专利名称：产酯酵母液体培养基及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种产酯酵母液体培养基及其制备方法，属于微生物技术领域。
背景技术：
产酯酵母主要属于产膜酵母或假丝酵母，其中大多数为异性汉逊酵母，少数为小圆形酵母，能产生以酯香为主体的香味物质。产酯酵母菌在酱油及酱类生产中，产生特殊的香气，是酱香的主要来源。同时也可以在清香型白酒和浓香型白酒中广泛的应用，提高主体香气。
对产酯酵母的培养有固态和液态两种,不管哪一种培养方式,选择适宜的培养基都是最关键的。目前在实验室和实际大生产中比较常用的培养基主要有以下几种:(1)麦芽汁培养基:主要是将大麦芽自我糖化后的糖化液；(2)马铃薯葡萄糖培养基:主要是马铃薯浸汁与葡萄糖；(3)豆芽汁葡萄糖培养基:主要是黄豆发芽后的浸汁与葡萄糖；(4)察氏培养基:是一种化学合成培养基；(5)YPD:主要是酵母膏、蛋白胨、葡萄糖。综上这些培养基在实验室进行小型试验还是可以的，但如果在生产中应用，有些成分的市场价格比较昂贵， 会造成相应产品的成本比较高；另外，如果经常用一种培养基对产酯酵母连续传代培养的话，会大大降低其产酯活性。因此，开发一种成本低廉、营养成分又全面的天然培养基，是稳定的产业化生产产酯酵母的关键。发明内容
本发明目的是提供一种成本低廉、营养成分全面且适于大规模产业化使用的天然产酯酵母液体培养基，及该培养基的制备方法。
一种产酯酵母液体培养基，由以下重量份的成分组成:水150-170份，玉米面 20-25份，大麦芽粉5-8份，河内白曲8-10份。
一种产酯酵母液体培养基的制备方法，包括如下步骤:
(I)量取150-170重量份的水，加热至58_62°C ；
(2)称取20-25重量份的玉米面加入到上述58_62°C的水中，搅拌均匀并加热；
(3)将水和玉米面的混合物加热至沸腾，并保持沸腾25-35分钟，熬成玉米粥，然后降温至60°C -65°C ；
(4)称取8-10重量份的河内白曲，作为糖化剂加入到已降温到60°C -65°c的玉米粥中搅拌均匀；
(5)称取约5-8重量份的大麦芽粉，加入到步骤(4)得到的混合物中，搅拌均匀，保持温度在60°C _65°C进行糖化，糖化时间为3-5小时；
(6)糖化完全后，加热至沸腾，并保持沸腾25-35分钟，进行杀菌和灭酶活，然后加酸调节pH至4-5 ；
(7)将步骤(6)的混合物降温至30°C，过滤分离得到糖化液和糖化混合物，待温度降至20°C时，测试糖化液的白利糖度，将白利糖度控制在10-12Br ix ；
(8)将步骤(7)的糖化液分装并高压蒸汽灭菌，冷却备用；糖化混合物分装到事先灭好菌的卡式罐中，备用。
所述制备过程优选在夹层锅中进行，以蒸汽和冷却水分别进行加热和冷却，保证受热面大，热效率高，加热均匀。
所述玉米面中过40目筛的占45%以上。
所述糖化是否完全的检测方法为:从步骤(5)糖化后的混合物中取适量到加有0.2ml的稀碘液的白板上进行糖化终点的判断，如果碘液变蓝色，说明糖化不完全，还要继续糖化，如果变红棕色，说明糖化完全，可以进行下一步操作。
所述步骤(6)中的酸是硫酸、盐酸。
所述步骤(7)中的过滤采用100目的棉布进行过滤。
所述步骤(7)中白利糖度偏高时，利用蒸馏水稀释调节；偏低时，加入葡萄糖进行调节。
所述高压蒸汽灭菌条件为温度115°C，时间15min。
相比于现有技术，本发明具有如下有益效果:
(I)原料选择含有淀粉含量较高的玉米面，经糖化后确保有充足的碳源，同时又补充了一部分大麦芽粉，使得碳源、氮源以及无机盐等等成分种类更多、更全，从而更有利于产酯酵母生长繁殖。
(2)制备方法中的糖化工艺采用河内白曲做糖化剂，而不是糖化酶，河内白曲的酶系非常丰富，像酸性蛋白酶等等，可以将玉米面中的其他成分进行部分分解，增加了酵母可以利用的葡萄糖、氮源、无机盐以及其他各种生长因子；大生产生产产酯酵母不同于实验室对酵母形态、生理生化等的研究，培养基要较贫瘠会使得保存效果更好，而在生产中要使的菌越旺盛越好。因此，该工艺生产出来的培养基更适合于大生产的需要。
(3)本发明的原料选择和制作工艺成本低廉、应用效果极佳；使用该培养基30°C 摇床培养产酯酵母，16-18小时即可达到旺盛期，出芽率达到最高，细胞数在4.5亿/ml左右，与普通培养基相比，同等培养条件下细胞数多3倍还多。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步阐述。
实施例1
所述的产酯酵母液体培养基制作工艺步骤如下:
(I)量取150kg的水于夹层锅中，通入蒸汽加热，至59°C。
(2)称取23kg40目的玉米面，加入到加热至59°C的热水中。继续通蒸汽加热，同时开启夹层锅上的搅拌器进行搅拌。
(3)将玉米面和水的混合物煮沸，并保持沸腾28分钟，熬成玉米粥。然后向夹层锅夹层中通冷却水，将锅内的玉米粥降温到60°C。
(4)称取8kg的河·内白曲加入到已降温到60°C的玉米粥中搅拌均匀。
(5)称取约7kg的大麦芽粉，加入到步骤(4)得到的混合物中，搅拌均匀。向夹层锅夹层中缓缓通入蒸汽，并通过阀门进行控制，使锅内温度保持在60°C进行糖化。
(6)糖化3.5小时后，从糖化的混合物中取0.1ml到加有0.2ml的稀碘液的白板上进行糖化终点的判断，碘液变成红棕色，说明糖化完全，进行下一步操作。
(7)糖化完全的混合物，再继续通蒸汽煮沸34分钟，进行杀菌和灭酶活，并用硫酸调pH至5。
(8)将(7)处理后的混合物降温至30°C，用100目棉布过滤得到糖化液和不能经过棉布的糖化混合物，待糖化液降温到20°C时，测试糖化液的白利糖度为13.5Brix，糖度偏高，加入蒸懼水稀释糖度至llBrix。
(9)将(8)处理后的糖化液分装到三角瓶中，盖塞包好牛皮纸后，放到高压蒸汽灭菌器中，115°C，15min高压灭菌，冷却备用。
(10)将(8)处理后剩余的糖化混合物分装到事先灭好菌的卡式罐中，备用。
将灭菌的三角瓶糖化液放置超净工作台，无菌条件下接入斜面酵母泥2环，放于 30°C、200r/min的摇床中培养18h，显微镜下测定出芽率和细胞数。
同样的条件下接种酵母泥于麦芽汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁葡萄糖培养基、察氏培养基和YPD培养基，同样的培养条件和培养时间，测定出芽率和细胞数。
结果如表1:
表I实施例1培养基与普通培养基的培养效率对比
权利要求
1.一种产酯酵母液体培养基，其特征在于，由以下重量份的成分组成水150-170份， 玉米面20-25份，大麦芽粉5-8份，河内白曲8-10份。
2.一种产酯酵母液体培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤Cl)量取150-170重量份的水，加热至58-620C ；(2)称取20-25重量份的玉米面加入到上述58-62°C的水中，搅拌均匀并加热；(3)将水和玉米面的混合物加热至沸腾，并保持沸腾25-35分钟，熬成玉米粥，然后降温至 60°C -65V ；(4)称取8-10重量份的河内白曲，作为糖化剂加入到已降温到60°C-65°C的玉米粥中搅拌均匀；(5)称取约5-8重量份的大麦芽粉，加入到步骤(4)得到的混合物中，搅拌均匀，保持温度在60°C _65°C进行糖化，糖化时间为3-5小时；(6)糖化完全后，加热至沸腾，并保持沸腾25-35分钟，进行杀菌和灭酶活，然后加酸调节pH至4-5 ；(7)将步骤(6)的混合物降温至30°C，过滤分离得到糖化液和糖化混合物，待糖化液温度降至20°C，测试糖化液的白利糖度，将白利糖度控制在10-12Brix ；(8)将步骤(7)的糖化液分装并高压蒸汽灭菌，冷却备用；糖化混合物分装到事先灭好菌的卡式罐中，备用。
3.根据权利要求2所述的产酯酵母液体培养基的制备方法，其特征在于，所述制备过程在夹层锅中进行，以蒸汽和冷却水分别进行加热和冷却。
4.根据权利要求2所述的产酯酵母液体培养基的制备方法，其特征在于，所述玉米面中过40目筛的占45%以上。
5.根据权利要求2所述的产酯酵母液体培养基的制备方法，其特征在于，所述糖化是否完全的检测方法为从步骤(5)糖化后的混合物中取适量到加有O. 2ml的稀碘液的白板上进行糖化终点的判断，如果碘液变蓝色，说明糖化不完全，还要继续糖化，如果变红棕色， 说明糖化完全，可以进行下一步操作。
6.根据权利要求2所述的产酯酵母液体培养基的制备方法，其特征在于，所述步骤(6) 中的酸是硫酸、盐酸。
7.根据权利要求2所述的产酯酵母液体培养基的制备方法，其特征在于，所述步骤(7) 中的过滤采用100目的棉布进行过滤。
8.根据权利要求2所述的产酯酵母液体培养基的制备方法，其特征在于，所述步骤(7) 中白利糖度偏高时，利用蒸馏水稀释调节；偏低时，加入葡萄糖进行调节。
9.根据权利要求2所述的产酯酵母液体培养基的制备方法，其特征在于，所述高压蒸汽灭菌条件为温度115°C，时间15min。
全文摘要
本发明涉及一种产酯酵母液体培养基的及其制作工艺，属于微生物技术领域。先取水150-170重量份于夹层锅中，通入蒸汽加热到58-62℃，再加入玉米面20-25重量份(玉米面要求过40目筛的占45%以上)，继续蒸汽加热，并用搅拌器搅拌，煮沸，保持沸腾25-35分钟。然后降温到60℃-65℃，加入河内白曲8-10重量份，大麦芽粉5-8重量份，于60℃-65℃保持3-5h糖化，最后用稀碘液判断糖化终点。煮沸半小时杀菌灭酶，用硫酸调节pH4-5，降温到30℃左右，取出一部分用白细布过滤后即成糖化液，糖度控制在10-12Brix。然后分装到三角瓶中，包好后在高压蒸汽灭菌器中115℃、15min灭菌，冷却备用。其余的为糖化醪，分装到事先灭菌的卡式罐中，备用。
文档编号C12N1/16GK103255070SQ201310199749
公开日2013年8月21日 申请日期2013年5月24日 优先权日2013年5月24日
发明者赵纪文, 许玲, 胥伟宏, 信春晖, 王增军, 王凤丽, 韩睛睛 申请人:山东扳倒井股份有限公司