专利名称：一株产丙酸詹氏丙酸杆菌及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种詹氏丙酸杆菌，特别是ー种产丙酸的詹氏丙酸杆菌。
背景技术：
丙酸及其衍生物在エ业上的应用领域十分广泛，主要应用于食品防腐、饲料储藏、医药中间体合成、农业除莠剂合成、有机合成中间体等方面。2006年世界丙酸总生产能力在35万吨/年左右，2008年达到50万吨/年。美国是世界上最大的丙酸生产及消费国。目前我国丙酸实际年产量只有200吨左右，远远不能满足实际的市场需求，毎年仍需大量进ロ来弥补国内的空缺。用于丙酸发酵的菌种主要是丙酸杆菌属(Propionibacteria),该属有多个种和亚 种，均为厌氧菌，丙酸杆菌是ー类G+、不产芽抱、不运动、接触酶阳性的厌氧菌。菌落呈现白色、黄色或者褐红色。一般情况下，最适PH为6. 5^7. 5，最适生长的温度为28°C 37°C。丙酸的生产方法有化学合成法和微生物发酵法，化学合成法是以石油等化工产品为原料，经过加温、加压利用催化剂合成丙酸的方法，该方法是エ业级规模上丙酸的主要生产方法。微生物发酵法是丙酸菌在常温、常压下利用一般营养源通过自身代谢产生丙酸。由于微生物发酵生产丙酸能降低对石油等不可再生能源的依赖性，减轻对环境造成的压力，因此，在当前全世界面临环境污染、能源短缺的严峻情况下，微生物发酵法生产丙酸为丙酸合成提供了新的思路，同时得到了越来越多研究者的关注。但是微生物法生产丙酸仍然存在成本高，丙酸产量低等缺点。因此，筛选丙酸的高产菌株是非常有必要的。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种丙酸高产菌株詹氏丙酸杆菌(Propionibacterium jensenii) JN925,能够高效的生产和积累丙酸。所述菌株于2012年5月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为=CCTCCNo M 2012153，保藏地址为中国武汉武汉大学。所述詹氏丙酸杆菌的筛选方法为其技术方案是从奶酪厂下水道淤泥中筛选出厌氧菌，根据其能耐受丙酸的性能，通过在培养基中添加丙酸来富集产丙酸菌。其具体步骤依次是取样，添加丙酸液体富集培养，初筛，复筛，最后得到I株在厌氧条件下，能够实现丙酸高产量生产的菌株。(I)菌株来源奶酪厂下水道淤泥(2)培养基富集培养基(g/L):酵母粉10 ;蛋白胨 5 ；K2HP04 2. 5 ；KH2P04 I. 5 ;丙酸 I. 5。初筛培养基(g/L):琼脂20 ;酵母粉10 ;蛋白胨5 ；K2HP04 2. 5 ；KH2P04 I. 5 ;丙酸
2.50
复筛培养基(g/L):酵母粉10 ;蛋白胨5 ；K2HP04 2. 5 ；KH2P04 I. 5 ;丙酸5。种子培养基(g/L):酵母粉10 ;蛋白胨 5 ；K2HP04 2. 5 ；KH2P04 I. 5。发酵培养基(g/L):酵母粉10 ;蛋白胨 5 ；K2HP04 2. 5 ；KH2P04 I. 5 ；CaC03 30 ;甘油 30 ；CoC12 0. 01。(3)富集培养的具体方法是将奶酪下水道淤泥稀释接种到富集培养基中，每隔ー段时间转接一次。(4)初筛的具体方法是将富集好的菌液进行稀释，涂布初筛培养基，30° C厌氧培养4-5天。(5)复筛的具体方法是将初筛得到的菌株接入复筛培养基，30° C厌氧培养4-5 天。选择菌浓最高的3-4株菌接入发酵培养基，30° C厌氧培养150小时，測定丙酸浓度。I.菌体干重的测定用722型可见光分光光度计，于600nm处比色测OD值。2.丙酸产量的测定用Agilent高效液相仪测定发酵上清液中丙酸浓度。
具体实施例方式实施例I :产丙酸的詹氏丙酸杆菌筛选方法取采取的一定量的淤泥，放入装有IOOmL无菌水及玻璃珠的250mL三角瓶中稀释不同浓度梯度，将不同浓度梯度稀释好的样品分别接入富集培养基中30° C静置厌氧培养4-5天，分别重新转接新鲜富集培养基30° C静置厌氧培养4-5天。将富集好的培养液进行梯度稀释，分别涂布初筛培养基30° C厌氧培养4-5天。将菌落分别接入复筛培养基中，30° C静置厌氧培养4-5天。分别测定其菌体浓度，选择菌浓最高的3-4株菌接入发酵培养基，进行产量检测。将产量最高的一株菌进行菌种鉴定并做甘油管保藏。实施例2 :詹氏丙酸杆菌丙酸产量的检测以1%接种量接种于种子培养基，待生长至对数生长期吋，以10%接种量，接种于发酵培养基，30° C厌氧培养150小时，取发酵液8000rpm，4° C离心2min。取上清液用
3.68mmol/L 硫酸定容至 10mT,n检测条件Agilent高效液相仪，Agilent ZORBAX SB-Aq液相柱，柱温35° C，检测波长210nm，进样量10 u L，流动相为19. 7g磷酸氢ニ钠与IOmLこ腈溶于IOOOmL超纯水并且用磷酸将pH调为2. O。经过高效液相色谱检测，丙酸产量最高ー株菌命名为Propionibacteriumjensenii JN925，其厌氧瓶发酵150h丙酸产量为20. 96g/L。
权利要求
1.一株产丙酸詹氏丙酸杆菌，2012年5月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No M 2012153。
2.根据权利要求I所述的詹氏丙酸杆菌，其特征在于所述詹氏丙酸杆菌能够高效生产丙酸。
3.权利要求I所述的詹氏丙酸杆菌应用发酵生产丙酸。
全文摘要
本发明公开了一株产丙酸詹氏丙酸杆菌及其应用，于2012年5月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No.M 2012153。所述詹氏丙酸杆菌是从奶酪厂下水道的淤泥中筛选所得，应用所述詹氏丙酸杆菌发酵生产丙酸的产量可达20.96g/L。
文档编号C12N1/20GK102766589SQ20121016850
公开日2012年11月7日 申请日期2012年5月25日 优先权日2012年5月25日
发明者刘龙, 堵国成, 诸葛鑫, 陈坚 申请人:江南大学