了用于重编程癌细胞从而治疗或预防癌症的方法。
背景技术：
癌细胞与干细胞相似MUCl是在所有成体上皮细胞中发现的跨膜蛋白。然而，其在癌细胞中的表达模式不同于其在健康细胞中的表达模式。在癌细胞中，蛋白质均匀地在整个细胞表面散布，然而在健康细胞中，其表达限制到顶缘(apical border)上。我们最近发现MUCl的跨膜剪切产物，我们将其命名为MUC1* (在一些先前的专利申请中，称为MGFR)，起到在癌细胞上的I类生长因子受体的作用^已经阐明了 MUC1*起作用的机制；配体诱导二聚化的其截短细胞外结构域，基本上是由主要序列 PSMGFR 序列(GTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA (SEQ ID NO:1))所组成的，其激活生长和存活路径。MUCl剪切释放出细胞外结构域的大部分，以及掩盖配体结合位点的自我聚集结构域。我们最近发现，在多能干`细胞中，几乎所有的MUCl剪切为生长因子受体形式MUC1*，并且其起驱动干细胞生长的生长因子受体的作用2。在多能干细胞中，需要生长因子受体MUC1*的作用，用于其存活。在干细胞中，MUC1*的细胞外结构域二聚化的完全阻断是致死的。然而，当干细胞启动分化过程时，极大地减少了 MUCl的剪切。事实上，新分化的干细胞大体上仅仅表达全长的MUCl。我们显示，蛋白质的MUC1*形式是生长因子受体，仅仅其活化作用是胚胎多能干细胞和诱导性多能干细胞生长和存活所必须和足够的。在癌细胞中，大多数MUCl剪切为MUC1*。随着癌症阶段发展，MUC1*的比例增加直到癌细胞，像多能干细胞，排他地表现出MUC1*。肿瘤干细胞比正常的癌细胞表达出更多的MUC1*3。获得对化疗药物抗性的癌细胞，通过增加MUC1*的表达而不是MUCl-FL (全长)的表达，从而获得抗性。多能干细胞分泌MUC1*活化的匪23(MNE-7、H1或H2)，其与MUC1*共同定位。分泌匪23的癌细胞以及优选地形成二聚物的突变体组成型活化MUC1*阳性细胞。仅仅MUC1*的转染是转化细胞所足够的。成体细胞能够重编程从而回复为多能干细胞最近证实，可以“重编程”成体细胞从而变为多能干细胞。为了区分这些细胞和来自自然发生的胚胎干细胞，这种新类型的重编程细胞叫做“诱导性多能细胞”或iPS细胞。第一个iPS细胞是通过用四(4)个基因转导细胞制成的。一个组插入基因Oct4、Sox2、Klf4和c_Myc4,而另一个组插入基因0ct4、Sox2、Nanog和Lin285。所有这六个基因，0ct4、Sox2、Klf4、c_Myc、Nanog和Lin28，编码转录因子，其然后调节其他基因的转录。由两个组使用的方法中共同的基因是0ct4、Sox2，并且通过外插法(extrapolation)Klf4/Nanog,因为Klf4是诱导Nanog表达的转录因子。后来的工作显示，通过插入仅仅三个基因0ct4、Sox2以及Klf4或Nanog,可以诱导细胞从而变为多能性的。更多最近的研究已经显示，通过添加基因编码的蛋白质而不是基因自身，可以替换这些基因中的一些。在另一个研究中，发现转导基因0ct4和Sox2以及诱导Nanog表达的化学化合物可以诱导多能性6。FGF引发小鼠干细胞路径，并且使人类干细胞成为始发态的(primed)而不是原始态的(多能性的)最近的研究已经质疑根据现有技术方法培养的人类干细胞是不是真正多能的7。在具有转折性质的研究论文中，Jaenisc h和同事描述，人类胚胎干(ES)细胞是“始发态的”而不是叫做“原始态”真正多能干细胞。通过比较人类胚胎干(ES)细胞和小鼠ES细胞，其中两个都是从胚泡阶段的胚胎中获得的，研究者发现，人类ES细胞在形态和分子上不同于小鼠干细胞。他们进一步公开，迄今分离的人类ES细胞不是真正多能性的，其更像从发育的较迟阶段的外胚层阶段获得的小鼠干细胞。这些发现激烈地争论，我们认为是人类多能ES细胞的不是真正的多能干细胞。Jaenisch和同事发现了识别原始态干细胞的分子标记和识别始发态的干细胞的分子 标记。通过异位诱导与LIF和糖原合成酶激酶3 β (GSK3 β )的抑制因子，以及丝裂原活化蛋白激酶(MAP激酶ERK1/2)路径结合的0ct4、Klf4和Klf2因子，研究者能够暂时将人类始发态的干细胞回复为原始态状态。毛猴素(forskolin)，能够诱导Klf4和Klf2表达的蛋白激酶A路径的激动剂，短暂地替换用于异位转基因表达的需要。一旦人类ES细胞回复为原始态状态，其就需要在ro/CH/LIF/FK中培养，但是在其成熟为始发态的细胞之前会只保持原始态几个世代(passage)。这是研究者不能够识别促进和维持人类ES细胞在多能原始态状态中的生长因子的重大证据。与传统的人类ES细胞相比较，这些后生转化的原始态干细胞获得Klf4、Klf2、Tbx3、Gbx2、Lin28和S0CS3的表达，下文中称为原始态标记，并且失去0tx2、Soxl7、Cerl,Foxa2、Zicl, Lhx2和XIST的表达，其是用于更成熟的始发态的状态的标记。另外，暂时回复为原始态状态的始发态细胞以片状而不是以群落生长。然而，该先前的研究没有能够识别使人类干细胞像原始态干细胞一样增殖的生长路径或生长因子。进一步，甚至在因子的混合物中异位表达基因和生长，回复的细胞维持原始态一小段时间，然后发展为始发态的阶段。因此，需要的是从胚胎或从诱导性多能状态收获后直接像原始态干细胞一样增殖人类干细胞的方法，或是将始发态的干细胞回复为原始态状态，然后使其在那个状态维持延长的一段时间的方法。需要的是将始发态的干细胞稳定地转化为原始态状态的方法，而现在的方法只能够暂时地使细胞保持在原始态状态。进一步，用于将始发态的干细胞转化原始态状态的该先前报道的方法不是完全的回复，因为其报道只观察到原始态标记对始发态的标记的表达增加或降低。需要的是用于将始发态的细胞转化为原始态状态的方法，其中转化是完全转化，其不表达始发态的状态的标记。由此得出结论，为了有效指导人类干细胞的分化，要求原始态干细胞的起始原料(starting stock)。微小RNA的使用为癌症的治疗带来了广阔的前景8’9’1(1。使用始发态的而不是原始态人类干细胞，已经执行了旨在识别多能干细胞、分化干细胞和癌细胞之间不同的调节成分(regulatory component)的所有先前工作，这提出了用于人类治疗基础无效的(invalid)结果。直到现在，声称识别诱导分化的微小RNA的研究者已经使用利用FGF以及小鼠饲养细胞增殖的干细胞n’12’13，新的研究显示其将人类细胞转化为其不再是真正多能的始发态的状态。重要地，也需要的是使用原始态人类干细胞执行严格的实验，因为使用通过FGF中断(corrupt)为始发态的状态的人类干细胞和小鼠成分的这些实验,很可能产生不能应用到人类药物中的错误信息。直到现在，根据起源的组织、癌细胞过表达的分子标记或癌细胞过表达的生长因子受体来表征癌症。然而，仍然不能充分地预测患者对给定的治疗所起的反应，另外，现在的治疗集中的太窄，在大多数情况下不能完全地治疗癌症，伴随着经常发生的最终的转移。因此，在技术上需要，根据控制癌症生长和分化的调节成分(调节元件，regulatory element)的其独特标志(signature),开发将癌症分类的方法,这样能够开发重编程每一个癌症亚型的治疗。在技术上也需要，开发用于将癌症亚型分类的方法，其允许准确地预测患者的组，这将对具体的治疗起反应。在技术上也需要，开发用于生长和维持原始态人类干细胞的方法，这样控制人类干细胞和癌细胞生长和分化的调节标志能够准确地识别，并且利用于抗癌症治疗。
发明内容
本发明克服了上面提到的问题，并且提供了用于生长和维持原始态干细胞、根据控制癌症生长和分化的调节网络将癌症分类的方法，以及通过重编程或扰乱调节癌症生长和分化的网络，用于治疗癌症或处于发展癌症风险中的患者的方法。
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在一个实施例中，通过给予患者或处于发展癌症风险中的人递送(deliver)诱导分化的调节信号的成分(element)，来抑制或预防癌症。在另一个实施例中，通过给予患者或处于发展癌症风险中的人递送两个不同调节信号的两个不同成分，抑制或预防癌症，其中一个诱导多能性，另一个诱导分化。在另一个实施例中，通过给予患者或处于发展癌症风险中的人递送调节信号的至少两种成分的混合物，抑制或预防癌症，其中这些成分在不同亚型的两种癌症中占优势。又在另一个实施例中，通过给予癌症患者递送在不同亚型的癌症中占优势的调节信号的成分，抑制癌症。例如，用递送在MUC1*阴性癌症中占优势的调节信号的成分，可以治疗具有MUC1*阳性癌症的患者。另外，用递送诱导分化的调节信号的成分，可以治疗患者。在优选的实施例中，通过给予患者MUC1*阴性癌症的微小RNA标志(signature),能够治疗或预防MUC1*阳性癌症。在另一个优选的实施例中，通过给予患者miR-145治疗或预防乳癌和前列腺癌。在一个方面，本发明预期治疗，包括在分化中占优势的miR-145和其他微小RNA，可选地连同在MUC1*阴性癌症中占优势的微小RNA。递送调节信号的成分是核酸、RNA、微小RNA、基因以及基因产物。递送调节信号的成分可以是微小RNA、微小RNA簇、基因或其诱导的基因产物，或设计用来使微小RNA沉默的相同组的基因沉默的互补核酸。在优选的实施例中，递送调节信号的成分是微小RNA、微小RNA 簇。在另一个实施例中，给予患者来自超过一个癌症类型的信号，用于治疗或预防癌症。在一个方面，本发明涉及治疗患有癌症的患者的方法，包括给予患者组合物，其包括(i)至少两种调节成分，或(ii)引起至少一种癌症亚型标志(signature)所独特的至少两种调节成分表达的试剂，其中癌症亚型标志不同于折磨患者的癌症的癌症亚型标志。调节成分可以是RNA、微小RNA或蛋白质。引起至少一种癌症亚型标志所独特的至少两种调节成分表达的试剂是小分子。微小RNA可以是微小RNA-145。使患者受折磨的癌症可以是MUC1*阳性癌症，并且至少一种癌症亚型标志所独特的调节成分可以来自MUC1*阴性癌细胞。在一个方面，调节成分的癌症亚型的癌细胞可以与患者的癌细胞共培养(共培养)。在进一步的其他方面，本发明涉及治疗患有癌症的患者的方法，包括给予患者组合物，其包括(i)至少两种调节成分，或(ii)引起至少一种干细胞亚型标志所独特的至少两种调节成分表达的试剂。干细胞亚型标志可以是新分化的人类干细胞(newlydifferentiating human st em cell)或是分化过的细胞(differentiated cell)的亚型标志。干细胞可以是原始态(naive)干细胞。使患者受折磨的癌症可以是MUC1*阳性癌症，并且至少一种干细胞亚型标志所独特的成分可以来自新分化的人类干细胞或分化过的细胞。干细胞可以是原始态干细胞。调节成分可以是RNA、微小RNA或蛋白质。微小RNA可以是微小RNA-145。引起至少一种干细胞亚型标志所独特的至少两种调节成分表达的试剂可以是小分子。在另一个方面，本发明涉及治疗患有癌症的患者的方法，包括给予患者组合物，其包括(i)至少两种调节成分，或(ii)引起至少一种增殖平稳期(proliferation plateau)标志所独特的至少两种调节成分表达的试剂。调节成分可以是RNA、微小RNA或蛋白质。微小RNA可以是微小RNA-145。引起至少一种增殖平稳期标志所独特的至少两种调节成分表达的试剂可以是小分子。在另一个方面，本发明涉及用于在患有癌症的个体中，识别治疗癌症有用的调节成分的方法，其包括(i)从人类原始态多能干细胞中获得调节成分的第一分子组合物；(ii)从步骤(i)的原始态多能干细胞分化的细胞中，获得调节成分的第二分子组合物；(iii)在调节成分的第一和第二分子组合物之间，比较调节成分的分子组成(molecular composition);以及(iv)识别在调节成分的第二分子组合物中表达显著增加的调节成分。(V)从使患者受折磨的癌症亚型中，获得调节成分的第三分子组合物；(vi)比较在(iv)中识别的调节成分和调节成分的第三分子组合物；(Vii)识别在患者的癌症亚型中不存在或显著减少的调节成分。在该方法中，调节成分(regulatoryelement)可以是 RNA、微小 RNA (microRNA)或蛋白质。
在另一个方面，本发明涉及用于在患有癌症的个体中，识别治疗癌症有用的调节成分的方法，包括(i)从癌细胞中获得调节成分的第一分子组合物；(ii)从人类新分化的干细胞中，获得调节成分的第二分子组合物；(iii)在第一和第二分子组合物成分之间，比较调节成分的分子组成；以及(iv)识别在调节成分的第二分子组合物中表达增加的调节成分。在该方法中，第一分子组合物可以来自于患者的癌症亚型。调节成分可以是RNA、微小RNA或蛋白质。在另一个方面，本发明涉及治疗患有癌症的患者的方法，包括给予患者诱导不同癌症亚型生长的调节成分。与癌症的不同亚型相比较，在使患者受折磨的癌症中，调节成分可以不存在或可以低水平表达。调节成分可以是微小RNA。调节成分可以是微小RNA-145。又在另一个方面，本发明涉及用于治疗具有癌症或处于发展癌症风险中的患者的方法，包括给予患者来自于至少两种不同和有区别的(可区分的，distinct)癌症亚型标志的调节成分。调节成分可以选自微小RNA、核酸、蛋白质或模拟调节成分活性的小分子。在另一个方面，本发明涉及治疗具有癌症或处于发展癌症风险中的患者的方法，包括给予患者至少两种分开的(separate)微小RNA,其中一个诱导分化,另一个诱导多能性。又在另一个方面，本发明涉及治疗具有癌症或处于发展癌症风险中的患者的方法，包括给予患者至少两种不同的微小RNA或微小RNA簇，其中每一个微小RNA或微小RNA族王要在有区别的癌症亚型中表达`。有区别的癌症亚型可以是MUC1*阳性和MUC1*阴性。在另一个方面，本发明涉及治疗具有癌症的患者的方法，包括给予患者微小RNA或微小RNA簇，其具有不同于患者的癌症亚型的癌症亚型的特性(特性，characteristics)。仍在另一个方面，本发明涉及通过给予需要其的对象至少两种癌症亚型标志的调节成分的混合物，给个体接种疫苗以防止癌症的方法，其中每一个独特地识别癌症的不同亚型。调节成分可以是微小RNA。在另一个方面，本发明涉及不需要Rho激酶抑制剂而增殖多能干细胞的方法，包括用活化MUC1*生长因子受体路径的试剂培养细胞。试剂可以是匪23，并且可以主要以二聚物的形式存在。该方法可以进一步包括在人类成纤维细胞饲养层上生长多能干细胞。可选地，该方法可以进一步包括在没有小鼠胚胎成纤维细胞饲养细胞组分的层上生长多能干细胞。可选地，该方法可以包括在MUC1*抗体表面上培养细胞，其中可选地表面可以是Vita 细胞培养平板。在另一个方面，本发明涉及用于增殖或维持原始态干细胞的方法，包括当没有小鼠饲养细胞或其提取物时，刺激MUC1*路径。可选地，该方法可以进一步包括在MUC1*抗体表面上培养细胞，其中可选地表面可以是Vita 细胞培养平板。又在另一个方面，本发明涉及用于从混合的细胞群体中分离原始态干细胞的方法，包括使混合的细胞群体接触包被有MUC1*抗体的表面，其中原始态干细胞结合到MUC1*抗体表面上，其中可选地MUC1*抗体表面可以在Vita 平板上形成。在另一个方面，本发明涉及将癌症的类型分类的方法，包括确定哪一个癌细胞类型能够在另一个癌细胞类型的条件培养基(conditioned media)上生长，其中在另一个癌细胞类型的条件培养基上生长的能力意味着这两种癌症属于相同的亚型。仍在另一个方面，本发明涉及识别控制癌症亚型的生长和分化的调节成分的方法，包括首先根据上述方法将癌症的类型分类，然后执行分子分析，包括微小RNA分析和总转录组(transcriptome)分析从而识别调节成分。在另一个方面，本发明涉及确定特定(具体)调节成分治疗用于患者癌症亚型的适合性的方法，包括利用根据上述方法的方法，使用获得的调节成分信息，从而识别对癌症亚型有效的治疗。从本发明下面的描述、所附的参考附图和所附的权利要求中，将会更充分地理解本发明的这些和其他目的。
从下 面给出的详细描述中，将会更加充分地理解本发明，仅以说明的方式给出的附图因此不是用于限制本发明，其中图1显示通过撤销(withdrawal) bFGF和条件培养基(CM)或NM23-S120G，或通过添加作为MUC1*受体的细胞外结构域的PSMGFR肽，当有意地中断丽23-MUC1*相互作用时，在细胞分化48、98或144小时后在H9人类干细胞中表达的微小RNA-145的量的图表。图2显示FPLC痕迹(trace)的覆层(overlay),其显示NM23-WT (野生型)、匪23-S120G的两个不同批次以及变性然后再折叠的匪23-S120G的一个批次的多聚化状态，其导致80% 二聚物形式。图3A显示非变性的天然凝胶的图，其显示匪23-WT或匪23-S120G的不同批次的多聚化状态。图3B显示非还原的凝胶的图，其显示再折叠然后凝胶纯化的匪23-S120G大体上100%是二聚物。图4显示表面等离子体共振实验的传感图(sensogram),其中匪23-WT (A)或匪23-S120G (B)流经NTA-SAM包被的芯片，其上固定了组氨酸标记的PSMGFR肽(MUC1*细胞外结构域)从而饱和。结果显示作为六聚物存在的匪23-WT不结合MUC1*肽，但是NM23-S120G 二聚物形式结合MUC1*肽。图5显示表面等离子体共振实验的传感图，其中匪23-S120G的不同制剂流经3. 8%(A)或5. 7%(B)的NTA-SAM包被的芯片，其上固定了组氨酸标记的PSMGFR肽(MUC1*细胞外结构域)从而饱和。在部分C中，非还原的凝胶显示存在于每一个制剂中的二聚物的量。结果显示，结合到MUC1*肽上的量是样本中存在的二聚物的量的直接作用(函数，function)。图6显示平板接种后第三天H9人类干细胞的IOX照片，其中它们在特征为不同多聚化状态(A-C、D、F)的NM23-S120G、NM23-WT (E)的不同制剂中培养，或在NM23-S120G制剂中培养，其是100% 二聚物(A)，但是受到PSMGFR (MUC1*细胞外结构域)肽(B)或抗MUCl*Fab (C)的竞争性抑制。结果显示存在于匪23-WT中的匪23的六聚物形式诱导分化，并且中断匪23-MUC1*受体相互作用，可以诱导分化。图7显示已经添加了 NM23-WT或由50% 二聚物组成的NM23-S120G突变体的T47D人类乳癌细胞的共聚焦显微图像。结果显示，匪23-WT的添加(顶行)没有导致与MUC1*受体共同定位的增加，没有增加转移到细胞核中。由于(recall)存在内源匪23，所以观察到剂量依赖的效应。相反地，匪23-S120G的添加(底行)与MUC1*受体共同定位，并且30分钟后转移(移位，translocate)到细胞核中，并且该效应是剂量依赖的。图8显示已经添加了由50% 二聚物组成的匪23-S120G突变体的T47D人类乳癌细胞的共聚焦显微图像。图像是引入NM-S120G60分钟后拍摄的，并且显示匪23和MUC1*受体共同定位，并且该效应是剂量依赖的。图9显示以匪23_S120G(50% 二聚物)或bFGF培养，并且在人类饲养细胞或小鼠饲养细胞上生长的人类H9胚胎干细胞，然后染色以确定原始态细胞的标记Klf4和始发态的细胞的标记FoxA2存在的共聚焦显微图像。结果显示，在人类饲养细胞(feeder)上用匪23培养的人类干细胞对于Klf4染色为阳性，对于FoxA2染色为阴性。图10显示以匪23-S120G (50% 二聚物)培养，并且在人类成纤维细胞饲养细胞(HS27)上生长的人类H9胚胎干细胞的共聚焦纤维图像。DAPI和明视野图像显示在图像视野内的几乎所有细胞对原始态标记Klf4是阳性的，对始发态的标记FoxA2是阴性的。图1lA到IlI显示，已经用Rho激酶抑制剂(ROCi Y-27632)处理(底行；G、H、I)或没有用ROCi处理的人类H9干细胞的显微图像(A到E、G到I ;4X，F;10X)。在左边(A、D、G)和右边(C、F、I)加上抗MUC1*抗体平板的Vita细胞培养平板经离心从而使细胞到表面上。结果显示在人类饲养细胞中用匪23培养的人类胚胎干细胞没有受益于ROCi，并且结合到平板上，然后只通过迅速地离心从而将细胞带到平板表面，与ROCi处理同等地生长。相反地，在小鼠饲养细胞中以FGF培养的胚胎干细胞没有显著地结合到平板上，或当没有ROCi时生长。图12显示响应当存在来自于另一个癌细胞类型的条件培养基(CM)时生长的癌细胞生长的图。图显示癌细胞类型的一个指标为其是MUC1*阳性或阴性，当存在来自MUC1*阴性癌细胞的条件培养基时，MUC1*阳性癌细胞不能生长。U87，MUC1*阳性神经胶质瘤能够生长在来自MUC1*阳性乳癌细胞(T47D)的条件培养基中，但是不能生长在来自MUC1*阴性前列腺癌细胞(LnCAP)的条件培养`基中。图13显示响应当存在来自于用MUC1*受体转染的另一个癌细胞类型的条件培养基时生长的癌细胞生长的图。如果用编码MUC1*的基因(FLR)转染其，则U87，MUCI*阳性神经胶质瘤能够生长在来自MUC1*阴性结肠癌细胞HCT-116的条件培养基中；但是如果用空载体转染其，则不能生长。图14显示当存在来自也是MUC1*阳性的其他癌细胞类型的条件培养基时，响应生长的MUC1*阳性的T47D人类乳癌细胞的图(A)。部分B显示当存在来自未分化的干细胞或新分化的干细胞时，响应生长的T47D癌细胞的生长。图15显示图表，其显示当生长在MUC1*阳性癌细胞的条件培养基中时人类胚胎干细胞的生长，其促进生长，或生长在加上/减去用MUC1*转染的MUC1*阴性癌细胞的条件培养基中时，其都使干细胞停滞(stasis)。在来自MUC1*阳性癌细胞(T47D和HCT-MUCl*)的条件培养基中，胚胎干细胞能够增殖，但是不能在来自MUC1*阴性细胞(HCT)的条件培养基中增殖。图16显示如在图15的表中所描述的生长的人类干细胞的图，显示在MUC1*阴性癌细胞的条件培养基中的生长，或用MUC1*转染的这些使干细胞停滞。图17显示以NM23-S120 (50% 二聚物)生长并且接种在Vita平板上面的人类iPS细胞的照片，Vita平板已经包被有如实例7所描述的12. 5ug/ml C3mab抗MUC1*抗体。没有添加Rho激酶抑制剂，没有离心平板从而促进细胞粘附，可是iPS细胞粘附、增殖和生长多个世代。17A显示IOX放大。17B显示20X放大。
具体实施例方式在本申请中，“一种”和“一个”用来指单个和多个物体(对象)。定义MUCl阳性癌细胞，也称为MUC1*阳性癌细胞，是癌细胞，其特征为MUCl跨膜蛋白的异常表达，在健康状态(以及在MUCl阴性癌细胞中)MUC1跨膜蛋白只存在于上皮细胞中，在那里其表达是成簇的，并且限制在组织的顶缘。在MUCl阳性癌细胞，也称为如这里使用的MUCI*阳性癌细胞中发现的异常MUCl表达意味着，蛋白质在整个组织表面上的过量表达和均匀分布，而不是在组织的顶缘成簇的表达模式，其中蛋白质中的许多是截短的形式，其缺乏串联重复单元。如这里所使用，“活化的”MUC1*是指配体结合到MUC1*上，导致生长的促进和/或细胞存活的增加。
如这里所使用，“条件培养基”是指细胞已经生长一段时间足以从细胞中分泌一定量的物质到培养基中的培养基。如这里所使用，“新分化的”干细胞是指从多能性转变为更分化状态的细胞。如这里所使用，“MUC1*”是指膜结合的MUCl剪切产物，其是在培养的癌细胞和癌组织中蛋白质的主要形式。MUC1*包括细胞质尾部和跨膜结构域以及大约45个氨基酸的细胞外结构域(ECD)。剪切的准确位点仍然是有点不确定的。MUCI*的该细胞外结构域的主要序列可以由氨基酸序GTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA (SEQ ID NO:1)(也称为PSMGFR肽)所组成，但不限制于该氨基酸序列。术语“MUC1生长因子受体的主要序列”(PSMGFR)是在一些情况下其限定大多数或全部MGFR的肽序列以及如下面所定义的肽序列的功能变体和片段。PSMGFR限定为SEQ IDNO:1，以及其功能变体和片段，其结合匪23或SEQ ID NO:1的抗体，并且可以具有整数值直到 20 的氨基酸替代(SP，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 或 20)和 /或在其N末端和/或C末端任何整数值直到20的氨基酸添加或缺失。如这里所使用，除非明确地说明，否则缩写PSMGFR不应该与氨基酸序列混淆。如这里所使用，“MUC1阳性细胞”是指异常表达MUCl的细胞。如这里所使用，“MUC1阴性细胞”是指不能异常表达MUCl的细胞，包括正常表达MUCl的细胞。如这里所使用，“MUC1*细胞”或“MUC1*阳性细胞”是指表达截短形式的MUC1、MUCI*的细胞。如这里所使用，“MUC1*阴性细胞”是指不表达MUC1*的细胞，其也包括MUCl阳性或MUCl阴性细胞，只要细胞不表达MUC1*。在先前的专利申请中，跨膜MUCl剪切产物称为MGFR和MUCltMUCl*和MGFR(MUC1生长因子受体)包括MUCl细胞质结构域、跨膜结构域和大体上由PSMGFR组成的截短的细胞外结构域。2004年8月24日提交的美国申请
发明者辛西娅·巴姆达德 申请人:米纳瓦生物技术公司