专利名称：用于海洋长孢葡萄穗霉生产纤溶活性化合物的培养基的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明涉及用于海洋长孢葡萄穗霉生产纤溶活性化合物的培养基及其制备方法。
背景技术：
目前大部分天然药物源于陆地，而海洋则是目前开发极少的巨大生物资源宝库。最近几年从海洋生物特别是无脊椎动物、微生物中分离出了大量新型生物活性物质，统计表明2003年报道了 656种新化合物，2004年报道了 716种新化合物。其中部分处于1-1II期临床实验。海洋微生物，包括海洋放线菌、真菌等是新活性物质的重要来源。相比陆生生物，海洋中发现的新型化合物具有较高几率的生物活性。例如，在国际肿瘤协会对于临床前细胞毒性筛选中，检测到几乎1%的待测海洋活性样品有抗肿瘤活性的潜在能力，而相比陆生活性样品，只有0.1%的待测样品有活性。纤溶活性化合物FGFCl是上海海洋大学从海洋真菌长孢葡萄穗霉FG216 (Stachybotrys longispora FG216)中分离出来的一种具有纤溶活性的新型化合物；很有必要对其进行创新药物的深入研究。然而纤溶活性化合物FGFCl在原始菌株中含量较低，制约了对其进行进一步的体内外活性评价及构效研究，因此通过规模化发酵及代谢调控研究，进行高效发酵生产是必须加以解决的首要问题。而要进行大规模高效发酵生产和代谢调控研究，继而进行后续的医药学研究，首要解决的就是产量问题，所以开发一种促进海洋长孢葡萄穗霉FG216生产纤溶活性化合物FGFCl的培养基就成为后续研究的一个非常重要的前提条件。
发明内容
本发明的目的在·于提供用于海洋长孢葡萄穗霉生产纤溶活性化合物的培养基及其制备方法。在本发明的第一方面，提供一种海洋长孢葡萄穗霉的培养基，所述培养基包括以下组分:葡萄糖30-170重量份；硝酸钠2-5重量份；三水磷酸氢二钾0.01-0.2重量份；七水硫酸镁0.2-0.9重量份；氯化钾0.4-0.8重量份；酵母提取物0.5-1.5重量份；六水氯化钴0.0015-0.005重量份；七水硫酸亚铁0.01-0.03重量份；无水氯化钙0.004-0.01重量份；和L-鸟氨酸盐酸盐8-20重量份。
在一个优选例中，所述培养基包括以下组分:葡萄糖35-155重量份；硝酸钠2.5-4重量份；三水磷酸氢二钾0.01-0.15重量份；七水硫酸镁0.3-0.8重量份；氯化钾0.5-0.8重量份；酵母提取物0.60-1.25重量份；六水氯化钴0.002-0.004重量份；七水硫酸亚铁0.01-0.025重量份；无水氯化钙0.005-0.009重量份；和L-鸟氨酸盐酸盐10-20重量份。在另一优选例中，所述培养基包括以下组分:葡萄糖125重量份；硝酸钠3.3重量份；三水磷酸氢 二钾0.07重量份；七水硫酸镁0.4重量份；氯化钾0.625重量份；酵母提取物0.7重量份；六水氯化钴0.003125重量份；七水硫酸亚铁0.01875重量份；无水氯化钙0.0065重量份；和L-鸟氨酸盐酸盐13-15重量份；其中，各组分在培养基中的含量按照重量份可在±10%(更佳地±5%)范围内浮动。在另一优选例中，所述培养基中，各组分配制于1000重量(或体积)份水(较佳地，所述的水是去离子水)中；和/或所述培养基的PH值5.5-6.5。在本发明的另一方面，提供所述的培养基的用途，用于培养海洋长孢葡萄穗霉，生产纤溶活性化合物FGFCl。在本发明的另一方面，提供一种制备海洋长孢葡萄穗霉的培养基的方法，所述方法包括:将前面任一所述的培养基的各组分在水中混匀，调节至pH值5.5-6.5。在另一优选例中，所述的方法还包括:将混匀及调节pH值后的培养基在121°C，灭菌 15_20min。在本发明的另一方面，提供一种利用海洋长孢葡萄穗霉生产纤溶活性化合物FGFCl的方法，所述方法包括:利用前面任一所述的培养基培养海洋长孢葡萄穗霉，从而生产纤溶活性化合物FGFCl。在一个优选例中，将海洋长孢葡萄穗霉按照体积以5-10%的接种量接入前面任一所述的培养基，发酵培养8-13天，获得发酵液，其中含有纤溶活性化合物FGFCl。在本发明的另一方面，提供一种用于培养海洋长孢葡萄穗霉的试剂盒，所述试剂盒中包括:前面任一所述的培养基。
本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。
具体实施例方式本发明人经过长期而深入的研究，研究开发了一种新的适合于培养海洋长孢葡萄穗霉(较佳地为FG216)使之高效生产纤溶活性化合物FGFCl的培养基配方。本发明的培养基，适合于海洋长孢葡萄穗霉的生长，且可大大地提高纤溶活性化合物FGFCl的产量。如本文所用，所述的“含有”，“具有”或“包括”包括了“包含”、“主要由……构成”、“基本上由……构成”、和“由……构成”;“主要由……构成”、“基本上由……构成”和“由……构成”属于“含有”、“具有”或“包括”的下位概念。如本文所用，“重量份”或“重量份数”可互换使用，所述的重量份可以是任何一个固定的以毫克、克数或千克数表示重量(如lmg、lg、2g、5g、或Ikg等)。例如,一个由I重量份组分a和9重量份组分b构成的组合物，可以是I克组分a + 9克组分b，也可以是10克组分a+ 90克组分b等构成的组合物。在所述组合物，某一组分的百分比含量=(该组分的重量份数/所有组分的重量份数之和)X 100%。因此，由I重量份组分a和9重量份组分b构成的组合物中，组分a的含量为10%，组分b为90%。术语“本发明的海洋长孢葡萄穗霉的培养基”指含有葡萄糖，硝酸钠，三水磷酸氢二钾，七水硫酸镁，氯化钾，酵母提取物，六水氯化钴，七水硫酸亚铁，无水氯化钙，L-鸟氨酸盐酸盐的组合物；或基本 上由葡萄糖，硝酸钠，三水磷酸氢二钾，七水硫酸镁，氯化钾，酵母提取物，六水氯化钴，七水硫酸亚铁，无水氯化钙，L-鸟氨酸盐酸盐组成的组合物。在组合物中，所述的葡萄糖，硝酸钠，三水磷酸氢二钾，七水硫酸镁，氯化钾，酵母提取物，六水氯化钴，七水硫酸亚铁，无水氯化I丐，L-鸟氨酸盐酸盐占培养基总重量的80-100%,较佳地占90-100%,更佳地占 95-100%，如 98%，99%。作为本发明的优选方式，用于配制本发明的海洋长孢葡萄穗霉培养基的各组分的用量如表I所示。表I
权利要求
1.一种海洋长孢葡萄穗霉的培养基，其特征在于，所述培养基包括以下组分: 葡萄糖30-170重量份； 硝酸钠2-5重量份； 三水磷酸氢二钾0.01-0.2重量份； 七水硫酸镁0.2-0.9重量份； 氯化钾0.4-0.8重量份； 酵母提取物0.5-1.5重量份； 六水氯化钴0.0015-0.005重量份； 七水硫酸亚铁0.01-0.03重量份； 无水氯化钙0.004-0.01重量份；和 L-鸟氨酸盐酸盐8-20重量份。
2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基包括以下组分: 葡萄糖35-155重量份； 硝酸钠2.5-4重量份； 三水磷酸氢二钾0.01-0.15重量份； 七水硫酸镁0.3-0.8重量份； 氯化钾0.5-0.8重量份； 酵母提取物0.60-1.25重量份； 六水氯化钴0.002-0.004重量份； 七水硫酸亚铁0.01-0.025重量份； 无水氯化钙0.005-0.009重量份；和 L-鸟氨酸盐酸盐10-20重量份。
3.如权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述培养基包括以下组分: 葡萄糖125重量份； 硝酸钠3.3重量份； 三水磷酸氢二钾0.07重量份； 七水硫酸镁0.4重量份； 氯化钾0.625重量份； 酵母提取物0.7重量份； 六水氯化钴0.003125重量份； 七水硫酸亚铁0.01875重量份； 无水氯化钙0.0065重量份；和 L-鸟氨酸盐酸盐13-15重量份； 其中，各组分在培养基中的含量按照重量份可在±10%范围内浮动。
4.如权利要求1-3任一所述的培养基，其特征在于，所述培养基中，各组分配制于1000重量份水中；和/或所述培养基的PH值5.5-6.5。
5.权利要求1-4任一所述的培养基的用途，用于培养海洋长孢葡萄穗霉，生产纤溶活性化合物FGFCI。
6.一种制备海洋长孢葡萄穗 霉的培养基的方法，其特征在于，所述方法包括:将权利要求1-4任一所述的培养基的各组分在水中混匀，调节至pH值5.5-6.5。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括:将混匀及调节pH值后的培养基在121。。，灭菌 15-20min。
8.一种利用海洋长孢葡萄穗霉生产纤溶活性化合物FGFCl的方法，其特征在于，所述方法包括:利用权利要求1-4任一所述的培养基培养海洋长孢葡萄穗霉，从而生产纤溶活性化合物FGFCl。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，将海洋长孢葡萄穗霉按照体积以5-10%的接种量接入权利要求1-4任一所述的培养基，发酵培养8-13天，获得发酵液，其中含有纤溶活性化合物FGFCl。
10.一种用于培养海洋长孢葡萄穗霉的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括:权利要求1-4任一所 述的培养基。
全文摘要
本发明涉及用于海洋长孢葡萄穗霉生产纤溶活性化合物的新型培养基，本发明的培养基适合于海洋长孢葡萄穗霉的生长，且可大大地提高纤溶活性化合物FGFC1的产量。
文档编号C12P17/18GK103233048SQ20131017043
公开日2013年8月7日 申请日期2013年5月9日 优先权日2013年5月9日
发明者蔡孟浩, 王美霞, 周祥山, 张元兴 申请人:华东理工大学