专利名称：一种从高温花生粕中直接提取凝血酶抑制肽的方法
技术领域：
一种从高温花生柏中直接提取凝血酶抑制肽的方法，属于农产品精深加工及其副产物综合利用的技术领域。
背景技术：
花生是全球最重要的四大油料作物之一，中国是世界上重要的花生生产大国，产量占世界总产量的40%以上。目前，全国花生的年产量基本在1400-1500万吨左右，总产、单产和出口量一直位居全国油料作物之首。然而我国花生的深加工水平与西方发达国家相比还十分落后。在我国，花生约有50%以上用于提取食用油，花生柏是花生提油的副产物。根据提油工艺的不同，花生柏又分为热压榨花生柏、溶剂浸提花生柏和冷榨花生柏。由于人们对浓香花生油的嗜好性消费，我国花生柏大多为热压榨花生柏，其中花生蛋白变性程度严重，从中直接提取花生蛋白得率非常低，故国内花生榨油后剩余的花生柏大多用作动物饲料，产品附加值低，资源浪费严重。已有相当多的研究关注了高温花生柏中蛋白质的利用。高云中等采用碱提酸沉法从高温花生柏中提取分离蛋白，蛋白提取率仅为45.27% (食品与发酵工业，2009, 35(4): 103-105)。刘玉兰等以高温花生柏为原料，利用醇洗法制取花生浓缩蛋白，对醇洗花生浓缩蛋白进行碱性条件下的水浴加热改性(中国油脂，2011, 36(9):27-30)。CN101558817A也报道了采用乙醇浸出从花生柏中生产花生浓缩蛋白的方法。为提取花生肽，梁蓉等先从高温花生柏提取花生蛋白，再以内肽酶和端解酶复合酶解得到花生肽(中国油脂，2008, 33(5):24-28)。CN101965898A以花生柏为原料，加水和乙醇混合后升温回流、过滤、脂肪酶脱脂、蛋白酶酶解、灭酶、脱色、膜分离，将得到的滤液经干燥后得到花生肽。从目前已报道的生产花生肽的相关技术来看，大多是采取先提取蛋白，再利用蛋白酶酶解的工艺，整个工艺路线长，生产成本高。而且因为花生蛋白的提取率低，再由花生蛋白制备花生肽的得率也肯定不高。目前，心脑血管病是我国发病率、致残率和死亡率最高的疾病，每12s就有一人因中风或心梗而倒下。通常使用的抗凝血物质一肝素、口服香豆素、链激酶和尿激酶等会导致血小板减少、出血等副作用。因此，研发有效的、副作用小的抗凝血保健食品引起了越来越多地关注。已有报道称从蛋清蛋白(CN102229669A)和菜籽蛋白中可提取出抑制凝血酶活性的肽。而利用高温花生柏直接生产具有抑制凝血酶活性的花生肽目前未见报道。
发明内容
为解决现有工艺的不足，本发明目的是提供一种生产工艺流程短、能够直接从高温花生柏中提取获得凝血酶抑制肽的方法。本发明的技术方案是:将高温花生柏加水调酸后进行浸提，分离除去大部分非蛋白成分后，再进行碱溶并加入蛋白酶进行酶解反应。酶解结束后进行灭酶，离心，得到水解液相和残渣，将水解液相进行喷雾干燥后获得花生肽。1.工艺路线 如图1所示。
2.工艺条件
(I)花生柏粉碎:用粉碎机将花生柏粉碎，平均粒径控制在150Mm以下。(2)酸浸-离心:将粉碎后的花生柏分散在3-6倍重量的水中，用HCl调节体系pH范围在3.0-5.0，温度为40-45°C，酸浸时间为20_40min。酸浸的目的是让可溶性非蛋白成分溶出，蛋白质在等电点附近沉淀。酸浸结束后进行离心分离，得到水相和花生湿渣(花生浓缩蛋白)。(3)碱溶-酶解:将花生湿渣分散在4-8倍重量的水中，用NaOH调节体系pH范围在8.0-10.0，温度为50-60°C，碱溶时间为20-40min。碱溶结束后向体系中加入Protex 6L碱性蛋白酶开始酶解，加酶量1.5-3.0% (w/w)，酶解时间3-6h。(4)灭酶-离心:酶解结束后进行灭酶，灭酶条件为85-90°C，10-20min。灭酶后取样采用茚三酮法测定蛋白质的水解度。灭酶后对体系进行离心分离得到水解液相和残渣。(5)喷雾干燥:将水解液相进行喷雾干燥，进风温度120-130°c,出风温度70-80 0C，得到花生肽粉末。3.分析方法
粗蛋白测定:凯氏定氮法(NX5.46)；
物料粒径分布:采用激光粒径分析仪进行测定；
蛋白质水解度测定:茚三酮法；
花生肽分子量测定:分子排阻高效液相色谱法；
花生肽得率:花生肽中含氮量/原料中含氮量X 100% ；
花生肽纯度:花生肽中蛋白质含量/花生肽重量X 100% ；
凝血酶抑制活性测定:比色法。本发明的有益效果:省去制备花生蛋白的过程，直接酶解花生柏提取花生肽，工艺路线简短，生产成本低；得到的花生肽溶解性好，相对分子质量小于1000的小肽组分占85%以上，具有抑制凝血酶的活性。本发明应用于花生柏加工，可以得到具有保健功能的食品配料，显著提高花生产品的附加值。
图1从高温花生柏中直接提取凝血酶抑制肽的工艺流程示意图。图2花生肽抑制凝血酶活性的能力。图3花生肽抑制凝血酶活性的能力。
具体实施方式
实施例1
将高温花生柏粉碎后分散在4倍重量的水中，用HCl调节体系pH范围在4.5，温度保持在40°C，浸提30min。浸提结束后进行离心(3000rpm，15min)，得到水相和花生湿渣。弃水相，将花生湿渣复溶在5倍重量的水中，调节体系pH至9.0，温度50°C，碱溶时间30min。碱溶结束后向体系中加入2.0% (w/w)的Protex 6L碱性蛋白酶开始酶解，温度保持在50°C，3h后将体系温度升至90°C进行灭酶(lOmin)。灭酶结束后进行离心分离(3000rpm，15min)得到水解液相和残渣。将水解液相进行喷雾干燥后得到花生肽粉末。花生肽得率72.4%，花生肽纯度73.6%，蛋白质水解度23.5%，花生肽抑制凝血酶活性的半抑制率(IC5tl)为40.9mg/mL (图2)。实施例2
将高温花生柏粉碎后分散在5倍重量的水中，用HCl调节体系pH范围在4.3，温度保持在40°C，浸提20min。浸提结束后进行离心(3000rpm，15min)，得到水相和花生湿渣。弃水相，将花生湿渣复溶在6倍重量的水中，调节体系pH至9.5，温度55°C，碱溶时间30min。碱溶结束后向体系中加入2.5% (w/w)的Protex 6L碱性蛋白酶开始酶解，温度保持在55°C，5h后将体系温度升至85°C进行灭酶(15min)。灭酶结束后进行离心分离(3000rpm，15min)得到水解液相和残渣。将水解液相进行喷雾干燥后得到花生肽粉末。花生肽得率70.5%，花生肽纯度75.8%，蛋白质水解度26.2%，花生肽抑制凝血酶活性的半抑制率(IC5tl)为24.9 mg/mL (图3)。
权利要求
1.一种从高温花生柏中直接提取凝血酶抑制肽的方法，其特征是将高温花生柏加水调酸后进行浸提，离心分离除去大部分非蛋白成分后，再将湿渣进行碱溶并加入蛋白酶进行酶解反应；酶解结束后进行灭酶，离心，得到水解液相和残渣，将水解液相进行喷雾干燥后获得花生肽。
2.根据权利要求1所述的工艺，其特征是将粉碎后花生浆分散在3-6倍重量的水中，用HCl调节体系pH范围在3.0-5.0，温度为40-45°C，酸浸时间为20_40min。
3.根据权利要求1所述的工艺，其特征是酸浸结束后对体系进行离心分离，离心条件:3000rpm,10_30min。
4.根据权利要求1所述的工艺，其特征是将湿渣重新分散在4-8倍重量的水中，用NaOH调节体系pH范围在8.0-10.0，温度为50_60°C，碱溶时间为20_40min。
5.根据权利要求1所述的工艺，其特征是酶解反应条件，采用Protex6L碱性蛋白酶进行酶解，加酶量1.5-3.0% (w/w)，酶解温度50-60°C，酶解时间3_6h。
6.根据权利要求1所述的工艺，其特征是酶解后进行灭酶，灭酶条件:温度85-90°C，时间 10-20min。
7.根据权利要求1所述的工艺，其特征是灭酶后对体系进行离心分离，离心条件:3000rpm,10_30min。
8.根据权利要求1所述的工艺，其特征是将离心得到的水解液相进行喷雾干燥，进风温度120-130°C，出风温度70-80°C，得到花生肽粉末。
全文摘要
一种从高温花生粕中直接提取凝血酶抑制肽的方法，属于农产品精深加工及其副产物综合利用的技术领域。它主要解决现有工艺生产花生肽路线长、成本高、花生肽得率低等技术问题。本发明将高温花生粕加水调酸后进行浸提，分离除去大部分非蛋白成分后，再将湿渣进行碱溶并加入蛋白酶进行酶解反应。酶解结束后进行灭酶，离心，得到水解液相和残渣，将水解液相进行喷雾干燥后获得花生肽。采用本发明提取花生肽，省去了制备花生蛋白的过程，通过直接酶解花生粕提取花生肽，生产成本低，得率高。提取得到的花生肽纯度高，溶解性好，具有抑制凝血酶的活性，可作为抗血栓食品的配料。
文档编号A23J1/14GK103098977SQ201310077210
公开日2013年5月15日 申请日期2013年3月12日 优先权日2013年3月12日
发明者章绍兵, 吕燕红, 陆启玉, 王子伟 申请人:河南工业大学