一种抗氧化型鱿鱼墨发酵液的制备方法
【专利摘要】一种抗氧化型鱿鱼墨发酵液的制备方法，其特征在于：步骤为：1）将鱿鱼墨与蒸馏水按照质量体积比1:90～110(w/v)比例混合，加入MgSO4使它质量浓度为0.04～0.06%，加入KH2PO4使它质量浓度为0.09～0.11%，加入葡萄糖使它质量浓度为1.5～2.5%，调节混合液pH至7.0～7.4，100mL锥形瓶装液量35～45mL，111～131℃加热灭菌25～35min得到鱿鱼墨发酵培养基；2）将活化好的枯草芽孢杆菌的菌悬液按照体积浓度1.8～2.2%接入灭好菌的鱿鱼墨发酵培养基中，摇床转速110～180r/min，发酵温度35～40℃，发酵时间48～55h，离心或过滤，即得抗氧化型鱿鱼墨发酵液。本发明工艺简单合理、易操作，制得的鱿鱼墨发酵液具有较好的抗氧化性，并对发酵液的分子量分布进行初步分析，为抗氧化型鱿鱼墨发酵液的应用奠定基础。
【专利说明】一种抗氧化型鱿鱼墨发酵液的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种抗氧化型鱿鱼墨发酵液的制备方法。
【背景技术】
[0002] 鱿鱼墨约占鱿鱼体重的1. 3%，是鱿鱼加工的主要副产物之一（张井.北太平洋鱿 鱼内脏酶解液中重金属镉的脱除研究[D].中国海洋大学硕士学位论文，2009.)，其主要成 分是真黑素与蛋白质结合的黑素蛋白、络氨酸的聚合物、水和脂肪等。鱿鱼墨具有抑菌、抗 肿瘤等多种生物活性，但是鱿鱼墨黑色素不溶于水，且在一般溶剂中的溶解性差，鱿鱼墨黑 色素中的活性成分多为高聚合度的大分子化合物，也不利于机体快速地吸收和利用。因此， 采取有效方式降解鱿鱼墨中大分子为活性小分子，同时提高其水溶性和生物活性将拓宽鱿 鱼墨的应用范围。微生物发酵法是一种安全性高的食物转化方法，通过微生物的发酵作用， 发酵产物不仅风味提高，而且更能获得多种新的生物活性。鱿鱼墨含有蛋白质和糖类等物 质，可以提供微生物发酵所需的氮源和碳源营养，只要选择合适的微生物就可以转化鱿鱼 墨生成一些新的活性物质。与鱿鱼墨黑色素的理化性质及黑色素结构鉴定研究相比较，应 用微生物发酵法制备鱿鱼墨活性物质的研究还少见报道。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是提供一种抗氧化型鱿鱼墨发酵液的制备方法，采用 微生物发酵法进行制备，可有效提高鱿鱼墨的抗氧化性，具有工艺简单合理、易操作的特 点。
[0004] 本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种抗氧化型鱿鱼墨发酵液的制 备方法，其特征在于步骤为：
[0005] 1)将鱿鱼墨与蒸馏水按照质量体积比1:90?110 (w/v)比例混合，加入MgS04使它 质量浓度为〇. 04?0. 06%，加入ΚΗ2Ρ04使它质量浓度为0. 09?0. 11%，加入葡萄糖使它质 量浓度为1. 5?2. 5%，调节混合液pH至7. 0?7. 4,100mL锥形瓶装液量35?45mL，111? 131°C加热灭菌25?35min得到鱿鱼墨发酵培养基；
[0006] 2)将活化好的枯草芽孢杆菌的菌悬液按照体积浓度1. 8?2. 2%接入灭好菌的鱿 鱼墨发酵培养基中，摇床转速110?180r/min，发酵温度35?40°C，发酵时间48?55h，离 心或过滤，即得抗氧化型鱿鱼墨发酵液。
[0007] 作为优选，所述步骤1)中的鱿鱼墨与蒸馏水按照质量体积比1:100 (w/v)，MgS04& 度为0. 05%，ΚΗ2Ρ04浓度为0. 1%，葡萄糖浓度为2. 0%，所述混合液pH为7. 2,100mL锥形瓶装 液量40mL。
[0008] 最后，所述步骤2)中的枯草芽孢杆菌的菌悬液接入的体积浓度优选为2. 0%，摇床 转速优选为121r/min，发酵温度优选为37°C，发酵时间优选为49. 2h。
[0009] 与现有技术相比，本发明的优点在于：以从食物中分离的枯草芽孢杆菌为出发菌， 以鱿鱼墨为基本发酵底物，通过发酵作用来提高鱿鱼墨水溶性组分的抗氧化能力，同时发 酵工艺条件合理。本发明工艺简单合理、易操作，制得的鱿鱼墨发酵液具有较好的抗氧化 性，并对发酵液的分子量分布进行初步分析，为抗氧化型鱿鱼墨发酵液的应用奠定基础。
【专利附图】
【附图说明】
[0010] 图1是鱿鱼墨发酵液的DPPH自由基清除能力图；
[0011] 图2是枯草芽孢杆菌接种量对鱿鱼墨发酵液的DPPH自由基清除率影响曲线图；
[0012] 图3是葡萄糖添加量对鱿鱼墨发酵液的DPPH自由基清除率影响曲线图；
[0013] 图4是装液量对鱿鱼墨发酵液的DPPH自由基清除率影响曲线图；
[0014] 图5是发酵时间对鱿鱼墨发酵液的DPPH自由基清除率影响曲线图；
[0015] 图6是摇床转速对鱿鱼墨发酵液的DPPH自由基清除率影响曲线图；
[0016] 图7是鱿鱼墨发酵液的分子量分布图，图A-分子量标准物质，B-未发酵的鱿鱼 墨培养基，C一发酵的鱿鱼墨培养基；
[0017] 图8是本发明的制备方法的工艺流程图。
【具体实施方式】
[0018] 以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
[0019] 一种抗氧化型鱿鱼墨发酵液的制备方法，步骤为：将鱿鱼墨与蒸馏水按照 1:100 (w/v)比例混合，加入MgS04使它质量浓度为0. 05%，加入ΚΗ2Ρ04使它质量浓度为 0. 1%，加入葡萄糖使它质量浓度为2. 0%，调节混合液pH至7. 2,100mL锥形瓶装液量40mL， 121°C加热灭菌30min得到鱿鱼墨发酵培养基。将活化好的枯草芽孢杆菌的菌悬液按照 2. 0% (V/V)接入灭好菌的鱿鱼墨发酵培养基中，摇床转速121r/min，发酵温度37°C，发酵时 间49. 2h，离心或过滤，得抗氧化型鱿鱼墨发酵液。
[0020] 下面通过实验数据对本发明做进一步说明：
[0021] 2. 1鱿鱼墨发酵液的抗氧化性
[0022] 采用DPPH法检测鱿鱼墨枯草芽孢杆菌发酵液的抗氧化活性，具体做法如下：取 100 μ L鱿鱼墨发酵液稀释至1. OmL，然后加入1. 0mL95%乙醇和250 μ L的DPPH(0. 02%乙醇 溶液)，混合均勻，室温下暗处放置60min，用95%乙醇调零测定517nm处吸光值（AffS)，对照 用等体积去离子水代替样品（A WM)，样品空白用等体积乙醇代替0. 02%DPPH (A#sse)，DPPH 自由基清除率计算公式如下：DPPH清除率（%) = [A对照-(A样品-A样品空白）]X100/A对照
[0023] 鱿鱼墨发酵培养基在摇床转速160r/min，发酵温度37°C，发酵72h后所得发酵液 的DPPH自由基清除率见图1，其中鱿鱼墨自身及未发酵鱿鱼墨的DPPH自由基清除率作为对 照。
[0024] 从图1可以看出鱿鱼墨自身具有一定的DPPH自由基清除能力（清除率66. 48%)，未 发酵的鱿鱼墨对DPPH自由基清除能力最低，只有24. 91%，而鱿鱼墨经枯草芽孢杆菌发酵后 所得发酵液对DPPH自由基的清除率升高至74. 30%，说明枯草芽孢杆菌的发酵作用有助于 提高鱿鱼墨的抗氧化性。
[0025] 2. 2鱿鱼墨发酵条件优化
[0026] 2. 2. 1鱿鱼墨发酵影响因素
[0027] 在固定发酵温度37°C条件下，考察菌种接种量（0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5%，V/V)，鱿 鱼墨培养基中葡萄糖添加量（0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、3. 0%，W/V)，每lOOmL锥形瓶中发酵液装液 量（40、50、60、70111171001^)，发酵时间（24、48、72、9611)，摇床转速（120、160、2001'/111丨11)对 鱿鱼墨发酵液的DPPH自由基清除率影响，结果分别见图2?6。
[0028] 由图2?6鱿鱼墨发酵液的DPPH自由基清除率结果来看，接种量在0. 5?2. 5% 时，鱿鱼墨发酵液清除DPPH自由基能力相差不多，清除率均大于95% (见图2)。鱿鱼墨培 养基中葡萄糖添加量为0. 5?3. 0%时，所得发酵液的DPPH自由基清除率在92?99%之间 (见图3)。而发酵液装液量、发酵时间和摇床转速对鱿鱼墨发酵液的DPPH自由基清除率影 响程度大，适宜装液量有利于提高发酵液的抗氧化能力，如：40mL/100mL和70mL/100mL装 液量下所得发酵液的抗氧化能力较强(见图4)，其中发酵时间72h所得发酵液的DPPH自由 基清除率达到76. 62%，远远大于其它发酵时间清除率(见图5)，摇床转速160r/min时发酵 液对DPPH自由基的清除率分别高于120r/min和200r/min下发酵液的自由基清除率(见图 6)。
[0029] 2. 2. 2发酵条件优化提高鱿鱼墨发酵液的抗氧化性
[0030] 选择对鱿鱼墨发酵液抗氧化有明显影响因素：装液量、发酵时间和摇床转速进 行响应面优化实验，其它发酵条件固定(菌种接种量2. 0%，鱿鱼墨培养基中葡萄糖添加量 2. 0%，发酵温度37°C )，确定最佳发酵条件来提高鱿鱼墨发酵液的抗氧化性，响应面实验安 排和结果见表1。
[0031] 表1响应面分析实验方案及实验结果
【权利要求】
1. 一种抗氧化型鱿鱼墨发酵液的制备方法，其特征在于步骤为： 1) 将鱿鱼墨与蒸馏水按照质量体积比1:90?110 (w/v)比例混合，加入MgS04使它质 量浓度为〇. 04?0. 06%，加入ΚΗ2Ρ04使它质量浓度为0. 09?0. 11%，加入葡萄糖使它质量 浓度为1. 5?2. 5%，调节混合液pH至7. 0?7. 4,100mL锥形瓶装液量35?45mL，111? 131°C加热灭菌25?35min得到鱿鱼墨发酵培养基； 2) 将活化好的枯草芽孢杆菌的菌悬液按照体积浓度1. 8?2. 2%接入灭好菌的鱿鱼墨 发酵培养基中，摇床转速110?180r/min，发酵温度35?40°C，发酵时间48?55h，离心或 过滤，即得抗氧化型鱿鱼墨发酵液。
2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤1)中的鱿鱼墨与蒸馏水按照 质量体积比1:100 (w/v)，MgS04浓度为0. 05%，ΚΗ2Ρ04浓度为0. 1%，葡萄糖浓度为2. 0%，所述 混合液pH为7. 2,100mL锥形瓶装液量40mL。
3. 根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于所述步骤2)中的枯草芽孢杆菌的 菌悬液接入的体积浓度为2. 0%，摇床转速121r/min，发酵温度37°C，发酵时间49. 2h。
【文档编号】C12P1/04GK104109692SQ201310132794
【公开日】2014年10月22日 申请日期:2013年4月16日 优先权日:2013年4月16日
【发明者】宋茹, 韦荣编 申请人:浙江海洋学院