专利名称：防治龋齿甘蔗叶提取物和制剂的制备及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于防治龋齿的甘蔗叶提取物及其提取工艺，还涉及甘蔗叶提取物在制备药物、功能性食品和化工用品中的应用。
背景技术：
甘鹿(Saccharum sinensis Roxb.)为禾本科多年生甘鹿属植物,广泛种植于1600米以下温带及热带地区。近年，我国甘蔗总产量达上亿吨，其中广西甘蔗产量占全国一半以上。甘蔗在我国种植历史悠久，除用于制糖外，我国用甘蔗汁、皮、渣治病已有上千年历史，据《本草纲目》记载“鹿，脾之果也，其浆甘寒，能泻火热。”，中医认为本品味甘性凉，有清热生津、润燥解酒等功效，可用于热病津伤、心烦口渴、反胃呕吐、肺燥咳嗽、大便燥结等症。我 国种植甘蔗主要用于生产蔗糖，然而占甘蔗15 %的甘蔗叶除部分用于牲畜饲料外，其余大部分就地被焚烧，既污染环境又浪费资源。研究表明，甘蔗叶含有丰富的化学成分，具有重要的经济价值和广泛的药理作用，如抑菌、抗氧化、抗肿瘤及抗疲劳调解免疫等药理活性。甘蔗叶资源丰富，若进行深入研究和开发利用其药用价值，不仅使蔗农获得经济效益，还能缓解中草药资源缺乏问题，促进中草药资源的可持续发展。
发明内容
本发明目的是提供一种从甘蔗叶中提取抗龋齿活性成分的方法，提取工艺利用高效的分离技术，所用填料大孔吸附树脂和聚酰胺均能循环再生。本发明解决了农作物废弃物甘蔗叶的循环利用，避免了具有药用价值甘蔗叶的浪费。本发明人通过对甘蔗叶的研究，发现甘蔗叶经本发明方法分离得到的提取物具有明显的抗龋齿作用，药效试验研究表明本发明甘蔗叶提取物对口腔中致龋齿变异链球菌和粘性放线菌均有明显的抑制作用。本发明中的甘蔗叶提取物，其制备方法如下1、制备方法(I)制备方法一取甘蔗叶，洗净、干燥、粉碎，经常规提取、浓缩，浓缩液首先以水或含水低级醇为洗脱剂上聚酰胺柱洗脱，再以无水或含水低级醇为洗脱剂，得醇洗脱液，洗脱液减压浓缩，干燥，得甘蔗叶提取物。制备方法说明所述的常规提取方法包括但不限于水浸提、水煎煮、醇浸提、醇回流提取、醇渗漉。所述的常规浓缩方法包括但不限于常压浓缩、减压浓缩、反渗透浓缩。所述的干燥包括但不限于喷雾干燥、冷冻干燥。优选的，当洗脱剂均采用含水低级醇时，作为第一次洗脱剂的低级醇的浓度低于作为第二次洗脱剂的低级醇的浓度。优选的，作为第二次洗脱剂的低级醇为乙醇；更优的，低级醇为乙醇；最佳的，所述的低级醇为乙醇且作为第二次洗脱剂的浓度为30 100%乙醇。(2)制备方法二取甘蔗叶，洗净、干燥、粉碎，经常规提取、浓缩，浓缩液首先以水或含水低级醇为洗脱剂上聚酰胺柱洗脱，再以无水或含水低级醇为洗脱剂，得醇洗脱液，将洗脱液浓缩；之后，浓缩液再上聚酰胺柱首先以水或含水低级醇为洗脱剂，再以无水或含水低级醇为洗脱齐 ，得醇洗脱液，将洗脱液浓缩，干燥，得甘蔗叶提取物。制备方法说明所述的常规提取方法包括但不限于水浸提、水煎煮、醇浸提、醇回流提取、醇渗漉。·所述的常规浓缩方法包括但不限于常压浓缩、减压浓缩、反渗透浓缩。所述的干燥包括但不限于喷雾干燥、冷冻干燥。优选的，对于上一次聚酰胺柱而言，当洗脱剂均采用含水低级醇时，作为第一次洗脱剂的低级醇的浓度低于作为第二次洗脱剂的低级醇的浓度。优选的，对于上一次聚酰胺柱而言，作为第二次洗脱剂的低级醇为乙醇；更优的，低级醇为乙醇；最佳的，所述的低级醇为乙醇且作为第二次洗脱剂的浓度为30 100%乙醇。(3)制备方法三取甘蔗叶，洗净、干燥、粉碎，经常规提取、浓缩，浓缩液首先以水或含水低级醇为洗脱剂上大孔吸附树脂柱洗脱，再以无水或含水低级醇为洗脱剂，得醇洗脱液，将洗脱液浓缩；之后，浓缩液再上聚酰胺柱首先以水或含水低级醇为洗脱剂，再以无水或含水低级醇为洗脱剂，得醇洗脱液，将洗脱液浓缩，干燥，得甘蔗叶提取物。制备方法说明所述的常规提取方法包括但不限于水浸提、水煎煮、醇浸提、醇回流提取、醇渗漉。所述的常规浓缩方法包括但不限于常压浓缩、减压浓缩、反渗透浓缩。所述的干燥包括但不限于喷雾干燥、冷冻干燥。优选的，大孔吸附树脂柱为AB-8。优选的，对于上大孔吸附树脂柱而言，当洗脱剂均采用含水低级醇时，作为第一次洗脱剂的低级醇的浓度低于作为第二次洗脱剂的低级醇的浓度。优选的，对于上大孔吸附树脂柱而言，作为第二次洗脱剂的低级醇为乙醇；更优的，低级醇为乙醇；最佳的，所述的低级醇为乙醇且作为第二次洗脱剂的浓度为10 70%乙醇。优选的，对于上聚酰胺柱而言，当洗脱剂均采用含水低级醇时，作为第一次洗脱剂的低级醇的浓度低于作为第二次洗脱剂的低级醇的浓度。优选的，对于上聚酰胺柱而言，作为第二次洗脱剂的低级醇为乙醇；更优的，低级醇为乙醇；最佳的，所述的低级醇为乙醇且作为第二次洗脱剂的浓度为30 100%乙醇。(4)制备方法四·取甘蔗叶，洗净、干燥、粉碎，经常规提取、浓缩，浓缩液首先以水或含水低级醇为洗脱剂上聚酰胺柱洗脱，再以无水或含水低级醇为洗脱剂，得醇洗脱液，将洗脱液浓缩；之后，浓缩液再上大孔吸附树脂柱首先以水或含水低级醇为洗脱剂，再以无水或含水低级醇为洗脱剂，得醇洗脱液，将洗脱液浓缩，干燥，得甘蔗叶提取物。
制备方法说明所述的常规提取方法包括但不限于水浸提、水煎煮、醇浸提、醇回流提取、醇渗漉。所述的常规浓缩方法包括但不限于常压浓缩、减压浓缩、反渗透浓缩。所述的干燥包括但不限于喷雾干燥、冷冻干燥。优选的，对于上聚酰胺柱而言，当洗脱剂均采用含水低级醇时，作为第一次洗脱剂的低级醇的浓度低于作为第二次洗脱剂的低级醇的浓度。优选的，对于上聚酰胺柱而言，作为第二次洗脱剂的低级醇为乙醇；更优的，低级醇为乙醇；最佳的，所述的低级醇为乙醇且作为第二次洗脱剂的浓度为30 100%乙醇。优选的，大孔吸附树脂柱为AB-8。 优选的，对于上大孔吸附树脂柱而言，当洗脱剂均采用含水低级醇时，作为第一次洗脱剂的低级醇的浓度低于作为第二次洗脱剂的低级醇的浓度。优选的，对于上大孔吸附树脂柱而言，作为第二次洗脱剂的低级醇为乙醇；更优的，低级醇为乙醇；最佳的，所述的低级醇为乙醇且作为第二次洗脱剂的浓度为10 70%乙醇。2、甘蔗叶提取物的一些制备方法实施例实施例1提取工艺取甘蔗叶，洗净、干燥、粉碎，用70%乙醇水溶液回流提取二次，料液比为1: 8 1: 10，提取温度80°C，每次提取2h，合并提取液，过滤，滤液浓缩至无醇味；浓缩液用石油醚脱脂，直至石油醚萃取部分无色，继续浓缩得甘蔗叶浸膏。分离工艺甘蔗叶浸膏加入适量蒸馏水稀释，上样于预处理好的处理好的聚酰胺柱，先用3倍柱体积的蒸馏水洗脱；第二步用10倍量柱体积30% -70%的乙醇洗脱；第三步用5倍量柱体积95%乙醇洗脱，得醇洗脱液，干燥，得到甘蔗叶提取物。实施例2提取工艺取甘蔗叶，洗净、干燥、粉碎，用70%乙醇水溶液回流提取二次，料液比为1: 8 1: 10，提取温度80°C，每次提取2h，合并提取液，过滤，滤液浓缩至无醇味；浓缩液用石油醚脱脂，直至石油醚萃取部分无色，继续浓缩得甘蔗叶浸膏。分离工艺甘蔗叶浸膏加入适量蒸馏水稀释，上样于预处理好的聚酰胺柱，先用3倍柱体积的水洗脱，再用10倍柱体积的70%乙醇洗脱，收集合并70%乙醇洗脱液，浓缩回收溶剂至1/10体积；70 %洗脱浓缩液上样于预处理好的聚酰胺柱，首先用3倍柱体积的蒸馏水洗脱；第二步用10倍量柱体积30% -70%的乙醇洗脱；第三步用5倍量柱体积95%乙醇洗脱，得醇洗脱液，干燥，得到甘蔗叶提取物。实施例3提取工艺取甘蔗叶，洗净、干燥、粉碎，用70%乙醇水溶液回流提取二次，料液比为1: 8 1: 10，提取温度80°C，每次提取2h，合并提取液，过滤，滤液浓缩至无醇味；浓缩液用石油醚脱脂，直至石油醚萃取部分无色，继续浓缩得甘蔗叶浸膏。分离工艺甘蔗叶浸膏加入适量蒸馏水稀释，上样于预处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，先用3倍柱体积的水洗脱，再用5倍柱体积10%乙醇洗脱，最后用3倍柱体积的70%乙醇洗脱，收集合并70%乙醇洗脱液，浓缩回收溶剂至1/10体积；甘蔗叶大孔吸附树脂70%洗脱浓缩液上样于预处理好的聚酰胺柱，首先用3倍柱体积的蒸馏水洗脱；第二步用10倍量柱体积30% -70%的乙醇洗脱；第三步用5倍量柱体积95%乙醇洗脱，得醇洗脱液，干燥，得到甘蔗叶提取物。实施例4提取工艺取甘蔗叶，洗净、干燥、粉碎，用70%乙醇水溶液回流提取二次，料液比为1: 8 1: 10，提取温度80°C，每次提取2h，合并提取液，过滤，滤液浓缩至无醇味；浓缩液用石油醚脱脂，直至石油醚萃取部分无色，继续浓缩得甘蔗叶浸膏。分离工艺甘蔗叶浸膏加入适量蒸馏水稀释，上样于预处理好的聚酰胺柱，首先用3倍柱体积的蒸馏水洗脱；第二步用10倍量柱体积30% -70 %的乙醇洗脱；第三步用5倍量柱体积95%乙醇洗脱，得醇洗脱液，浓缩回收溶剂至1/10体积；浓缩液上样于预处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，先用3倍柱体积的水洗脱，再用5倍柱体积10%乙醇洗脱，最后用3倍柱体积的70%乙醇洗脱，收集合并70%乙醇洗脱液，干燥，得到甘蔗叶提取物。 本发明中甘蔗叶提取物的不同制剂，其制备方法如下1、制备方法取上述制备方法制得的甘蔗叶提取物，按常规方法加入辅料，制成不同的制剂。2、甘蔗叶提取物不同制剂的一些剂型制备方法实施例实施例1甘蔗叶抗龋齿口含片制备将甘蔗叶提取物与赋形剂、矫味剂、粘合剂一起混匀，用造粒机造粒并烘干制成颗粒，再加入润滑剂，用压片机压片成形，片剂送入包衣机进行打光包衣，即得甘蔗叶抗龋齿含片。实施例2甘蔗叶抗龋齿口香糖制备将胶基质在45°C -60°C的温度下熔融，加入乳化剂、矫味剂、保湿剂一起充分搅拌混匀，待温度降到40°C时，再加入甘蔗叶提取物搅拌混匀，入模、压片、切片、成型，即得甘蔗叶抗龋齿口香糖。实施例3甘蔗叶抗龋齿口含滴丸制备将甘蔗叶提取物与赋形剂、矫味剂、粘合剂一起混匀，用造粒机造粒并烘干制成颗粒，干燥，加入熔融的基质中，搅匀，滴入冷凝剂中，取出滴丸，洗除冷凝剂，干燥，即得甘蔗叶抗龋齿口含滴丸。实施例4甘蔗叶抗龋齿口腔泡腾片制备将甘蔗叶提取物与填充剂、矫味剂、粘合剂一起混匀，用造粒机造粒并烘干制成颗粒，再加入润滑剂，用压片机压片成形，片剂送入包衣机进行打光包衣，即得甘蔗叶抗龋齿口腔泡腾片。实施例5甘蔗叶抗龋齿牙膏制备将甘蔗叶提取物与保湿剂、水、糖精、磷酸二氢钠、色素、增稠剂、摩擦剂、发泡剂和香精混合，搅拌均匀并脱气，制成膏体，分装即得甘蔗叶抗龋齿牙膏。药理实施例将变异链球菌和粘性放线菌接种于BHI培养液中，放置厌氧培养袋，于37°C恒温培养18h，在722分光光度计下比浊，用生理盐水调0D550nm值至1. 0，备用。用无菌脑心浸液培养基(BHI) 二倍稀释法将甘蔗叶提取物制备成16mg/ml，8mg/ml, 4mg/ml, 2mg/ml, lmg/ml, O. 5mg/ml, 0. 25mg/ml的药物稀释液。将已制备的变异链球菌和粘性放线菌细菌悬液与各组药液按1:1比例，各100 μ I分别接种于96孔板，同时设立溶剂对照组(DMSO)，用震荡器震荡Imin后，放入厌氧袋于80 % Ν2，20% C02，37°C恒温培养24H。以培养液中无细菌生长的最低稀释浓度为最低抑菌浓度(MIC)。选取给药浓度大于MIC的各孔，分别取20 μ I涂布于BHI固体培养基上，相同条件下培养24Η，观察菌落数少于5-6个的最低浓度为最低杀菌浓度(MBC)。实验结果表明，甘蔗叶提取物对变异链球菌和粘性放线菌最低抑制浓度(MIC)为lmg/ml ο最低杀菌浓度(MBC)为4mg/ml。 本实验研究证实，甘蔗叶中有多种有效抑菌成分，对口腔常见致龋齿菌均有抑制作用，甘蔗叶提取物对变异链球菌和粘性放线菌抑菌和杀菌效果与茶多酚效果相当。
权利要求
1.一种甘蔗叶提取物的制备及其作为预防和治疗龋齿的药物、功能性食品和化工用品的应用，其中所述的甘蔗叶提取物是按以下方法制备的将甘蔗叶粉碎，以水或低级醇为溶齐 ，提取、浓缩，经大孔树脂柱和聚酸胺柱分离，收集洗脱液，干燥后得到甘蔗叶提取物。该提取物中含有多糖2-10%，总黄酮1-2%。
2.按权利要求1所述的甘蔗叶提取物，其特征在于，所述的上聚酰胺柱的步骤为(I) 以水或含水低级醇为洗脱剂上柱洗脱；(2)以无水或含水低级醇为洗脱剂，得醇洗脱液。
3.按权利要求1所述的甘蔗叶提取物，其特征在于，分离步骤还包括在提取液上聚酰胺柱之前上大孔吸附树脂柱。
4.按权利要求1所述的甘蔗叶提取物，其特征在于，分离步骤还包括在提取液上聚酰胺柱之后再上大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱。
5.按权利要求3或4所述的甘蔗叶提取物，其特征在于，上大孔吸附树脂的步骤为(I)以水或含水低级醇为洗脱剂上柱洗脱；(2)以无水或含水低级醇为洗脱剂，得醇洗脱液。
6.按权利要求1所述的甘蔗叶提取物，其特征在于，当洗脱剂均采用含水低级醇时，作为第一次洗脱剂的低级醇的浓度低于作为第二次洗脱剂的低级醇的浓度。
7.按权利要求1所述的甘蔗叶提取物，其特征在于，作为第二次洗脱剂的低级醇为乙醇。
8.按权利要求7所述的甘蔗叶提取物，其特征在于，所述的乙醇浓度为30 100%。
9.按权利要求5所述的甘蔗叶提取物，其特征在于，所述的大孔吸附树脂为ΑΒ-8。
10.按权利要求5所述的甘蔗叶提取物，其特征在于，当洗脱剂均采用含水低级醇时， 作为第一次洗脱剂的低级醇的浓度低于作为第二次洗脱剂的低级醇的浓度。
11.按权利要求5所述的甘蔗叶提取物，其特征在于，作为第二次洗脱剂的低级醇为乙醇。
12.按权利要求11所述的甘蔗叶提取物，其特征在于，所述的乙醇浓度为10 100%。
全文摘要
本发明涉及一种用于防治龋齿的甘蔗叶提取物及其制备方法、不同制剂的制备方法和应用，其中包括用于预防和治疗龋齿的甘蔗叶提取物，甘蔗叶提取物的提取工艺，甘蔗叶提取物制备成防治龋齿产品(包括药物、功能性食品、化工产品)及其应用。本发明以农作物废弃物甘蔗叶为原料，无毒副作用，成本低，工艺完整，疗效确切，适宜推广应用。
文档编号A23L1/29GK103007090SQ20131001478
公开日2013年4月3日 申请日期2013年1月16日 优先权日2013年1月16日
发明者侯小涛, 邓家刚, 廖泽勇, 黄慧学 申请人:广西中医药大学