专利名称：焦磷酸测序法检测tert基因多态性试剂盒及方法
技术领域：
本发明属于分子生物学领域，具体的是涉及焦磷酸测序法检测TERT基因多态性的试剂盒及方法。
背景技术：
肺癌是第一号癌症杀手。我国每年死于肺癌的人数超过80万。肺癌的病因至今尚未完全明确，可能与遗传和环境因素有关。对大样本人群的研究发现，TERT基因的变异(rs2736100)与肺癌遗传易感性密切相关，未突变个体患肺癌的危险性显著高于突变个体(JNatl Cancer Inst. 2010,102(13):959-71; Carcinogenesis. 2009，30(6):987 - 990)。TERT有3种基因型，分别为GG、GT和TT，其中GG为野生型纯合子，GT为杂合子，TT为突变型纯合子。TERT野生型纯合子比突变后的基因型患肺癌的危险性显著增高。杂合子的个体罹患肺癌的风险比野生型纯合子的个体低约86%，突变型纯合子的个体罹患肺癌的风险比野生型纯合子的个体低约60%。
权利要求
1.一种焦磷酸测序法检测7Β Τ基因多态性试剂盒，其特征在于，包括如下引物 (1)扩增引物上游引物5 ’ -TCTATCTCAGGCATCTTGACACC-3，；下游引物5’ -GGGGAACAAAGGAGGAAAAG-3’ ；其中，下游引物的5’进行生物素标记； (2)测序引物5’-GCGGGGGCAAAGCTA-3’。
2.一种应用权利要求I所述的试剂盒检测7Β Τ基因多态性的方法，包括如下步骤 (1)DNA 提取； (2)聚合酶链反应 配制 50 μ I PCR 扩增体系，包含10 X PCR buffer 5. 0μ I, dNTP 2. 0μ I, TERT ±Μ引物Ι.ΟμΙ，ΤΒ Τ下游引物Ι.Ομ 1，rTaqO. 5μ 1，水39. 5μ 1，模板Ι.Ομ I ;循环程序为95°C 5min 预变性；依次在 95°C 30S,52°C 30S,72°C 30S，进行 40 个循环；72°C 保持 5min，最终保持在4°C，得扩增产物； (3)焦磷酸测序单链样本纯化； (4)焦磷酸测序及结果分析。
全文摘要
本发明公开了一种焦磷酸测序法检测TERT基因多态性试剂盒及方法。所述试剂盒对TERT基因多态性进行检查，具体是指rs2736100(G>T)单核苷酸多态性。试剂盒包含如SEQ ID NO.2-4所示的引物。本发明的试剂盒，可以实现准确、快捷、高通量对TERT基因多态性进行检测，从而达到对肺癌易感风险的有效预测、预防。
文档编号C12Q1/68GK102899403SQ20121032909
公开日2013年1月30日 申请日期2012年9月7日 优先权日2012年9月7日
发明者曹杉, 周宏灏 申请人:中南大学