水母种类鉴别方法
【专利摘要】本发明涉及生物【技术领域】，水母种类鉴别方法，首先，提取水母DNA，对水母DNA进行水母16s?RNA数据库分析；然后，根据16s?RNA同源性分析结果设计水母16s?RNA特异性引物和Taqman探针；接着，以水母DNA为模板、利用特异性引物进行Taqman探针检测获得曲线数据；最后，根据扩增结果，确定水母种类。本发明根据水母的DNA确定水母的种类，能够针对形态上不完整的成体个体以及水母幼体进行种类鉴定。同时本发明根据16s?RNA同原性分析结果设计水母16s?RNA特异性引物，针对性强、准确率高。
【专利说明】水母种类鉴别方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物【技术领域】，具体涉及生物种类鉴别方法。
【背景技术】
[0002]近十几年，我国沿岸水母大量发生，给海洋生态环境带来了一定的影响。水母在形态上完整的成体个体在种类的鉴别上比较容易，但形态上不完整的成体个体以及水母幼体的种类鉴别比较困难。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于，提供一种水母种类鉴别方法，以解决上述问题。
[0004]本发明所解决的技术问题可以采用以下技术方案来实现:
[0005]水母种类鉴别方法，其特征在于，首先，利用Clustalx软件对水母16s RNA数据库分析；然后，根据16s RNA同源性分析结果,利用primer分析软件设计水母16s RNA特异性引物和Taqman探针；接着,提取水母DNA,以水母DNA为模板、利用特异性引物进行Taqman探针检测获得曲线数据；最后，确定水母种类。本发明根据水母的DNA确定水母的种类，能够针对形态上不完整的成体个体以及水母幼体进行种类鉴定。同时本发明根据16s RNA同源性分析结果设计水母16s RNA特异性引物和Taqman探针，针对性强、准确率高。
[0006]通过水母DNA提取液提取水母DNA。(利用我们改良后的CTAB法)使用时，直接将100-200g样本放入水母DNA提取液中，利用水母DNA提取液进行水母DNA提取。现有技术，通常是将采集的样本进行冷冻保存，本发明将样本直接保存在提取液中，避免了之后的操作，达到了省时省力的作用。
[0007]使用real time PCR仪采用实时荧光定量PCR技术对水母DNA进行检测，确定水母种类。本发明采用上述技术方案，既可节省人力物力，又可简化生产步骤。real time PCR(又叫实时定量PCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号变化来即时测定特异性产物，不需要取出PCR产物进行分离。实时荧光定量PCR技术不仅实现了 PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度闻等特点。
[0008]在实验操作过程中所使用的器具均经消毒处理。所使用的试剂均为DNase free级，以避免水母DNA降解。
[0009]由于水母的98%为水分，不及时处理极易降解。因此，水母样本采集、水母DNA提取间隔在半小时以内最佳。
[0010]本方法可针对沙海蜇、海月水母、澳洲斑点水母、海蜇进行种类鉴别。
【专利附图】
【附图说明】
[0011]图1为本发明的流程图；
[0012]图2为沙海蜇样本检测的结果图；[0013]图3为海月水母样本检测的结果图；
[0014]图4为澳洲斑点样本检测的结果图；
[0015]图5为海蜇样本检测的结果图。
【具体实施方式】
[0016]为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体图示进一步阐述本发明。
[0017]参照图1、图2、图3、图4和图5。水母种类鉴别方法，首先，提取水母DNA，对水母DNA进行水母16s RNA数据库分析；然后,根据16s RNA同原性分析结果设计水母16s RNA特异性引物；接着，以水母DNA为模板、利用特异性引物进行Taqman探针检测获得扩增曲线；最后，根据扩增结果确定水母种类。本发明根据水母的DNA确定水母的种类，能够针对形态上不完整的成体个体以及水母幼体进行种类鉴定。同时本发明根据16s RNA同源性分析结果设计水母16s RNA特异性引物Taqman探针，针对性强、准确率高。
[0018]通过水母DNA提取液提取水母DNA。(我们改良后的CTAB法)使用时，直接将100-200g样本放入水母DNA提取液中，利用水母DNA提取液进行水母DNA提取。现有技术，通常是将采集的样本进行冷冻保存，本发明将样本直接保存在提取液中，避免了之后的操作，达到了省时省力的作用。
[0019]上述操作步骤中，部分操作步骤对操作顺序要求不高，也可同步进行。作为一种优选方案，图1中先进行水母样品采集、再进行水母DNA提取，在此同时进行水母信息采集，设计特异性引物和Taqman探针，最后以水母DNA为模板、利用特异性引物进行Taqman探针检测。
[0020]使用real time PCR仪采用实时荧光定量PCR技术对水母DNA进行检测，确定水母种类。本发明采用上述技术方案，既可节省人力物力，又可简化生产步骤。real time PCR(又叫实时定量PCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号变化来即时测定特异性产物，不需要取出PCR产物进行分离。实时荧光定量PCR技术不仅实现了 PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度闻等特点。
[0021]在实验操作过程中所使用的器具均经消毒处理。所使用的试剂均为DNase free级，以避免水母DNA降解。
[0022]由于水母的98%为水分，不及时处理极易降解。因此，水母样本采集、水母DNA提取间隔在半小时以内最佳。本方法可针对沙海蜇、海月水母、澳洲斑点水母、海蜇进行种类鉴别。图2、图3、图4和图5中A、B为沙海蜇；C、D为海月水母；E、F为澳洲斑点水母；G、H为海蜇。
[0023]以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
【权利要求】
1.水母种类鉴别方法，其特征在于，首先，提取水母DNA，对水母DNA进行水母16sRNA数据库分析；然后，根据16s RNA同原性分析结果设计水母16s RNA特异性引物和Taqman探针；接着，以水母DNA为模板、利用特异性引物进行Taqman探针检测获得曲线数据；最后，根据扩增结果，确定水母种类。
2.根据权利要求1所述的水母种类鉴别方法，其特征在于:通过水母DNA提取液提取水母DNA。(我们改良后的CTAB法)。
3.根据权利要求2所述的水母种类鉴别方法，其特征在于:使用时，直接将100-200g样本放入水母DNA提取液中，利用水母DNA提取液进行水母DNA提取。
4.根据权利要求1所述的水母种类鉴别方法，其特征在于:使用realtime PCR仪采用实时荧光定量PCR技术对水母DNA进行检测，确定水母种类。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的水母种类鉴别方法，其特征在于:本方法可针对沙海蜇、海月水母、澳 洲斑点水母、海蜇进行种类鉴别。
【文档编号】C12Q1/68GK103540656SQ201310221007
【公开日】2014年1月29日 申请日期:2013年6月4日 优先权日:2013年6月4日
【发明者】曲宪成 申请人:曲宪成