专利名称：一株海洋真菌产黄青霉及其在制备抗肿瘤药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一株具有抗肿瘤活性的海洋真菌——产黄青霉(Penicilliumchrysogenum) MNP07010101 及其应用。
背景技术：
海洋真菌是海洋微生物的一个重要分支，由于它们独特的生活环境以及生态系统，不仅确保其在极端环境中生存，而且提供了在陆生微生物中没有的代谢产物的生产能力，因而是多种多样新颖化合物和药物的极好资源。海洋来源真菌产生的代谢产物主要为生物碱、肽类、聚酮类、留体和萜类等类型的化合物，其中很多具有显著的抗肿瘤、抗细菌、抗真菌、抗虫、抑制微藻生长等生物活性，在医药与农药研发、环境保护等领域具有重要的基础研究意义，也显示了从海洋微生物中寻找药理活性物质的光辉前景。
发明内容
本发明目的是提供一株具有抗肿瘤活性的海洋真菌菌株——产黄青霉(Penicillium chrysogenum) MNP07010101,及其在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明采用的技术方案是:一株具有抗肿瘤活性的海洋真菌-产黄青霉(Penicillium chrysogenum)
MNP07010101，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址:中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏编号:CCTCC No:M 2012317，保藏日期2012年8月28日。该菌株的菌落特征如下:涂布或划线接种于PDA平板培养基上生长迅速，28°C培养48 h后，长至直径21-25mm，边缘菌丝体白色，质地绒状，蓝绿色，菌落反面成浅黄褐色；该菌株的菌体生长特征如下:在液体培养基中，28°C培养48 h后呈颗粒状贴壁生长。本发明所述产黄青霉(Penicillium chrysogenum) MNP07010101由浙江省东海海域采集的海水中分离和筛选得到。菌株的筛选纯化方法为:将采集的海水运用稀释涂布法涂于平板培养基上，28°C培养至菌落数量不再增加，挑取单菌落至斜面培养基上。28°C培养2d，以菌株形态特征区别进行挑选，即得该菌株，并对该菌株进行菌种鉴定。所述的平板培养基和斜面培养基的组成相同，组成为:土豆15(T350g/L，葡萄糖10 30g/L，琼脂15 35g/L，溶剂为水，ρΗ7.2 8.0。本发明经筛选获得的产黄青霉(Penicillium chrysogenum) MNP07010101,涂布或划线接种在平板培养基上生长迅速，28°C培养48 h后，长至直径21-25mm，边缘菌丝体白色，质地绒状，蓝绿色，菌落反面成浅黄褐色。将该菌株的16sRNA部分核苷酸序列与美国国立生物信息中心(National Centerfor Biotechnology Information USA, NCBI)的基因库中的微生物16sRNA序列比对,确认其为产黄青霉(Penicillium chrysogenum)。该菌株的16s rRNA的部分核苷酸序列如下:CTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACCGAGTGAGGGCCCTCTGGGTCCAACCTCCCACCCGTGTTTATTTTACCTTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCTTAACTGGCCGCCGGGGGGCTTACGCCCCCGGGCCCGCGCCCG
权利要求
1.一株具有抗肿瘤活性的海洋真菌-产黄青霉(Penicillium chrysogenum)MNP07010101，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址:中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏编号:CCTCC No:M 2012317，保藏日期2012年8月28日。
2.如权利要求1所述的产黄青霉MNP07010101，其特征在于其16srRNA的部分核苷酸序列如下:
3.权利要求1所述的产黄青霉MNP07010101在制备抗肿瘤药物中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述抗肿瘤药物为治疗肝癌、神经癌或淋巴癌的药物。
5.如权利要求3或4所述的应用，其特征在于所述产黄青霉MNP07010101提取物用于制备抗肿瘤药物。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述提取物为乙酸乙酯提取物，由如下方法制得:产黄青霉MNP07010101接种至液体发酵培养基，于25 35°C、150 250 r/min振荡条件下培养14 30天，得到发酵液，发酵液经细胞破碎、分离除去菌体，用乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩挥干得浸膏，浸膏上HP-20大孔树脂层析过柱，以甲醇:水体积比为2:8^10:0为洗脱液进行梯度洗脱，收集甲醇体积浓度60%以上的洗脱液，旋蒸浓缩挥干，即得所述乙酸乙酯提取物；所述液体发酵培养基组成为:麦芽浸粉3.(Γ7.0g/L，麦芽糖1.5^2.0g/L，葡萄糖.3.0 7.0 g/L，酵母浸粉0.8 1.5 g/L，溶剂为水:人工海水体积比1:0.25 4.0的混合液，ρΗ7.2 8.0。
全文摘要
本发明提供了一株具有抗肿瘤活性的海洋真菌——产黄青霉(Penicillium chrysogenum)MNP07010101及其应用。该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NoM 2012317，保藏日期2012年8月28日。本发明的有益效果主要体现在(1)本发明的海洋真菌菌株营养要求简单、容易培养；(2)该菌株的代谢产物具有抗肿瘤活性；(3)该菌株的次级代谢产物的抗肿瘤活性高，其培养所得的发酵液总浸膏对HepG2、PC12细胞和U937细胞有一定的抗肿瘤活性，对其总浸膏进行过HP-20大孔树脂柱处理，收集得到的小极性段落对HepG2、PC12、U937细胞抑制活性在浓度200μg/ml时抑制率最高可达90%以上，具有很强的抗肿瘤活性。
文档编号C12N1/14GK103074233SQ20121057408
公开日2013年5月1日 申请日期2012年12月25日 优先权日2012年12月25日
发明者王鸿, 杨雪萍, 赵美蓉, 易喻, 梅建凤, 应国清 申请人:浙江工业大学