专利名称：一种罗伊氏乳杆菌及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种乳杆菌属的新菌株及其应用，更准确地说，本发明描述了罗伊氏乳杆菌{Lactobacillus reuteri)的一个新菌株LE16,及其调节肠菌群功能和对肠道致病菌、食品腐败菌的抑菌作用。本发明还涉及罗伊氏乳杆菌LE16与常规载体组合，可用于预防和/或治疗肠道菌群失调。
背景技术：
人的胃肠道栖息着各种细菌，根据对人体的影响可分为有益菌、有害菌和中性菌。人体内有益菌占优势，就会表现出健康状态，其中双歧杆菌和乳杆菌是最具代表性的有益菌。罗伊氏乳杆菌是乳杆菌中重要的一种，是人体肠道固有的细菌。另外，该菌种还存在于母乳中，从226名居住在 瑞典、丹麦、以色列、南非、南韩、日本和秘鲁等不同国家的都市或乡区的母乳中分离出可计数的罗伊氏乳杆菌占12%，属优势菌。罗伊氏乳杆菌可调节肠道菌群平衡，有效降低轮状病毒引起的腹泻；Sh0mik0Va等于1996年对66名(年龄6 36个月)由轮状病毒引起腹泻的小孩进行的研究提出，罗伊氏乳杆菌的治疗效果明显，且有剂量关系，高剂量组效果更佳，每日摄取罗伊氏乳杆菌或产品是比较有效治疗轮状病毒所引起的腹泻的方法。罗伊氏乳杆菌还具有抗过敏作用，研究提出，对过敏高危险群孕妇及其新生儿口服罗伊氏乳杆菌各一个月，可将婴儿湿疹比例从46%降低至23%，且没有观察到任何的不良反应。研究追踪更发现，这群小孩在4岁时气喘及过敏性鼻炎的发生率也明显下降。
发明内容
本发明的目的是提供一种罗伊氏乳杆菌(罗伊氏乳杆菌LE16)及其应用。实现上述发明目的的解决方案是:
一种罗伊氏乳杆菌，所述罗伊氏乳杆菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC N0.6405。上述罗伊氏乳杆菌LE16直接自健康婴儿粪便中分离获得，已于2012年7月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称06110:，地址为:北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCC N0.6405。所述的罗伊氏乳杆菌在调节肠道菌群中的应用。所述的罗伊氏乳杆菌在抑制肠道致病菌或食品腐败微生物中的应用。所述肠道致病菌是指大肠杆菌、李斯特菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏痢疾杆菌或产气荚膜梭菌；所述食品腐败微生物是指枯草芽孢杆菌或蜡样芽孢杆菌。罗伊氏乳杆菌与常规载体组合在预防和/或治疗肠道菌群失调中的应用。所述常规载体是低聚糖、维生素、矿物质、食品辅料的一种或多种。本发明的罗伊氏乳杆菌LE16的形态为杆状，革兰氏染色阳性，不形成芽孢，产生乳酸，兼性厌氧。
图1是本发明的罗伊氏乳杆菌在显微镜(X 1000倍)下的菌体形态图。
具体实施例方式本发明的罗伊氏乳杆菌LE16利用L-阿拉伯糖、核糖、半乳糖、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蜜二糖、蔗糖、棉子糖，不利用甘油、赤癣醇、D-阿拉伯糖、D-木糖、L-木糖、阿东醇、β -甲基-D-木糖甙、果糖、甘露糖、山梨糖、鼠李糖、卫矛醇、肌醇、甘露醇、山梨醇、α -甲基-D-甘露糖甙、α -甲基-D-葡萄糖甙、N-乙酰-葡萄糖胺、苦杏仁甙、熊果甙、七叶灵、水杨甙、纤维二糖、海藻糖、菊糖、松叁糖、淀粉、肝糖、木糖醇、龙胆二糖、D-松二糖、D-来苏糖、D-塔格糖、D-岩糖、L-岩糖、D-阿糖醇、L-阿糖醇、葡萄糖酸钠、2-酮基-葡萄糖酸钠、5-酮基-葡萄糖酸钠。本发明的罗伊氏乳杆菌LE16发酵过程是在MRS液体培养基中37°C培养24h。实施例1 菌株镜检
无菌条件下用接种环挑罗伊氏乳杆菌LE16，涂于载玻片上，制片并革兰氏染色，在显微镜下观察菌体形态。实施例2 MRS平板纯化分离
无菌条件下用接种环挑罗伊氏乳杆`菌LE16，在MRS平板上划线，平板置于培养箱中37°C培养48h，挑选单菌落进行镜检，达到菌株纯种分离。实施例3 菌株发酵
用接种环将罗伊氏乳杆菌LE16从斜面上挑取二环至装有15ml MRS液体培养基中，37°C培养24h，再以1%接种量接入15ml MRS液体培养基中，37°C培养24h，即得罗伊氏乳杆菌LE16发酵液。实施例4 罗伊氏乳杆菌LE16耐酸、耐胆盐性能
LE16菌株于MRS液体培养基中37°C培养24小时后，离心收集菌体，取Iml细胞重悬液至pH3.0的9.0ml无菌PBS中，37°C处理O、1、2、3小时后进行活菌计数分析(表I)。表I结果表明，pH3.0条件下处理3小时活菌数下降不到一个数量级，具有较好的耐酸能力，能顺利通过胃到达肠道发挥益生作用。
_表I 罗伊氏乳杆菌LE16耐酸性能 _
权利要求
1.一种罗伊氏乳杆菌，其特征在于，所述罗伊氏乳杆菌在中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为CGMCC N0.6405。
2.权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌在调节肠道菌群中的应用。
3.权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌在抑制肠道致病菌或食品腐败微生物中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述肠道致病菌是指大肠杆菌、李斯特菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏痢疾杆菌或产气荚膜梭菌； 所述食品腐败微生物是指枯草芽孢杆菌或蜡样芽孢杆菌。
5.权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌与常规载体组合在预防和/或治疗肠道菌群失调中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述常规载体是低聚糖、维生素、矿物质、食品辅料的一 种或多种 。
全文摘要
本发明公开了一种罗伊氏乳杆菌及其应用，所述罗伊氏乳杆菌在中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为CGMCC NO.6405。所述的罗伊氏乳杆菌在调节肠道菌群、抑制肠道致病菌或食品腐败微生物可得到应用。或者，所述罗伊氏乳杆菌与常规载体组合在预防和/或治疗肠道菌群失调中能够得到良好的应用效果。
文档编号C12N1/20GK103114051SQ201210458798
公开日2013年5月22日 申请日期2012年11月15日 优先权日2012年11月15日
发明者张和春, 杭晓敏, 张旻, 夏祎稚, 陈培青 申请人:上海交大昂立股份有限公司, 上海诺德生物实业有限公司