专利名称：转基因油菜标准样品、其建立方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明属于转基因食品检测技术领域，具体涉及转基因油菜RT73的标准样品制备、其建立方法及其在检测转基因油菜RT73中的应用。
背景技术：
近年来，转基因作物培育技术取得突破进展，陆续推出了ー批新品种，在改善农作物品质、提高产量等方面发挥了巨大作用。然而，人们对转基因食品的安全性问题存在着很多的争论。转基因作物的生态风险、可能带来的环境问题、作为食品对人体健康影响的问题、产品加贴标签问题、运输问题、国际贸易问题、知识产权问题等已引起世界广泛性的关注。转基因产品的安全性问题已由学术观点分岐，发展到知识产权、环境问题、经济问题甚至政治问题。欧盟和ー些国家相继出台了转基因产品管理法规，我国于2002年3月开始实施《农业转基因生物安全管理条例》及其三个配套管理办法。2001年，欧盟要求对转基因食品进行标识管理，并提出对非转基因食品只要不是有意污染，允许含有1%的转基因产品(阈值)，而不用标识。日本、韩国、澳大利亚等不同国家限量阈值不同，从1%_5%不等。转基因食品的检测是这些g在保护生物和生态安全、维护消费者权益、促进贸易和经济健康发展的法规和政策的基本依据，其标准化将为制订、实施和改进这些法规和政策提供有力保证。国内外转基因食品的检测研究刚刚起步，许多问题都有待解決，标准样品则是该领域尚未解決的重要问题。开展转基因成分检验标准样品的研制在保证测试结果的可比性和溯源性、保障食品安全、解决贸易争端，促进经济发展等方面均具有重要的意义。更为严峻的问题是目前国外仅有转基因大豆粉、转基因玉米粉M0N810等少数几个品种的标准物质，价格非常昂贵，手续繁多，周转时间长，不能适时地满足检验检疫工作的需要；日本正在加紧研制转基因产品检测的分子DNA參考标准物质，用于转基因产品的定量检测；2005年，我们率先在国内研制成功了转基因大豆粉国家ニ级标准物质，填补了我国在转基因成分检测标准样品方面的空白，但转基因油菜籽等标准样品仍是空白。
发明内容
鉴于国内转基因标准样品紧缺的状况，本项转基因油菜RT73标准样品的制备完成，对全面深入的研究解决转基因成分检测标准样品的制备技术和稳定性保证技术，积极开展我国转基因产品检测标准样品的研制，添补该测量领域的空白，具有很重要的现实意 义。转基因油菜籽RT73品系简介抗草甘膦转基因油菜(Roundup Ready )RT73品系含有的外源基因是1)耐除草剂基因CP4 EPSPS，受FMV35S+CTP2启动子和E9 3’终止子调控；2)标记筛选基因G0Xv247，启动子和终止子分别为FMV35S+CTP1和E9 3’。质粒图谱为
权利要求
1.转基因油菜RT73标准样品，其特征在于，通过下述方法制备 a取油菜籽原料放在研钵中，于通风橱内加入乙醚并用研棒搅拌、研磨，待乙醚蒸发后，将其过100目标准筛，收集粉末备用； b向步骤a所获得的粉末中加入等质量的水，搅拌均匀后，静置lh，弃上清，将沉淀物制备成冻干粉； c以转基因油菜RT73为原料，按照步骤a和b所述方法制备冻干粉；d以非转基因油菜籽为原料，按照步骤a和b所述方法制备冻干粉；e将步骤c制备的冻干粉与步骤d制备的冻干粉按2. 5 :100的重量比例混合后，向混合粉末中加入等质量的水，搅拌均匀后，静置lh，弃上清，将沉淀物制备成冻干粉并分装，(T4°C贮存； 上述步骤ITe中任一步骤所述的冻干粉，其制备方法为 ①样品预冻先把样品在_80°C冷冻2h； ②冷冻过程关好冰冻干燥机的干燥室门，开始干燥室制冷；干燥室温度降至_35°C时，开始冷却阱制冷；冷却阱制冷温度降至_40°C时，将步骤①处理的样品迅速放入干燥室内，关好干燥室门；启动真空泵开始抽真空；当真空度降至O. 5Torr时，结束冷冻过程； ③样品干燥干燥室的温度设置为15°C，当真空度降至O.ITorr时，样品已干燥好； ④关闭真空泵，使干燥室与外界大气相通，待内外气压平衡后，打开干燥室门，取出样品，迅速旋紧瓶盖。
2.—种转基因油菜RT73的Real-Time PCR检测试剂盒，其特征在于，包括转基因油菜检测基因和阳性标准对照品 阳性标准对照品是权利要求I所述的转基因油菜RT73标准样品，最小取样量为IOOmg ； 转基因油菜检测基因，包括 RT73基因的检测引物和探针序列 正向引物SEQIDN0:1 反向引物SEQ ID NO :2 探针SEQ ID NO 3 FatA基因的检测引物和探针序列 正向引物SEQ ID NO :4 反向引物SEQ ID NO :5 探针SEQ ID NO :6。
全文摘要
本发明公开一种转基因油菜RT73的标准样品制备、其建立方法及其在检测转基因油菜RT73中的应用，分别以转基因油菜RT73或非转基因油菜为原料，将原料研磨、过筛、加水，搅拌、静置、将沉淀物制备成冻干粉；再将二者以科学的比例混合，并重复“加水，搅拌、静置、将沉淀物制备成冻干粉”的过程，分装,0℃~4℃贮存；通过上述方法获得转基因油菜RT73的标准样品，也可以应用于转基因油菜RT73的Real-Time PCR检测试剂盒。这对全面深入的研究解决转基因成分检测标准样品的制备技术和稳定性保证技术，积极开展我国转基因产品检测标准样品的研制，添补该测量领域的空白，具有很重要的现实意义。
文档编号C12Q1/68GK102703590SQ20121017336
公开日2012年10月3日 申请日期2012年5月30日 优先权日2012年5月30日
发明者于兵, 徐君怡, 曹冬梅, 曹际娟 申请人:于兵, 徐君怡, 曹冬梅, 曹际娟