用于治疗牛乳蛋白过敏症的β-乳球蛋白肽的制作方法

用于治疗牛乳蛋白过敏症的β-乳球蛋白肽的制作方法
【专利摘要】本发明涉及用于治疗对牛乳过敏的婴儿的牛乳过敏症的营养组合物，优选为肠内组合物，其中该营养组合物含有特定的β-乳球蛋白肽，其能够减轻尤其是消除牛乳蛋白过敏症的急性症状。
【专利说明】用于治疗牛乳蛋白过敏症的β-乳球蛋白肽
[0001]说明【技术领域】
[0002]本发明涉及一种包含特定的β_乳球蛋白肽的营养组合物，优选肠内组合物，其用于治疗对牛乳尤其是乳清蛋白过敏的婴儿的牛乳过敏症，且其能够减轻尤其是消除牛乳蛋白过敏症的急性症状。
【背景技术】
[0003]在一般的营养过程中，膳食蛋白质经胃肠道呈递至免疫系统而不产生对摄入的营养物的免疫应答。这一无应答性被称为口服免疫耐受或口服耐受。口服免疫耐受的诱导尤其涉及婴儿，其在出生后首次暴露于膳食蛋白质并且不得不适应这一点。如果婴儿的口服免疫耐受未建立，就会发生食物过敏。
[0004]约2至3%的婴儿对牛乳蛋白过敏。患有牛乳蛋白过敏的婴儿的市售婴儿配方奶粉包括深度水解蛋白(深度蛋白水解产物)或甚至仅仅以游离氨基酸作为氮源。在这些配方奶粉中不存在过敏原性蛋白质或肽。从而避免了暴露于乳蛋白质，并从而防止了过敏反应。这称为牛乳过敏的二级预防。然而，一旦牛乳蛋白被再次引入到饮食中，婴儿可能会再次遭受过敏反应。
[0005]市售低过敏原性配方奶粉包括部分蛋白水解产物(部分水解的蛋白质)，其具有降低的过敏原性。这些制剂具有优点，即其诱导了对完整蛋白质的口服免疫耐受，并具有之后将天然蛋白质引入饮食而具有降低的过敏反应风险的优势。这称为牛乳蛋白过敏的一级预防且这些配方奶粉通常用于处于发展过敏的风险中的婴儿。然而，对于确诊的婴儿，即已产生牛乳蛋白过敏的婴儿，这类配方奶粉是不合适的，因为其仍然引起过敏反应。
[0006]EP 0629350公开了非过敏原性乳清蛋白水解物的用途，其据称能够诱导牛乳蛋白耐受性。
[0007]EP 0827697公开了酶法水解的乳清在制备诱导易感哺乳动物中对牛乳的口服耐受的组合物中的用途。该乳清的过敏原性蛋白的免疫学检测水平比未水解的乳清少> =100 倍。
[0008]WO 00/42863公开了一种用于在处于蛋白过敏风险中的婴儿中诱导蛋白耐受的低过敏原性组合物，其包括非过敏原性蛋白深度水解基和/或游离氨基酸基，所述组合物包含作为活性成分的至少一种过敏原性蛋白的致耐受性肽。
[0009]WO 02/24883公开了表达致耐受性肽的乳酸菌的用途。该乳酸菌能够降低个体发展过敏反应的趋势。
[0010]WO 2006/115412公开了一种包括短链脂肪酰基链和不可消化的可发酵糖类的液
体营养物。
[0011]WO 2008/017517公开了免疫原性肽及其在免疫疾病中的用途。
[0012]JP 2010-105915Α公开了通过水解β -乳球蛋白而获得的肽及在食品和饮品中的用途。
[0013]WO 2011/069042公开了一种用于诱导耐受的含有牛乳肽的水解产物和/或由其衍生的肽。
[0014]然而，现有技术中的低过敏原性组合物通常仅通过避免存在潜在的过敏原来提供其作用，从而仅仅提供了二级过敏预防作用和/或其仅适合于处于发展过敏风险中的婴儿而不适合于已产生牛乳过敏的婴儿，因为其会在这样的婴儿中引起过敏反应。

【发明内容】

[0015]因此，遭受牛乳蛋白过敏的受试者仍然需要具有对急性症状的改善的效果的营养组合物。因此，本发明的技术问题是提供用于克服上述劣势尤其是可用于治疗对牛乳过敏的婴儿的组合物、方法和装置，其尤其是指当再次遇到过敏原性蛋白时，急性症状被减轻或甚至被消除。
[0016]该技术问题通过独立权利要求的教导得以解决。
[0017]因此，本发明尤其提供了用于治疗对牛乳蛋白过敏的婴儿的牛乳蛋白过敏症的营养组合物，其包括至少一种β_乳球蛋白肽，其中β_乳球蛋白肽包含由12至30个氨基酸组成的氨基酸序列并具有跨越β -乳球蛋白SEQ ID NOlO的氨基酸13至48的氨基酸序列。优选地，肽具有低于5kDa的分子量。优选地，本发明的至少一种β_乳球蛋白肽具有至多5kDa的分子量，尤其是0.1至4.9kDa，优选为0.5至4.9，更优选为2至4.9kDa，最优选为约2.4kDa。在一个优选实施方式中，至少一个β_乳球蛋白肽由12至30个氨基酸组成,优选为14至25个氨基酸，更优选为16至20个氨基酸，最优选为18个氨基酸。
[0018]本发明人令人惊奇地发现，在过敏小鼠动物模型中，急性过敏反应可被特定的β_乳球蛋白肽改善。β_乳球蛋白是牛乳和羊乳中两个主要乳清蛋白中的一个，但其未见于人乳中。在牛乳蛋白过敏症中，β_乳球蛋白经常是过敏原。其包括162个氨基酸残基和18.4kDa的分子量。在实验中，小鼠已被完整的乳清蛋白致敏，并因此在用完整的乳清蛋白真皮内攻击后表现出急性过敏性皮肤反应，即其已变为乳清蛋白过敏的，这也通过特异性IgE的增加而得到证明。
[0019]随后，用数种肽和蛋白组分处理这些小鼠，结果令人惊奇地发现，用来自β -乳球蛋白特定区域的特定肽的处理显著抑制了(即减轻)了当这些小鼠用完整乳清蛋白再次攻击时产生的过敏反应。因此，用特定的β_乳球蛋白肽处理先前过敏的小鼠，当其在处理后再次遇到过敏原时，呈现出显著减轻的过敏反应。
[0020]因此，这些肽适合与如深度水解蛋白和/或游离氨基酸一起掺入到抗过敏原性婴儿配方奶粉中，从而不仅通过避免过敏原来防止过敏反应，而且也通过当再次暴露于过敏原时减轻或改善急性过敏反应来有利地治疗过敏症。换言之，这些肽用于口服免疫治疗以减轻对过敏症的敏感度。
【具体实施方式】
[0021]本文中，术语“治疗”应理解为是指人或动物患者尤其是婴儿的治疗性治疗，就部分或完全治愈过敏症和/或缓解或改善过敏症的症状而言。优选地，治疗是口服免疫治疗。本文中，“治疗”不应理解为包括过敏症的防止(prevent1n)或预防(prophylaxis),即口服耐受的诱导。
[0022]本文中，术语“营养组合物”涉及具有营养价值的组合物，其至少包含蛋白组分，优选包含至少一种蛋白组分和脂质组分，最优选包含至少一种蛋白组分和碳水化合物组分，尤其是至少包含蛋白组分、脂质组分和碳水化合物组分。在一个优选实施方式中，营养组合物是肠内营养组合物。在一个优选实施方式中，营养组合物可以是液体、半液体或固体形式。在一个优选实施方式中，固体形式是粉状形式。
[0023]本文中，术语“牛乳过敏症”或“牛乳蛋白过敏症”应理解为尤其是指对牛乳清蛋白的过敏症。
[0024]本文中，术语“至多5kDa”应理解为是指多达且包括5kDa。
[0025]本文中，根据实施例2中所给小鼠模型的教导测量牛乳蛋白过敏症的治疗，以确定对蛋白的急性过敏反应。因此，通过35至90%的即刻型高反应性(ITH)表示急性症状的改善(急性过敏反应具有100%的ITH值)。过敏反应的显著减少表征为具有100%的ITH值的过敏反应的O至30%的ITH，优选为O至25%，优选为O至20%，优选为O至10%，最优选为0%。因此，牛乳蛋白过敏症的治疗优选是指减少了至少15 %、至少20 %、至少30 %、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%和优选100%的同一受试者治疗前所表现的急性过敏反应，如通过在上述小鼠模型测试中所测量的ITH所示。
[0026]通过下列计算公式将ITH的相对值转换为急性过敏反应的减少:100减ITH =减少值。因此，根据本发明，最优选的牛乳蛋白过敏的治疗导致急性反应的完全减少，其指60至100%的，优选为90至100%的，优选为95至100%的，最优选为100%的减少了对膳食蛋白质的急性过敏反应(当再次遇到这些蛋白质时)。
[0027]以类似的方式，人的过敏反应可以通过皮试后皮肤反应的程度来定量。通过将一滴含有可能的过敏原的溶液置于皮肤上来完成测试，并通过一系列划痕或针刺以允许溶液进入皮肤。如果皮肤出现红的、突起的瘙痒区域(称为风团)，其通常意味着该人对该过敏原过敏。这也是ITH反应。可以用本领域已知的技术测定风团的平均直径(Maccar1等人，2003.J Allerg Clin Immunollll, 750-756);也可应用可选的皮肤温度记录测量(Rokita等人，2011.MedPhys38:756-772)。
[0028]在优选实施方式中，本发明涉及营养组合物，优选为肠内组合物，其中至少一种β -乳球蛋白肽包含选自SEQ ID NOUSEQ ID Ν02、SEQ ID Ν03和SEQ ID Ν04的序列，其中任选地，每个肽独立地在其C-和/或N-端被I至6个氨基酸取代，优选为I至5个氨基酸，更优选为I至4个氨基酸，最优选为I至3个氨基酸，其中氨基酸可以是任意氨基酸。在优选实施方式中，本发明涉及营养组合物，其中至少一种乳球蛋白肽由选自SEQ ID NOUSEQ ID Ν02、SEQ ID Ν03和SEQ ID Ν04的氨基酸序列组成。
[0029]在一个特别优选的实施方式中，营养组合物，优选地，肠内组合物，包括β -乳球蛋白肽的两种、三种或优选所有的四种的混合物，尤其是由β_乳球蛋白肽的两种、三种或优选所有的四种的混合物组成，其中β -乳球蛋白肽由SEQ ID NOU SEQ ID Ν02、SEQ ID Ν03和SEQ ID Ν04组成。也就是说，特别优选的是，根据本发明的营养组合物包含由SEQ ID NOl至4组成的所有4种肽。
[0030]根据本发明的β -乳球蛋白肽可通过本领域已知的技术进行化学合成，或通过遗传修饰的宿主如大肠杆菌菌株或乳杆菌菌株表达后分离得到。或者，自乳清蛋白或β_乳球蛋白水解产物中分离和纯化该肽。
[0031]根据本发明的β -乳球蛋白肽不含有具有还原活性的氧还基序(redox motif)，尤其是硫氧还基序。尤其是它们不被这样的人工序列所取代。
[0032]作为进一步的蛋白组分，即除了至少一种β_乳球蛋白肽之外，根据本发明的营养组合物优选包含游离的氨基酸和/或深度水解的乳清蛋白。因此，根据本发明的特定的β_乳球蛋白肽优选不是部分乳清蛋白水解产物的一部分，而是尤其作为使用的唯一蛋白来源或将其与不引起过敏反应的氮源一起使用，尤其是游离氨基酸和/或深度水解的蛋白质，尤其是深度水解的乳清蛋白。
[0033]因此，根据本发明，术语“蛋白质”或“蛋白质组分”包括蛋白质、肽，尤其是β_乳球蛋白肽、游离氨基酸和部分或深度水解的蛋白质的组分。通常，深度水解蛋白产物具有每10g蛋白质超过1g的游离氨基酸含量。本发明中深度水解蛋白质涉及已被水解的蛋白质和小于3wt%的具有5kDa以上大小的肽。通常,深度水解蛋白质通过用蛋白酶水解、然后利用通过5或3kDa截留值的膜过滤的超滤步骤而获得。深度水解蛋白质中典型的肽的平均大小为2至3个氨基酸长。优选的是，这些深度蛋白水解产物几乎不包括超过1.5kDa大小的肽，因为大于1.5kDa的肽仍然可以引起过敏反应。特别优选地，肠内组合物包含深度水解的乳清蛋白。
[0034]深度水解的婴儿配方奶粉是市售可得的，如Nutricia的Nutrilon pepti或Milupa 的 Pregomin0
[0035]基于游离氨基酸的婴儿配方奶粉也是市售可得的，如Nutricia的Neocate。
[0036]根据本发明的营养组合物不含有完整的或仅部分水解的牛乳蛋白，尤其是乳清蛋白。相反，优选的是，营养组合物包含另外的蛋白质组分，其中另外的蛋白质组分选自游离氨基酸、深度水解的乳清蛋白和完整的或部分水解形式的其它来源的(如大豆、豌豆、大米、胶原等)的蛋白质。
[0037]因此，根据本发明的营养组合物的总蛋白含量(即总蛋白质组分)优选包括单独的根据本发明的特定β_乳球蛋白肽或至少一种其它的蛋白质组分，或特别地由单独的根据本发明的特定β_乳球蛋白肽或至少一种其它的蛋白质组分组成，其中其它的蛋白质组分选自游离氨基酸、深度水解的乳清蛋白和完整的或部分水解形式的其它来源(如大豆、豌豆、大米、胶原等)的蛋白质。
[0038]在本发明的一个优选实施方式中，本发明的营养组合物优选包含每g总蛋白中至少10 μ g，更优选为至少30 μ g，优选为至少60 μ g，优选为10至5000 μ g，更优选为10至2000 μ g且特别优选为20至1000 μ g的至少一种β -乳球蛋白肽。
[0039]进一步优选为，根据本发明的营养组合物包含基于组合物干重的5至25%的总蛋白量。本文的总蛋白量是指所有蛋白质组分的总和，即特定的β_乳球蛋白肽加上所有可能存在于根据本发明的营养组合物中的其它的蛋白质组分。
[0040]本发明的组合物优选包含至少50wt.%的来自非人乳的蛋白组分，更优选为至少90wt.%，其各自都基于总蛋白的干重。
[0041]本发明的营养(优选肠内的)组合物优选含有基于总卡路里的5至25%，优选为7至25%，优选为5至20%，优选为5至16%，优选为5至12%的蛋白质，最优选为基于组合物的总卡路里的7.0至12.0%的蛋白质。总卡值可以基于可消化的碳水化合物、脂肪和蛋白质的量进行计算。
[0042]本发明的营养(优选肠内的)组合物优选每10ml即食组合物中含有0.5至6.0g,更优选为1.0至3.0g,甚至更优选为1.0至2.5g的蛋白质。本发明的营养(优选肠内的)组合物优选包含基于总组合物干重的至少7.0wt.%，更优选为至少8.0wt.%，最优选为至少9或至少1wt.%的蛋白质。优选地，本发明的营养(优选肠内的)组合物包含基于总组合物干重的至多40wt.更优选为至多15wt.%,优选为至多20wt.%的蛋白质。基于本发明的营养(优选肠内的)组合物的干重的wt.%的蛋白质是根据凯氏定氮法通过测量总氮并在优选酪蛋白的情况下使用6.38的换算因子来计算的，或对于其它非酪蛋白的蛋白使用6.25的换算因子来计算。
[0043]优选地，根据本发明的营养(优选肠内的)组合物包含作为碳水化合物组分的至少一种不可消化的寡糖。有利地且最优选地，不可消化的寡糖是水溶性的(根据公开于L.Prosky等人,J.Assoc.Anal.Chem71:1017-1023,1988中的方法)。不可消化的寡糖也称为益生元，其在肠内不被存在于人的上消化道(小肠和胃)中的消化酶的作用所消化，而被人类肠道菌群所发酵。不可消化的寡糖有利地且出乎意料地进一步提高了本发明的乳球蛋白肽在治疗牛乳蛋白过敏症中的效果。
[0044]在优选实施方式中，至少一种不可消化的寡糖选自寡聚果糖、不可消化的糊精、寡聚半乳糖、寡聚木糖、寡聚阿拉伯糖、寡聚阿拉伯半乳糖、寡聚葡萄糖、寡聚葡甘露糖、寡聚半乳甘露糖、寡聚甘露糖、壳寡糖(chito-oligosaccharide)、糖醒酸寡糖(uronic acidoligosaccharide)、唾液酸寡糖(sialyl-oligosaccharide)和寡聚岩藻糖。
[0045]优选地，营养组合物包含不可消化的寡糖的混合物。
[0046]在一个特别优选的实施方式中，营养组合物中包含的不可消化的寡糖是平均聚合程度低于7的寡聚果糖，优选为短链，如水解菊粉或平均聚合程度高于15的长链寡聚果糖，更优选为平均聚合程度高于20，如Raftilin HP,更优选为短链和长链寡聚果糖的组合。
[0047]寡聚果糖是指含有β-连接的果糖单元的寡糖，其优选由β (2，I)和/或β (2,6)糖苷键连接，且优选的DP在2和200之间。优选地，寡聚果糖含有末端β (2，I)糖苷键连接的葡萄糖。优选地，寡聚果糖含有至少7个β-连接的果糖单元。在进一步的优选实施方式中，菊糖用作不可消化的寡糖。菊糖是寡聚果糖中的一种，其中至少75%的糖苷键是β (2，I)连接。典型地，菊粉具有8至60个单糖单元之间的平均链长度。适用于本发明组合物的寡聚果糖是市售可得的，其商品名为Rafmine? HP(Orafti)。其它合适的来源是 raftilose (Orafti)、fibrulose 和 fibruline (Cosucra)以及 Frutafit 和frutalose (Sensus)。
[0048]在一个优选的实施方式中，营养组合物不包含寡聚半乳糖，尤其是寡聚半乳糖。这些寡聚半乳糖通常来源于乳糖且可能含有乳蛋白的痕迹。
[0049]本发明的营养组合物优选包含基于本发明组合物干重的0.05至20wt.%的总不可消化寡糖，更优选为0.5至15wt.%,甚至更优选为I至1wt.%,最优选为2.0至1wt.% ο
[0050]基于10ml的本发明的营养组合物，其优选包含0.01至2.5wt.%的总不可消化寡糖，更优选为0.05至1.5wt.%，甚至更优选为0.25至1.5wt.%，其是基于100ml的本发明的组合物。[0051]在本发明的另一个优选实施方式中，营养组合物不含有不可消化的寡糖。
[0052]优选地，根据本发明的营养组合物进一步包含脂质组分以及作为碳水化合物组分的至少一种可消化的碳水化合物。
[0053]因此，优选地，本发明的营养(优选肠内的)组合物可以进一步包括脂质(也称为脂质组分)，尤其是脂肪。本发明的营养(优选肠内的)组合物优选包含作为脂质的植物脂质和/或海产油(marine oil),如藻类油、细菌油、动物油、植物油或鱼油。优选地,组合物包含长链多不饱和脂肪酸，更优选为二十碳五烯酸(EPA)和/或二十二碳六烯酸(DHA)，最优选为DHA。DHA有利于减少IgE的合成，从而减轻或消除过敏反应。优选地，营养组合物包含基于总脂肪酸的至少0.1wt.%,更优选为0.1至Iwt.%的DHA。优选地,组合物不包括来源于乳源的脂肪或脂质，因为这类脂肪可能仍然含有痕量的完整乳蛋白。
[0054]根据本发明的营养(优选肠内的)组合物优选包含基于组合物干重的15至40%的脂质组分。
[0055]优选地，至少一种可消化的碳水化合物可以包括一种或多种本领域已知的适用于食品尤其是婴儿营养组合物的可消化的碳水化合物，如选自可消化的多糖(如淀粉)、可消化的单糖(如葡萄糖、果糖)和可消化的二糖(如乳糖、蔗糖)。尤其优选的为麦芽糊精。使用麦芽糊精是有利的，因为其具有较高的分子量，且在使用时，可以部分补偿由游离氨基酸所导致的增加的渗透压。
[0056]优选地，基于总的可消化的碳水化合物，乳糖的量小于40wt %。优选地，营养(优选肠内的)组合物不包含作为可消化的碳水化合物的乳糖。
[0057]本发明的营养(优选肠内的)组合物优选包含其它组分如维生素和/或矿物质，优选根据国际上用于婴儿配方奶粉的指导。
[0058]在本发明的优选实施方式中，营养组合物由至少一种如本文所指定的β -乳球蛋白肽、脂质组分和可消化的碳水化合物组成。
[0059]在本发明的优选实施方式中，本发明的营养组合物不包含益生兀。
[0060]本文中，术语“至少一种β_乳球蛋白肽”是指两种或更多种β_乳球蛋白肽，从而排除了任何其它的组分如非β-乳球蛋白肽、脂质组分、碳水化合物组分或其组合。
[0061]在优选的实施方式中，本发明涉及用于治疗牛乳蛋白过敏婴儿的牛乳蛋白过敏症的营养(优选肠内的)组合物，其由至少一种β_乳球蛋白肽、其它蛋白质组分、脂质组分、至少一种可消化的碳水化合物和维生素和/或矿物质组成，其中β_乳球蛋白肽包含由12至30个氨基酸组成的氨基酸序列并且具有跨越β -乳球蛋白SEQ ID NOlO的氨基酸13至48的氨基酸序列，其中优选地，该肽具有至多5kDa的分子量。
[0062]在优选的实施方式中，营养组合物，优选为肠内组合物，其是婴儿配方奶粉或第二阶段配方奶粉(follow-on-formula)。
[0063]在进一步的一个优选实施方式中，营养(优选肠内的)组合物是干燥粉末或即食液体的形式。如果本发明的营养(优选肠内的)组合物是干燥形式，例如，是适于与水溶液(优选水)配制后形成液体组合物的粉末。本发明的营养(优选肠内的)组合物也可以优选为液体浓缩物的形式，其在使用前用水稀释。如果本发明的营养(优选肠内的)组合物是即食液体，则其已经包含液体溶剂如水，因而不必在使用前再进行配制。优选地，如果本发明的营养(优选肠内的)组合物是液体形式，则其用Brookfield粘度计在2(TC以10iT1的剪切速度测量时具有低于35mPa.s的粘度，更优选低于6mPa.s的粘度。
[0064]当本发明的营养(优选肠内的)组合物是液体形式时，优选的每日食用体积为每日约80至2500ml的范围，更优选为每日约450至1000ml的范围。
[0065]优选地，根据本发明的营养(优选肠内的)组合物包含下列卡路里分布:脂质组分优选提供30至60%的总卡路里，优选为35至50%的总卡路里，蛋白质组分优选提供5至20%的总卡路里，更优选为5至15%的总卡路里，尤其是6至12%的总卡路里，并且可消化的碳水化合物组分优选提供25至65%的总卡路里，优选为40至60%的总卡路里。总卡路里的量通过来自蛋白质、脂质和可消化的碳水化合物的卡路里的总和而确定。
[0066]为了满足婴儿的卡路里需求，本发明的营养(优选肠内的)组合物优选包含50至200kcal/100ml液体，更优选60至90kcal/100ml液体，甚至更优选为60至75kcal/100ml液体。这种卡路里密度确保了水和卡路里消耗之间的最佳比例。本发明组合物的渗透压优选为150至420m0smol/l，更优选为260至380m0smol/l。低渗透压的目的是减轻胃肠压力。
[0067]本发明的组合物不是人乳。优选地，本发明的营养(优选肠内的)组合物不含活的或死的益生菌，尤其是双歧杆菌或乳酸菌。因为这类细菌通常预培养于基于乳的生长培养基中，添加这样的益生菌会有引入痕量完整牛乳蛋白的危险。优选地，本发明的营养(优选肠内的)组合物不含生长因子和/或细胞因子。优选地，本发明的营养(优选肠内的)组合物不含TGF，尤其是TGF- β。
[0068]本发明的营养(优选肠内的)组合物优选用于婴儿，即是婴儿营养组合物。因此，本发明的营养(优选肠内的)组合物优选施用于在生命头3年的人类受试者。优选地，本发明组合物是婴儿配方奶粉或第二阶段配方奶粉或幼儿奶(其意味着用于比婴儿年龄大的人)。
[0069]在一个根据本发明的用途的实施方式中，营养(优选肠内的)组合物用于喂养或被使用以用于喂养O至36个月大的人类受试者。本发明的营养组合物有利地施用给O至24个月大的人类婴儿，更优选为O至18个月大的人类婴儿，最优选为O至12个月大的人类婴儿。
[0070]本发明的营养(优选肠内的)组合物优选用于治疗食物过敏。更优选地，本发明的营养(优选肠内的)组合物用于治疗牛乳蛋白过敏。甚至更优选地，本发明的营养(优选肠内的)组合物用于治疗牛乳乳清蛋白过敏。本发明的营养(优选肠内的)组合物优选用于口服免疫治疗。
[0071]优选地，本发明的营养(优选肠内的)组合物用于为人类提供每日营养需求，尤其是施用给或喂养人类，尤其是包括幼儿的婴儿，优选为患有牛乳过敏症的人类，更尤其是患有牛乳过敏症的婴儿或幼儿，尤其是婴儿。
[0072]本发明还涉及包含至少一种β_乳球蛋白肽的营养组合物，所述β_乳球蛋白肽包含由12至30个氨基酸组成的氨基酸序列并具有跨越SEQ ID N0.10的β -乳球蛋白的氨基酸13至48的氨基酸序列，其中至少一种β -乳球蛋白肽用于治疗牛乳蛋白过敏症和对牛乳蛋白过敏的婴儿，并且其中所述营养组合物的其它组分如上所指定。
[0073]本发明还涉及包含蛋白质组分、脂质组分和可消化的碳水化合物的营养组合物，其中蛋白质组分包含i)如权利要求1至4任一项所述的至少一种乳球蛋白肽和ii)选自深度水解的蛋白质和游离氨基酸中的至少一种，其中蛋白质组分尤其是由i)如权利要求I至4任一项所述的至少一种β -乳球蛋白肽和ii)选自深度水解的蛋白质和游离氨基酸中的至少一种组成，其中i)和ii)的总和占蛋白质组分的至少95wt.%，优选至少96wt.优选至少97wt.更优选至少98wt.最优选至少99wt.并且其中脂质组分包含基于总脂肪酸的至少0.1wt.%的DHA。
[0074]在一个实施方式中，本发明涉及包含蛋白质组分、脂质组分和可消化的碳水化合物的营养组合物，其中蛋白质组分包括至少95wt.%,优选至少96wt.%,优选至少97wt.% ,更优选至少98wt.% ,最优选至少99wt.%的根据本发明的至少一种β_乳球蛋白肽以及选自深度水解的蛋白质和游离氨基酸中的至少一种，其中蛋白质组分尤其是由至少95wt.%,优选至少96wt.%,优选至少97wt.%,更优选至少98wt.%,最优选至少99wt.%的根据本发明的至少一种β_乳球蛋白肽以及选自深度水解的蛋白质和游离氨基酸中的至少一种组成，并且其中脂质组分包含基于总脂肪酸的至少0.1wt.%的DHA。
[0075]在优选的实施方式中，营养组合物包含至少一种的不可消化的寡糖，其中不可消化的寡糖优选短链或长链寡聚果糖。
[0076]在优选的实施方式中，营养组合物包含每g总蛋白10至5000 μ g的至少一种β_乳球蛋白肽。在优选的实施方式中，本发明的营养组合物优选包含每g总蛋白至少10 μ g,更优选至少30 μ g,优选至少60 μ g,优选10至5000 μ g,更优选10至2000 μ g且特别优选20至1000 μ g的至少一种β -乳球蛋白肽。
[0077]优选地，根据本发明的营养组合物包括基于组合物干重的5至25%的总蛋白量。 [0078]本发明的营养组合物优选是婴儿配方奶粉或第二阶段配方奶粉。特别优选地，营养组合物是用于喂养牛乳蛋白过敏婴儿的婴儿配方奶粉或第二阶段配方奶粉。
[0079]适用于并设计用于根据本发明的用途的所有本文所鉴定的组合物和物质应理解为也适用于并设计用于治疗的方法或喂养受试者的方法，尤其是有此需要的人类受试者。
[0080]本文中，以所指总组合物的百分比)形式给出的所有相对量加和为所指总组合物的100%。
[0081]本文中，措辞“包括”和“包含”及其变化形式在一个优选的实施方式中以其非限制性含义使用，是指该措辞之后的项包括在内，但没有特别提及的项并不排除在外。本文中，措辞“包括”和“包含”及其变化形式在另一个优选的实施方式中以其限制性含义使用，是指该措辞之后的项包括在内，且没有特别提及的项排除在外，从而等同于措辞“由…组成”及其变化形式的含义。
[0082]涉及本发明的要素尤其是组合物或方法时，不定冠词“一” (a)或“一个”(an)不排除存在多于一个要素的可能性，除非上下文明确要求是一个或仅要素中的一个。因此，不定冠词“一”或“一个”通常是指“至少一个”。
[0083]进一步优选的实施方式是从属权利要求(sub-claim)的主题。
[0084]本发明将通过非限制性实施例来进一步描述。
[0085]SEQ ID NOlO显示了总数为162个氨基酸的完整牛β -乳球蛋白的氨基酸序列。β -乳球蛋白内跨越氨基酸13至48的区域具有如下序列:Gln Lys Val Ala Gly Thr Trp TyrSer Leu Ala Met Ala Ala Ser Asp lie Ser Leu Leu Asp Ala Gln Ser Ala Pro Leu Arg Val TyrVal Glu Glu Leu Lys Pro。
[0086]实施例1[0087]肽的选择
[0088]18个氨基酸长的合成肽具有跨越β -乳球蛋白B变体的12个氨基酸重叠和β -乳球蛋白A变体的6聚合成肽,其获得自JPT Peptide Technologies (Berlin,德国)。
[0089]将肽进行合成并用T细胞系的分析进行预筛选。25个转化了 18-EpsteinBarr病毒(EBV)的B细胞培养于补充有10 %热灭活FBS和2 % Pen/Strep的RPMI1640-GlutaMAX?-1 中。牛乳特异性 T 细胞系(TCL)如 Schade 等人(2000，J Allerg.Clin.1mmunol.106:1155-62)先前所述进行产生。将TCL培养于含有2% HS,2% Pen/StrepU % Glut,50IU/ml IL-2和50IU/ml IL-4的Yssel培养基中，并每两周用牛乳再刺激以维持其在培养基中。对于再刺激，自体EBV转化的B细胞用50μ g/ml牛乳蛋白混合物预孵育过夜。随后，对B细胞进行照射并添加至TCL中。
[0090]如Ruiter等人(2006, Clin Exp Allergy36:303-10)之前所描述的测试肽特异性T细胞增殖。简言之，照射的EBV转化的B细胞(4X 14/孔)在96孔U型板中用50 μ g/ml主要过敏原或10 μ g/ml合成肽(2个或3个肽的混合物，或单一的肽)预孵育过夜，一式三份。乳清蛋白(Prolacta)获得自Lactalis (Laval,法国)。酪蛋白购自FrieslandCampinaDomo (Amersfoort,荷兰)。对于牛乳蛋白混合物，将Prolacta和酪蛋白以1:1比例进行混合。同时α-乳清蛋 白(α-LAC)和β-乳球蛋白(β-LG)也作为对照进行测试。随后，4Χ 14T细胞被加入到孔中并培养24小时。第二天，加入氚标记的胸腺嘧啶脱氧核苷(I μ Ci/孔)。18小时后,用玻璃纤维过滤器收获细胞,并使用Microbeta2板计数器(PerkinElmer, Waltham,MA,美国)测定[3H]_TdR掺入。掺入被表不为每分钟的计数(cpm)且减去EBV B细胞的背景增殖。所有测试均在含有2% Pen/Strep和1% Glut的Yssel培养基中进行，在37°C、潮湿的5% CO2氛围中进行孵育。每个TCL至少测试3次。
[0091]选择具有最高T细胞反应性的肽以进一步在动物模型中进行测试。这9个肽来源于β -乳球蛋白。肽混合物1-4具有最好的效果。
[0092]表1:肽的序列信息
【权利要求】
1.一种用于治疗对牛乳蛋白过敏的婴儿的牛乳蛋白过敏症的营养组合物，其包括至少一种β-乳球蛋白肽，所述β-乳球蛋白肽包含由12至30个氨基酸组成的氨基酸序列并具有跨越β -乳球蛋白SEQ ID NOlO的氨基酸13至48的氨基酸序列。
2.如权利要求1所述的用于治疗对牛乳蛋白过敏的婴儿的牛乳蛋白过敏症的营养组合物，其中至少一种β -乳球蛋白肽由12至30个氨基酸组成。
3.如权利要求1或2所述的用于治疗对牛乳蛋白过敏的婴儿的牛乳蛋白过敏症的营养组合物，其中至少一种β -乳球蛋白肽包含选自SEQ ID NOl、SEQ ID Ν02、SEQ ID Ν03和SEQID Ν04的一种序列，其中任选地，每个肽独立地在其C-和/或N-端用I至6个任意氨基酸取代。
4.如权利要求1至3所述的用于治疗对牛乳蛋白过敏的婴儿的牛乳蛋白过敏症的营养组合物，其包括由SEQ ID NOUSEQ IDN02、SEQ ID NO 3和SEQ IDN04组成的β-乳球蛋白肽的两种、三种或四种的混合物。
5.如上述权利要求任一项所述的用于治疗对牛乳蛋白过敏的婴儿的牛乳蛋白过敏症的营养组合物，其包括作为其它蛋白质组分的游离氨基酸和/或深度水解的蛋白质。
6.如上述权利要求任一项所述的用于治疗对牛乳蛋白过敏的婴儿的牛乳蛋白过敏症的营养组合物，其包含至少一种选自寡聚果糖、不可消化的糊精、寡聚半乳糖、寡聚木糖、寡聚阿拉伯糖、寡聚阿拉伯半乳糖、寡聚葡萄糖、寡聚葡甘露糖、寡聚半乳甘露糖、寡聚甘露糖、壳寡糖、糖醛酸寡糖、唾液酸寡糖和寡聚岩藻糖的不可消化的寡糖。
7.如权利要求6所述的用于治疗对牛乳蛋白过敏的婴儿的牛乳蛋白过敏症的营养组合物，其中不可消化 的寡糖是短链或长链的寡聚果糖。
8.如上述权利要求任一项所述的用于治疗对牛乳蛋白过敏的婴儿的牛乳蛋白过敏症的营养组合物，其包含脂质组分和至少一种可消化的碳水化合物。
9.如上述权利要求任一项所述的用于治疗对牛乳蛋白过敏的婴儿的牛乳蛋白过敏症的营养组合物，其中组合物包含每g总蛋白质10至5000 μ g的至少一种β -乳球蛋白肽。
10.如上述权利要求任一项所述的用于治疗对牛乳蛋白过敏的婴儿的牛乳蛋白过敏症的营养组合物，其中组合物包括基于组合物干重的5至25%的总蛋白量。
11.如上述权利要求任一项所述的用于治疗对牛乳蛋白过敏的婴儿的牛乳蛋白过敏症的营养组合物，其中组合物包括基于组合物干重的0.05至20wt.%的至少一种不可消化的寡糖。
12.如上述权利要求任一项所述的用于治疗对牛乳蛋白过敏的婴儿的牛乳蛋白过敏症的营养组合物，其中组合物包括基于组合物干重的15至40%的脂质组分。
13.如上述权利要求任一项所述的用于治疗对牛乳蛋白过敏的婴儿的牛乳蛋白过敏症的营养组合物，其是婴儿配方奶粉或第二阶段配方奶粉。
14.如上述权利要求任一项所述的用于治疗对牛乳蛋白过敏的婴儿的牛乳蛋白过敏症的营养组合物，其是干燥粉末或即食型液体的形式。
15.如权利要求1至5、8至10和12至14所述的用于治疗对牛乳蛋白过敏的婴儿的牛乳蛋白过敏症的营养组合物，其中肠内组合物包括由至少一种β_乳球蛋白肽组成的蛋白质组分、脂质组分和至少一种可消化的碳水化合物，其中β_乳球蛋白肽包含由12至30个氨基酸组成的氨基酸序列并具有跨越β -乳球蛋白SEQ ID N0.10的氨基酸13至48的氨基酸序列。
16.一种营养组合物，其包含至少一种包含由12至30个氨基酸组成的氨基酸序列并具有跨越β -乳球蛋白SEQ ID N0.10的氨基酸13至48的氨基酸序列的β -乳球蛋白肽，其中至少一种β-乳球蛋白肽用于治疗对牛乳蛋白过敏的婴儿的牛乳蛋白过敏症。
17.一种营养组合物，其包括蛋白质组分、脂质组分和可消化的碳水化合物，其中蛋白质组分包含i)权利要求1至4任一项所述的至少一种β -乳球蛋白肽和ii)选自深度水解的蛋白质和游离氨基酸中的至少一种，尤其是由i)权利要求1至4任一项所述的至少一种β_乳球蛋白肽和ii)选自深度水解的蛋白质和游离氨基酸中的至少一种组成，其中i)和ii)的总量占蛋白质组分的至少95wt.%，其中脂质组分包含基于总脂肪酸的至少0.1wt.%的 DHA。
18.如权利要 求17所述的营养组合物，其包括至少一种不可消化的寡糖，其中不可消化的寡糖是短链或长链的寡聚果糖。
19.如权利要求17或18所述的营养组合物，其中组合物包含每g总蛋白质10至5000 μ g的至少一种β_乳球蛋白肽。
20.如权利要求17至19任一项所述的营养组合物，其中组合物包含基于组合物干重的5至25%的总蛋白量。
21.如权利要求17至20任一项所述的营养组合物，其是婴儿配方奶粉或第二阶段配方奶粉。
22.如权利要求17至21任一项所述的营养组合物，其是用于喂养对牛乳蛋白过敏的婴儿的婴儿配方奶粉或第二阶段配方奶粉。
【文档编号】A23L1/305GK104039173SQ201280060533
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2012年12月6日 优先权日:2011年12月7日
【发明者】莱昂·马蒂厄·约翰尼斯·科尼波斯, 约翰·加森, 劳拉·安托瓦妮特·彼得罗妮拉·玛丽亚·纽勒波洛克 申请人:N.V.努特里奇亚