专利名称：一种抑制海产品中副溶血性弧菌的方法
技术领域：
本发明涉及海产品，特别是生长在近海岸的海水、海河交界处的鱼类、虾类、贝类等保鲜技术领域。
背景技术：
副溶血性弧菌(KiArio parahaemolyticus,以下简称吻)属于弧菌科弧菌属，是一种革兰氏阴性嗜盐细菌，主要分布在近海岸的海水、海河交界处的鱼类、虾类、贝类等海产品中。江苏地区2008年和2009年食源性致病菌监测研究数据显示Vp检出率分别为15. 9%和7. 8%，居于首位，生食水产品导致食源性疾病的风险较高。因此，控制在海产品中吻的带菌量，建立科学的减菌和杀菌方法至关重要。目前对于VP的控制手段主要有流水净化、温度处理、高压处理、辐射等，但是这些方法都不能经济安全有效地抑制水产品中吻。有研究发现有机酸食品添加剂能有效抑制吻，但是在抑制过程中食品的风味发生了改变。2000年，Andrews等人提出低温巴氏杀菌(48-500C，5min)可使贝类中Vp (I. 2 X 105MPN/g)降低到不能检测水平(<3MPN/g)，但是这种处理可能会导致贝类风味发生变化。
发明内容
本发明目的在于提出一种能有效控制海产品中副溶血性弧菌带菌量，又能最大限度地保证海产品鲜度的抑制海产品中副溶血性弧菌的方法。本发明将新鲜海产品浸泡于pH值为4. 5 5. 5的柠檬酸溶液中，于50°C 60°C环境温度下处理5s 25s。本发明采用有机酸和温度处理对于Vp的联合作用，在该条件下，副溶血性弧菌死亡率为97. 36%，在三文鱼上验证为97. 07%,并该条件处理前后鱼肌动球蛋白的Ca2+-ATPase活性没有显著差异，保持了海产品内容物及原有新鲜海产品的风味，对于生产、销售、运输过程中Vp的控制具有重要作用。本发明的优选条件是所述柠檬酸溶液的pH值为4. 96、环境温度为55. 5°C、处理时间为25s。副溶血性弧菌死亡率为97. 36%，还可从某种程度上保证鱼蛋白的活性。
图I为水浴温度与Vp死亡率的线性关系图。图2为柠檬酸溶液的pH值与Vp死亡率的线性关系图。图3为水浴处理时间与Vp死亡率的线性关系图。图4为吻的死亡率与柠檬酸溶液的pH值及水浴时间T两个因素的函数关系图。图5为图4的等高线图。
图6为在三文鱼模型上，不同处理条件与Vp死亡率的比较表图。图7为不同处理条件与Ca2+-ATPase活性的比较表图。
具体实施例方式I、材料与 方法
I. I菌株与试剂
Vp标准菌株ATCC33847和ATCC17802购自中国微生物菌种资源库。LBS液体培养基、高离子强度盐溶液(O. IM KCl+ O. OlM NaCO3+ O. 04M NaHCO3)、50mM CaCl2,4M KCl 均由本实验室自制，其它试剂均为分析纯。I. 2 方法
I.2. I菌悬液制备
挑取ATCC33847、ATCC17802的TCBS典型单菌落至LBS培养液，37°C，180r/min,过夜振荡培养。分别吸取10μ1过夜培养物至新鲜LBS培养液，370C，180r/min,振荡培养4 5小时，测六种菌株的OD6tltl值，并调至O. 8左右。均匀混合ATCC33847、ATCC17802这两种菌株，制成混合菌悬液备用。1.2.2^死亡率测定
用无菌微量移液器分别吸取处理前后菌液匀液ΙΟΟμΙ，沿管壁缓缓注入900μ1 PBS的无菌ependof管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。选取2个 3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种3个无菌TCBS平皿，每皿ΙΟΟμΙ。选取菌落数在20 CFU 300 CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑Vp菌落，典型菌落为墨绿色。Vp死亡率计算公式如下
处理前菌落数-处理后菌落
death b = - ,100%
处理前菌落数
I.2. 3单因素试验
以Vp死亡率为指标，分别对柠檬酸溶液的pH值、处理温度、处理时间作单因素试验。吸取ΙΟΟμΙ 混合菌液于 I. 5ml 中，12000rpm 离心 8 min,重悬，在 45。。、50。。、55。。、60°C、65°C水浴中处理,分别于5s、25s、45s、65s、85s取样分析细菌的死亡率。同样分别吸取ΙΟΟμΙ混合菌液，离心沉淀，用PBS重悬，稀释，涂板，370C，培养24h，计数得到处理前菌落数，其余分别用ρΗ2· 5、ρΗ3· 5、ρΗ4、ρΗ4· 5、ρΗ5的柠檬酸溶液重悬，在55°C水浴中处理15s，稀释，涂布，37 °C，培养24h，计数，计算出Vp死亡率。I. 2. 4响应面法优化温度、pH和时间
在单因素试验的基础上，以温度、pH、时间3个因素为自变量,Vp死亡率为响应值,采用响应面分析法在三因素三水平上对处理条件进行优化，以获得最大吻死亡率。试验因素与水平设计如表I所示。表I响应面分析因素与水平
权利要求
1.一种抑制海产品中副溶血性弧菌的方法，其特征在于将新鲜海产品浸泡于PH值为 5 5. 5的朽1檬酸溶液中，于50°C 60°C环境温度下处理5s 25s。
2.根据权利要求I所述抑制海产品中副溶血性弧菌的方法，其特征在于所述柠檬酸溶液的PH值为4. 96、环境温度为55. 5°C、处理时间为25s。
全文摘要
一种抑制海产品中副溶血性弧菌的方法，涉及海产品的保鲜技术领域。将新鲜海产品浸泡于pH值为4.5～5.5的柠檬酸溶液中，于50℃～60℃环境温度下处理5s～25s。本发明采用有机酸和温度处理对于Vp的联合作用，在该条件下，副溶血性弧菌死亡率为97.36%，在三文鱼上验证为97.07％，并该条件处理前后鱼肌动球蛋白的Ca2+-ATPase活性没有显著差异，保持了海产品内容物及原有新鲜海产品的风味。
文档编号A23L3/3508GK102742634SQ20121024988
公开日2012年10月24日 申请日期2012年7月19日 优先权日2012年7月19日
发明者丁珊珊, 孙林, 李宝利, 杨振泉, 潘志明, 焦新安 申请人:扬州大学