Nos终止子的lamp检测引物组、试剂盒及检测方法
【专利摘要】本发明涉及NOS终止子的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法，其中，LAMP检测引物组包括下列引物：外引物F3：CTCGATCTATCTATTGGCA；外引物B3：GCGCTTATTATTGATTACTTACG；内引物FIP：TCTAGCTTATCGTATTACTTCAGTTGATTGATTCCAGTTGCCG；内引物BIP：AGCTTGACGTTTTATTTGTGTAGGCGTTATTATTGATTATTAGCGGGT。本发明提供的LAMP检测引物组对NOS终止子具有良好的特异性。
【专利说明】NOS终止子的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法
【【技术领域】】
[0001]本发明属于食品安全领域，涉及环介导等温扩增技术，具体涉及含有NOS终止子的转基因作物的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法。
【【背景技术】】
[0002]转基因作物是指利用重组DNA技术将外源基因整合于受体植物基因组、改变其遗传组成后产生的植物及其后代，也称为遗传修饰生物体(Genetically modifiedorganisms, GMOs)。自1983年首例转基因植物问世以来,全球转基因作物的种植面积和销售收入均以倍数增长。但从严肃的科学意义上说，转基因农产品的生物安全性目前尚无确定的结论。虽然我国规定自2002年3月20日起，所有转基因农作物及其副产品都应加以标志，但是在转基因农作物不断增多的形势下，仍然很少见到加注转基因字样的农产品。因此开发简便的转基因大豆检测技术并对相关产品进行检测势在必行。
[0003]目前普遍应用基于DNA的检测技术对转基因作物进行检测。该类技术主要包括传统定性PCR和定量PCR。这些检测技术都需要特殊的DNA扩增仪(PCR仪)才能够完成。而环介导的等温基因扩增 技术(Loop-Media tedLsothcrmal AmpliFication, LAMP)依赖于能够识别靶序列上6个特异区域的引物和一种具有链置换特性的DNA聚合酶，利用链置换DNA聚合酶在恒温条件保温几十分钟，完成核酸扩增反应；可以在I小时之内，将靶基因DNA片段扩增109-1010倍，并且只要用肉眼观察白色混浊沉淀，就能鉴定是否扩增，不需要电泳检测过程。
[0004]查阅转基因大豆品系M0N89788相关文献，了解NOS终止子序列信息，部分序列信息具体为:
[0005]TCTCGTTCAAACATTTGGCAATAAAGTTTCTTAAGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGCGATGATTATCATATAATTTCTGTTGAATTACGTTAAGCATGTA ATAATTAACATGTAATGCATGACGTTATTTATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATACATTTAATACGCGATAGAAAACAAAATATAGCGCGCAAACTAGGATAAATTATCGCGCGCGGTGTCATCTGTCGAGGGGGGGCCCGGTAC。
【
【发明内容】
】
[0006]本发明要解决的第一个技术问题是提供一种NOS终止子的LAMP检测引物组，其对NOS终止子具有良好的特异性。
[0007]本发明要解决的第二个技术问题是提供一种NOS终止子的LAMP检测试剂盒，其便于对NOS终止子进行LAMP检测。
[0008]本发明要解决的第三个技术问题是提供一种NOS终止子的LAMP检测方法，其具有灵敏较高、特异性良好、检测快速可靠、操作简单的特点。
[0009]上述第一个技术问题通过以下技术方案实现:
[0010]一种NOS终止子的LAMP检测引物组，其特征在于，包括下列引物:
[0011]外引物F3:CTCGATCTATCTATTGGCA ；[0012]外引物B3:GCGCTTATTATTGATTACTTACG ；
[0013]内引物FIP:
[0014]TCTAGCTTATCGTATTACTTCAGTTGATTGATTCCAGTTGCCG ；
[0015]内引物BIP:
[0016]AGCTTGACGTTTTATTTGTGTAGGCGTTATTATTGATTATTAGCGGGT。
[0017]通过实验证明，本发明提供的LAMP检测引物组对白云豆、玉米、花生、豌豆、燕麦、四季豆、大豆、小麦、于扁豆、番茄、核桃、大杏仁、绿豆、苦荞麦、荞麦、土豆、草虾、芹菜、水稻、猪、西柚、胡萝卜、鹅、黄牛、含有NOS终止子的GTS40-3-2、M0N89788、EVENT98140、BT176、M0N810、A5547-127的DNA均无非特异扩增。因此，本发明提供的LAMP检测引物组对NOS终止子具有良好的特异性。
[0018]上述第二个技术问题通过以下技术方案实现:
[0019]NOS终止子的LAMP检测试剂盒，其特征在于，包括以下成分:
[0020]
【权利要求】
1.NOS终止子的LAMP检测引物组，其特征在于，包括下列引物:
外引物 F3:CTCGATCTATCTATTGGCA ；
外引物 B3:GCGCTTATTATTGATTACTTACG ； 内引物FIP:
TCTAGCTTATCGTATTACTTCAGTTGATTGATTCCAGTTGCCG ； 内引物BIP:
AGCTTGACGTTTTATTTGTGTAGGCGTTATTATTGATTATTAGCGGGTo
2.NOS终止子的LAMP检测试剂盒，其特征在于，包括以下成分:
3.根据权利要求2所述的NOS终止子的LAMP检测试剂盒，其特征在于，还包括显色剂。
4.根据权利要求3所述的NOS终止子的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述显色剂为荧光染料SYBR Green I。
5.根据权利要求2所述的NOS终止子的LAMP检测试剂盒，其特征在于，还包括对照物:阳性对照为纯度为5%、浓度为100ng/ul的含有NOS终止子的转基因玉米M0N863的DNA溶液，阴性对照为ddH20。
6.NOS终止子的LAMP检测方法，其特征在于，包括以下步骤: (101)对待检样品提取待检模板DNA； (102)进行环介导等温基因扩增反应: 配置LAMP反应体系,每25LLL体积的LAMP反应体系具体为:
【文档编号】C12N15/11GK103436595SQ201310157326
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2013年4月29日 优先权日:2013年4月29日
【发明者】冯家望, 邝筱珊, 胡松楠, 王小玉, 唐食明, 钱振杰, 成晓维 申请人:冯家望, 邝筱珊, 胡松楠