抑制燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐产生的方法
【专利摘要】本发明涉及一种在含有硝酸根或硝酸盐以及硝酸盐还原酶的保健品、食品或药材中抑制亚硝酸根或亚硝酸盐产生的方法，包括使用保健品、食品或药材可接受的硝酸盐还原酶抑制剂抑制所述保健品、食品或药材中硝酸盐还原酶的活性。尤其涉及一种抑制燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐产生的方法，包括使用燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂抑制燕窝中硝酸盐还原酶的活性。具体而言，所述方法包括向新鲜采集的燕窝加入抑制有效量的燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂或在燕窝生产过程中加入抑制有效量的燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂。硝酸盐还原酶抑制剂可选自钨酸盐。本发明的方法能够有效抑制燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐的产生，降低燕窝的食用风险。
【专利说明】抑制燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐产生的方法
【技术领域】
[0001]本发明一般地涉及一种使用硝酸盐还原酶抑制剂在含有硝酸根或硝酸盐以及硝酸盐还原酶的保健品、食品或药材中抑制亚硝酸根或亚硝酸盐产生的方法，特别地涉及抑制燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐产生的方法，以及硝酸盐还原酶抑制剂在抑制燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐产生的用途。
【背景技术】
[0002]亚硝酸盐属于高度毒性类化学品，有许多相关的研究报告说明其病理症状。其中，婴儿由于消化系统及正铁血红蛋白还原酶系统尚未成熟，较易患上亚硝酸盐引起的正铁血红蛋白血症，后果严重则可以致命。另外，亚硝酸盐和硝酸盐可与胃酸作用产生化合物亚硝胺。亚硝胺是高度致癌物，有报告指出亚硝胺与直肠癌、胃癌及胰脏癌均有直接关系。亚硝酸盐引致中毒的症状还包括慢性阻塞性肺病、DNA突变与在孕妇中的儿童产生脑瘤。因此，在保健品、食品和药材中亚硝酸盐含量必须严格控制。
[0003]燕窝是一种常见的保健品，其是由雨燕科(Apodidae)金丝燕属(Collocalia)的多种鸟类分泌出的唾液或唾液与其绒羽混合凝结于悬崖峭壁上而筑成的巢窝。主产地为印度尼西亚、马来西亚、越南等。据《本草拾遗》记载:“燕窝甘淡平，大养肺阴，化痰止咳，补而能清，为调理虚劳之圣药，一切病之由于肺虚，而不能肃清下行者，用此皆可治之。”中医认为燕窝:“养阴润燥、益气补中、治虚损、咳痰喘、咯血、久痢，适宜于体质虚弱，营养不良，久痢久疟，痰多咳嗽，老年慢性支气管炎、支气管扩张、肺气肿、肺结核、咯血、吐血和胃痛病人食用。”现代医学发现，燕窝可促进免疫功能，有延缓人体衰老，延年益寿的功效。
[0004]传统上评价燕窝的贵贱与好坏之分在于六大指标:产地、发头、完整程度、清洁品质以及口感。产地:以越南会安生产的燕窝较为质优，商品名叫“会安燕”。在山洞和峭壁上采摘到的燕窝称为“洞燕”。采摘燕洞不仅人身极其危险，大自然也被洗劫一空。为了保护自然，燕屋应运而生。燕屋筑巢于人工建筑房屋内的木板及墙壁上，以实物或其他方法吸引燕子聚居，由燕屋采收到的燕窝叫“屋燕”。现在商品多为“屋燕”，其因清洁爽滑、洁白细腻，在商品上也称为“白燕”。另有采收周期较长，燕窝带金黄色的“黄燕”，主产地为印度尼西亚和马来西亚。“红燕”分为“洞红燕”和“屋红燕”两种。洞红燕可能因外界环境影响，外观犹如岩石壁渗出红色液体渗润而导致巢色从粘贴于岩石壁的一边开始改变成血红色。屋红燕为一位赴德留学的印度尼西亚医生于九十年代所发明。生成原因不明，因与燕洞环境极为相似，故可能同受外界环境影响。色泽较洞红燕均匀，颜色也比洞红燕为深。由于红燕产量少，商品价格也比较贵。洞红燕主产于泰国，而屋红燕则主产于印度尼西亚。
[0005]二零一一年八月淅江省工商局公布燕窝中含有大量的亚硝酸根，平均达4，400ppm，最高更达ll，000ppm，其中以红燕含量最高。随后国家卫生部门立即禁止从马来西亚进口红燕，其他相关的燕窝产业亦受到了经济上严重的打击。这些事件引来境内境外市民对燕窝食用安全的高度关注。
[0006]实际上，亚硝酸盐天然存在于周围环境，并可于动物和人体内源产生，大部分蔬菜中亦含有亚硝酸盐。另外，亚硝酸钠可作为食品添加剂，主要用于腌腊肉类制品等。主要是由于它具有抗菌作用，特别是能够预防可致命的肉毒梭状芽孢杆菌污染，但用量不可超过法定标准。联合国粮食及农业组织/世界卫生组织联合食品添加剂专家委员会(下称“专家委员会”)仍未制定亚硝酸盐的急性参考剂量。专家委员会将亚硝酸盐的每日可摄入量定为每公斤体重O至0.07毫克(以亚硝酸盐离子计算)。而国家食品法典委员会尚未就亚硝酸盐作为食物污染物制定任何食物安全标准。根据国家食品法典委员会和香港法例就亚硝酸盐用作多种奶酪制品和腌制肉类制品的食物添加剂制定标准。根据GB2760-2011《食品添加剂使用标准》规定，只有腊肠、腊肉、西式火腿肠、罐头等几类食品可以添加亚硝酸盐，其他所有食物都不允许添加。其中腌腊肉制品:亚硝酸盐标准上限为150ppm。而香港《食物内防腐剂规例》(第132BD章)已规定了指定食物的亚硝酸盐最高准许含量。香港法定标准:非经加热处理的加工肉类制品，亚硝酸盐标准上限为200ppm ;经加热处理的腌制肉类，亚硝酸盐标准上限为125ppm。然而，《食物内防腐剂规例》第3(10)条规定，该规例不适用于天然含有任何食物添加剂的食品。总之，燕窝中亚硝酸盐含量在国际间并没有一致的参考和管理标准。
[0007]对东南亚国家而言,燕窝出口成了国家主要收入来源之一。然而，以目前的燕窝处理技术，燕窝出口国也只能够把燕窝中的亚硝酸根及亚硝酸盐控制在30ppm或以下。中国为燕窝最大的入口国，同时香港亦为全球最大的燕窝出入口市场，为了保障国民的健康以及国家的声誉，需要提高对燕窝食用安全性的要求，把燕窝中亚硝酸根及亚硝酸盐含量的上限降到低于可检测水平。这个角色上对立与矛盾的问题是目前燕窝处理技术所无法解决的。近年来，一些有关无亚硝酸根及亚硝酸盐的燕窝生产方法主要通过重复不断浸洗燕窝后再重新整型。然而，燕窝中的营养成分在重复浸洗及重新整型时所流失的百分比以及在处理后亚硝酸根及亚硝酸盐在燕窝中残留的含量均得不到数据的支持。
[0008]因此，在本领域需要一种既能够有效地控制燕窝中的亚硝酸根及亚硝酸盐，又可以保持燕窝营养成分的方法。
【发明内容】
[0009]在一个实施方案中，本发明涉及一种在含有硝酸根或硝酸盐以及硝酸盐还原酶的保健品、食品或药材中抑制亚硝酸根或亚硝酸盐产生的方法，包括使用保健品、食品或药材可接受的硝酸盐还原酶抑制剂抑制所述保健品、食品或药材中硝酸盐还原酶的活性。
[0010]在一方面，本发明涉及一种抑制燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐产生的方法，包括使用燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂抑制燕窝中硝酸盐还原酶的活性。
[0011]在进一步的方面，本发明的方法包括向新鲜采集的燕窝加入抑制有效量的燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂或在燕窝生产过程中加入抑制有效量的燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂。
[0012]在进一步的方面，本发明的方法进一步包括去除所述硝酸盐还原酶抑制剂。
[0013]在进一步的方面，硝酸盐还原酶抑制剂的抑制有效量可以为大约IOOnM-1 μ M/g燕窝。
[0014]在进一步的方面，所述硝酸盐还原酶抑制剂可以为可产生游离钨酸根的钨酸盐，例如鹤酸钠或鹤酸钾。[0015]在另一个实施方案中，本发明涉及一种燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂在抑制燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐产生中的用途。
[0016]在另一个实施方案中，本发明涉及一种燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂在制备用于抑制燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐产生的组合物中的用途。
[0017]在一个方面中，本发明所使用的硝酸盐还原酶抑制剂可以为可产生游离钨酸根的钨酸盐，例如钨酸钠或钨酸钾。
[0018]在另一个实施方案中，本发明涉及一种经燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂处理的燕窝，其中亚硝酸根及亚硝酸盐的含量被抑制。在一个方面中，硝酸盐还原酶抑制剂为可产生游离钨酸根的钨酸盐，例如钨酸钠或钨酸钾。
[0019]在另一个实施方案中，本发明涉及一种用于抑制燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐产生的组合物，其包含燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂。在一个方面中，硝酸盐还原酶抑制剂为可产生游离钨酸根的钨酸盐，例如钨酸钠或钨酸钾。
[0020]在另一个实施方案中，本发明提供根据本发明的方法获得的燕窝。
【专利附图】
【附图说明】
[0021]以下将结合附图，对本发明进行进一步的详细说明。本领域技术人员将理解，附图以及以下详细描述旨在仅为示例性的，不应以任何方式解释为对本发明范围的限制。
[0022]图1表示市售燕窝及天然产地中采收燕窝中的硝酸根含量(采用t检验，*号表示具有统计学显著性，***表示99.99%的确定性)。
[0023]图2显示不同燕窝生产环境(“燕洞”及“燕屋”)中硝酸根含量与水样本距鸟粪距尚的关系(米用t检验，*号表不具有统计学显者性，***表不99.99%的确定性)。
[0024]图3是分别从洞红燕和屋红燕中分离的蛋白质的电泳图谱，其中43kDa处条带表示分离的硝酸盐还原酶。
[0025]图4是图3中43kDa处的蛋白质经胰蛋白酶解后，蛋白肽提取物的飞行时间质谱。
[0026]图5显示不同种类燕窝中的硝酸根或硝酸盐还原作用以及钨酸钠对亚硝酸根或亚硝酸盐产生的抑制作用。
【具体实施方式】
[0027]除非本文中另外定义，本文所使用的所有技术和科学术语具有本领域普通技术人员通常所理解的含义。尽管与本文所描述的方法和材料相似或等价的那些方法和材料也可用于本发明的实践中，但是优选的方法和材料还是在本文中加以描述。此外，如本文所使用，数值范围包括定义该范围的数字。本发明的小标题仅仅为了阐述的目的，而不旨在限制本发明的范围。
[0028]如本文所使用，除非上下文明确指出，所有百分比都按重量计算。
[0029]本发明基于在对燕窝中亚硝酸根及亚硝酸盐产生的来源及其产生过程的研究中的如下发现:各种燕窝中天然存在大量的硝酸根或硝酸盐并且存在硝酸盐还原酶。在燕窝采收、加工或存放过程中，硝酸盐还原酶持续将燕窝内存在的硝酸根或硝酸盐还原为亚硝酸根或亚硝酸盐，使得在燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐的含量不断累积，从而可对人体产生不利影响。[0030]本发明通过使用硝酸盐还原酶特异性抑制剂(例如钨酸盐)，堵截了亚硝酸根及亚硝酸盐产生的源头，从而免去了后期重复浸洗时所带来的问题(例如营养成分的流失)，并降低食用各类燕窝(包括但不限于白燕、黄燕及红燕在内)的风险。同时，本发明亦无需对天然燕洞或人工燕屋内部进行改动，保持天然燕洞或人工燕屋内的天然生态环境，将对金丝燕族群的滋扰减到最低。
[0031]因此，本发明目的之一在于提供一种抑制燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐产生的方法，所述方法包括抑制燕窝中硝酸盐还原酶的活性。本发明的方法可包括向新鲜采集的燕窝加入抑制有效量的燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂或在燕窝生产过程中加入抑制有效量的燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂。
[0032]如本文所使用，术语“硝酸盐还原酶”是指能将硝酸盐或硝酸根还原为亚硝酸盐或亚硝酸根的酶。在一个实施方式中，硝酸盐还原酶可以是来自慢生根瘤菌的周质硝酸盐还原酶。在燕窝的主要产地例如印度尼西亚和马来西亚，在燕屋或燕洞环境中普遍存在根瘤菌，其可分泌硝酸盐还原酶，使得采集或加工的燕窝中存在硝酸盐还原酶。
[0033]如本文所使用，术语“燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂”包括能够有效抑制硝酸盐还原酶的活性并且不会给燕窝的品质和/或食用安全带来明显不利影响的抑制剂。在一个方面，燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂可包括能够有效抑制硝酸盐还原酶的活性并且无需进一步去除或在使用后方便和容易除去的抑制剂。
[0034]本领域技术人员还将公知的是，任何能够抑制硝酸盐还原酶的活性，并且不会对人体带来较亚硝酸根或亚硝酸盐更大的不利影响以及不会给燕窝的营养价值等带来显着影响的抑制剂都可以应用于本发明，用于抑制燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐的产生。例如，抑制硝酸盐还原酶抑制剂可以选自钨酸盐。在一个实施方案中，本发明的硝酸盐还原酶抑制剂可以是特异性硝酸盐还原酶抑制剂，其专属抑制硝酸盐还原酶的活性。
[0035]优选地，硝酸盐还原酶抑制剂为能够产生游离钨酸根的钨酸盐。进一步，钨酸盐可以选自钨酸钠或钨酸钾。
[0036]在一个实施方式中，钨酸盐可以是钨酸钠，其为植物实验中使用的一种硝酸盐还原酶抑制剂，通过与硝酸盐还原酶中的钥离子产生化学反应而抑制其活性。钨酸钠无色无味，亦未证实对人体有害。相反，钨酸钠能通过增强胰脏功能来对抗糖尿病。再者，钨酸钠具有一定的水溶性，因此，如果期望，所加入的微量钨酸钠可以通过传统燕窝浸洗技术而方便去除。相对于亚硝酸根和亚硝酸盐的高度毒性，钨酸钠抑制了燕窝中亚硝酸根及亚硝酸盐的产生，大大减低了食用燕窝的风险。
[0037]不受理论束缚，钨酸钠中的钨酸根通过与硝酸盐还原酶中的钥离子相互作用从而抑制了硝酸盐还原酶的活性，进而抑制了亚硝酸根或亚硝酸盐的产生。根据本发明的教导，本领域技术人员可以容易地理解，其他不会对人体产生不可接受的不利影响、能够产生游离钨酸根的钨酸盐同样适用于本发明，例如钨酸钾。
[0038]进一步，根据本领域技术人员可以容易地想到其他适用的非钨酸盐的硝酸盐还原酶抑制剂，以用于抑制燕窝中亚硝酸根及亚硝酸盐的产生，只要其能够抑制硝酸盐还原酶的活性并且是燕窝可接受的。
[0039]如本文所使用，术语“抑制有效量”是指任何有效抑制燕窝中硝酸盐还原酶的量。本领域技术人员将公知的是，硝酸盐还原酶抑制剂的抑制有效量是可根据燕窝中硝酸盐还原酶的含量决定的，并且使用上限以不对人体产生伤害为宜。本领域技术人员能够根据燕窝的类型和来源等，确定硝酸盐还原酶抑制剂的有效量。
[0040]优选地，本发明硝酸盐还原酶抑制剂的抑制有效量使用量可以为约IOOnM-1 μ M/g燕窝，例如约200-800nM/g燕窝，诸如约400_600nM/g燕窝、约450_550nM/g燕窝、约500nM/
g燕窝等。
[0041]硝酸盐还原酶抑制剂可以以本领域已知的任何适合形式例如固体、液体、粉末、混悬液等以适合的方式例如涂敷、浸泡或喷雾等添加至燕窝中。硝酸盐还原酶抑制剂可添加至新鲜采集的燕窝，或者可在燕窝加工过程中的各个阶段添加至燕窝，以抑制硝酸盐还原酶的活性，从而减少甚至消除亚硝酸根或亚硝酸盐的产生。
[0042]本发明还提供一种用于抑制燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐产生的组合物，其包含本发明的硝酸盐还原酶抑制剂。
[0043]本发明进一步提供一种经本发明的硝酸盐还原酶抑制剂处理的燕窝，经此处理的燕窝与不经此处理的燕窝相比，其亚硝酸根或亚硝酸盐的含量大幅降低甚至不含有亚硝酸根或亚硝酸盐。
[0044]本发明还提供一种本发明的硝酸盐还原酶抑制剂在抑制燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐产生中的用途。
[0045]本发明还提供一种本发明的硝酸盐还原酶抑制剂在制备用于抑制燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐产生的组合物中的用途。
[0046]实施例
[0047]下面通过实施例进一步说明本发明。然而，本发明的范围不局限于这些实施例。除非特别说明，所有试剂和设备均可商购获得。
[0048]实施例1.燕窝及其产地的天然环境中含有大量的硝酸根或硝酸盐
[0049]按照中国“食品安全国家标准-食品中亚硝酸盐的测定” GB5009.33-2010中描述的方法，对市售及天然采收的各类燕窝进行了检测。发明人检测了市售和天然产地采收的燕窝中硝酸根的含量，其中市售的洞燕、屋红燕和屋黄燕分别来自印度尼西亚、越南、马来西亚及泰国等地(见表I)，而天然产地采收的洞燕、屋红燕和屋黄燕分别采收自马来西亚哥曼东洞及印度尼西亚爪哇岛上燕屋。结果发现，无论市售或天然采收的燕窝中均含有大量硝酸根或硝酸盐(见表I和图1)。
[0050]表I不同燕窝品种中的硝酸盐和亚硝酸盐含量
[0051]
【权利要求】
1.一种在含有硝酸根或硝酸盐以及硝酸盐还原酶的保健品、食品或药材中抑制亚硝酸根或亚硝酸盐产生的方法，包括使用保健品、食品或药材可接受的硝酸盐还原酶抑制剂抑制所述保健品、食品或药材中硝酸盐还原酶的活性。
2.一种抑制燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐产生的方法，包括使用燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂抑制燕窝中硝酸盐还原酶的活性。
3.如权利要求2所述的方法，其包括向新鲜采集的燕窝加入抑制有效量的燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂或在燕窝生产过程中加入抑制有效量的燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂。
4.如权利要求3所述的方法，其进一步包括去除所述硝酸盐还原酶抑制剂。
5.如权利要求3所述的方法，其中所述抑制有效量为IOOnM-1μ M/g燕窝。
6.如权利要求1-5任一项所述的方法，其中所述硝酸盐还原酶抑制剂为可产生游离钨酸根的钨酸盐。
7.如权利要求6所述的方法，其中所述钨酸盐为钨酸钠或钨酸钾。
8.燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂在抑制燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐产生中的用途。
9.燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂在制备用于抑制燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐产生的组合物中的用途。
10.如权利要求8或9所述的用途，其中所述硝酸盐还原酶抑制剂为可产生游离钨酸根的钨酸盐。
11.如权利要求10所述的用途，其中所述钨酸盐为钨酸钠或钨酸钾。
12.—种经燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂处理的燕窝，其中亚硝酸根及亚硝酸盐的含量被抑制。
13.如权利要求12所述的燕窝，其中所述硝酸盐还原酶抑制剂为可产生游离钨酸根的钨酸盐。
14.如权利要求13所述的燕窝，其中所述钨酸盐为钨酸钠或钨酸钾。
15.一种用于抑制燕窝中亚硝酸根或亚硝酸盐产生的组合物，其包含燕窝可接受的硝酸盐还原酶抑制剂。
16.如权利要求15所述的组合物，其中所述硝酸盐还原酶抑制剂为能够产生游离钨酸根的钨酸盐。
17.如权利要求16所述的组合物，其中所述钨酸盐为钨酸钠或钨酸钾。
18.根据权利要求2-7任一项所述的方法获得的燕窝。
【文档编号】A23L1/015GK103815210SQ201210464527
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2012年11月16日 优先权日:2012年11月16日
【发明者】詹华强, 董婷霞, 陈嘉伦 申请人:香港科技大学