一种从基因水平鉴定中国人群体液的组织来源的方法和系统的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种从基因水平鉴定中国人群体液的组织来源的方法和系统。所述方法包括检测体液中GYPA、SPTB、MMP-7、STATH、MUC4、PRM2和TGM4七个基因的表达状况，所述体液包括外周血、月经血、唾液、阴道分泌物和精液中的一种或多种。本发明还提供了一种从基因水平鉴定中国人群体液组织来源的系统。本发明提供的方案能有效从基因水平确定中国人群体液的组织来源，大大简化了鉴定刑侦现场体液或其斑迹的组织来源的步骤，能为明确案件性质、确定犯罪嫌疑人、以及定罪量刑等提供准确的科学依据。
【专利说明】一种从基因水平鉴定中国人群体液的组织来源的方法和系 统
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种人群体液组织来源的方法和系统，尤其涉及一种从基因水平鉴定 中国人群体液组织来源的方法和系统。
【背景技术】
[0002] 我国法医DNA领域经过近三十年的发展，取得了包括国产化DNA试剂在内的大量 的研究成果，相关技术已成为公安办案实践中的重要科技支撑。犯罪现场遗留体液（包括 外周血、月经血、唾液、阴道分泌物和精液等）及其斑迹或痕迹的检测与鉴定是法医鉴定中 的重要环节。
[0003] 鉴定体液的组织来源可以为现场重现提供决定性的证据，可以确定案件性质，进 而为破案提供关键线索。目前针对上述体液或其斑迹主要通过一系列的生化、血清学或者 免疫学手段来确定体液或其斑迹的组织来源，过程复杂、繁琐，并且对于刑事案件现场通常 会出现的微量体液检材往往不能获得良好的检测结果。对于这些微量体液检材，通常会忽 略甚至省略确定其组织来源的步骤，直接采用DNA分析，将检材DNA与已知的DNA样本进行 比对分析，从而确定或者排除嫌疑人，但是在很多案件中体液斑迹的组织来源鉴定仍旧十 分重要，而且是必不可少的，例如：在某些刑事案件中，我们需确认现场某些血迹是属于机 械伤害等造成的损伤性出血，还是女性正常的生理性出血（月经期间）；而在某些性侵害案 件中，需要对声称受害的女性提供的血痕或其阴道的出血加以辨别，以明确该血痕是属于 性侵害造成的损伤性出血还是属于女性正常的生理性出血（月经期间）；以及犯罪现场中存 在的多种体液或其斑迹混合出现的情况，例如月经血与外周血，阴道分泌物与唾液，月经血 与精液等混合出现的情况，如何有效的区分这些混合体液中含有的体液的组织来源，成为 明确案件性质、确定犯罪嫌疑人、以及定罪量刑等的重要依据。
[0004] 因此，国内外研究者在针对从基因水平确定体液或其斑迹的组织来源方面进行了 大量的研究，但是国内目前还没有报道显示可以同时对上述外周血、月经血、唾液、阴道分 泌物和精液进行准确快速的鉴定，国外虽然报道了针对多种体液的鉴定方法，并且开始尝 试法医学应用，但是在利用其鉴定方法对中国人群中上述体液进行鉴定时，往往无法获得 结果，或者获得与实际情况相反的结果，考虑出现这些状况的可能原因是由于不同地域人 种之间体液所含有的特异性基因不同，以及这些特异性基因的表达丰度不同，国外的研究 结果难以直接应用于针对中国人群的体液组织来源的鉴定。
[0005] 因此，如何针对中国人群开发一种方法或系统，可同时对未知组织来源的体液进 行上述多种体液的组织来源的鉴定，成为有待解决的问题。
【发明内容】
[0006] 本发明提供一种从基因水平鉴定中国人群体液的组织来源的方法，所述方法能通 过确定待检测体液中特定基因的表达状况来确定该体液的组织来源，为明确案件性质、确 定犯罪嫌疑人、以及定罪量刑等提供准确的科学依据。
[0007] 本发明还提供了一种从基因水平鉴定中国人群体液的组织来源的系统，所述系统 通过RNA提取体系，反转录体系，PCR扩增体系和检测扩增产物体系确定待检测体液中特定 基因的表达状况，进而确定该体液的组织来源，为现场重现，确定案件性质，以及破案提供 关键线索。
[0008] 本发明提供的一种从基因水平鉴定中国人群体液组织来源的方法，所述方法包括 检测体液中GYPA、SPTB、MMP-7、STATH、MUC4、PRM2和TGM4七个基因的表达状况，所述体液 包括外周血、月经血、唾液、阴道分泌物和精液中的一种或多种，具有GYPA和/或SPTB基因 表达的体液为含有外周血的体液；具有GYPA和SPTB基因中的至少一种表达，并同时存在 MMP-7基因表达的体液为含有月经血的体液；具有STATH基因表达的体液为含有唾液的体 液；具有MUC4基因表达的体液为含有阴道分泌物的体液；具有PRM2和/或TGM4基因表达 的体液为含有精液的体液。
[0009] 进一步的，所述方法包括：从待检测体液中提取RNA ;将提取的RNA反转录为 cDNA ;使用针对所述七个基因的PCR扩增引物组对上述cDNA进行扩增，得到扩增后的PCR 产物；检测该PCR产物中所述七个基因的扩增产物是否存在。
[0010] 更进一步的，所述PCR扩增引物组由与所述七个基因一一对应的七对扩增引物组 成，所述扩增引物为序列表中SEQ ID No. 1至SEQ ID No. 14的核苷酸序列。
[0011] 更进一步的，通过测序检测该PCR产物中所述七个基因的扩增产物是否存在。
[0012] 在本发明的一个实施方式中，所述PCR扩增引物组为具有荧光的PCR扩增引物 组，通过遗传分析仪确定该PCR产物中所述七个基因的扩增产物是否存在。在本发明的 方案中，所述遗传分析仪可以是本领域技术人员常规使用的遗传分析仪，例如ABI3130或 ABI3500型遗传分析仪，通过GeneMapper? ID-X1. 2软件或其他GeneMapper软件等分析 该PCR产物中所述七个基因的扩增产物是否存在。在本发明的实施方式中，将实际扩增出 的产物长度、产物颜色与表2中记载的引物要扩增的长度、产物颜色进行比对，实际扩增出 的产物长度只要与表2记载的扩增长度相等或相近即可，二者可以存在偏差，只要在本领 域技术人员可以接受的范围内即可，或者通过测序确认是所要扩增的片段即可。
[0013] 在本发明的方案中，所述体液包括外周血、月经血、唾液、阴道分泌物和精液中的 一种或多种。当然本发明的体液还可以是上述5种体液中的一种或多种在体外干燥后形成 的斑迹。
[0014] 由于刑事案件现场存在的各种体液的斑迹中RNA的含量往往是Pg级的，而该量不 能满足先进行定量，后进行组织来源分析的需要，因此实际操作中是要将从斑迹提取的全 部RNA直接用于进行组织来源分析，在本申请的方案中，各种体液样本RNA的量仅通过体积 来表示，这对本领域技术人员来说是可以理解的，并且能够实施本申请的方案。在本发明的 一个【具体实施方式】中，上述5种体液被制成类似于刑事案件现场出现的体液样本，以获得 更符合实际情况的结果。在本发明的【具体实施方式】中，所述5种体液可以是单独存在，也可 以是混合存在的（例如，液态的体液样本按照1 :1 :1 :1 :1的体积比混合存在，或者体液斑 迹样本的RNA按照1 :1 :1 :1 :1的体积比混合存在，或者由RNA反转录获得的cDNA按照1 : 1 :1 :1 :1的体积比混合存在）。
[0015] 在本发明的方案中，所述外周血为被造血器官释放入循环系统参与循环的血，它 区别于造血器官内的未成熟的血细胞或未被释放入循环的血细胞。
[0016] 月经血本质上是子宫内膜变形、坏死、脱落，混合内膜小血管的破裂出血，除了含 有子宫内膜外，还含有血细胞等。
[0017] 唾液是唾液腺的分泌物。
[0018] 阴道分泌物是由阴道粘膜渗出物、前庭腺、宫颈腺、子宫内膜等的分泌液与脱落上 皮细胞、阴道正常菌群及其代谢产物组成的混合物。
[0019] 精液主要由精子及精浆组成，是一种含蛋白质、各种酶及果糖等多种成分的碱性 乳白色胶状液体。
[0020] 本发明提供的一种从基因水平鉴定中国人群体液组织来源的系统，所述系统用于 检测体液中GYPA、SPTB、MMP-7、STATH、MUC4、PRM2和TGM4七个基因的表达状况，所述体液 包括外周血、月经血、唾液、阴道分泌物和精液中的一种或多种，具有GYPA和/或SPTB基因 表达的体液为含有外周血的体液；具有GYPA和SPTB基因中的至少一种表达，并同时存在 MMP-7基因表达的体液为含有月经血的体液；具有STATH基因表达的体液为含有唾液的体 液；具有MUC4基因表达的体液为含有阴道分泌物的体液；具有PRM2和/或TGM4基因表达 的体液为含有精液的体液。
[0021] 进一步的，所述系统包括RNA提取体系，反转录体系，PCR扩增体系和检测扩增产 物体系，
[0022] 所述RNA提取体系用于从待检测体液中提取RNA ;
[0023] 所述反转录体系用于将提取的RNA反转录为cDNA ;
[0024] 所述 PCR 扩增体系用于对上述 cDNA 针对 GYPA、SPTB、MMP-7、STATH、MUC4、PRM2 和 TGM4七个基因进行扩增，获得扩增产物；
[0025] 所述检测扩增产物体系用于检测所述扩增产物中是否存在所述七个基因的扩增 产物。
[0026] 更进一步的，所述PCR扩增引物组由与所述七个基因一一对应的七对扩增引物组 成，所述扩增引物为序列表中SEQ ID No. 1至SEQ ID No. 14的核苷酸序列。
[0027] 更进一步的，所述检测扩增产物体系通过测序检测所述扩增产物中是否存在所述 七个基因的扩增产物。
[0028] 在本发明的另一个【具体实施方式】中，所述PCR扩增引物组为具有荧光的PCR扩增 引物组，所述检测扩增产物体系通过遗传分析仪确定所述扩增产物中是否存在所述七个基 因的扩增产物。
[0029] 在本发明的方案中，所述七个基因信息如表1所示：
[0030] 表 1
[0031]
【权利要求】
1. 一种从基因水平鉴定中国人群体液组织来源的方法，所述方法包括： 检测体液中GYPA、SPTB、MMP-7、STATH、MUC4、PRM2和TGM4七个基因的表达状况，所述 体液包括外周血、月经血、唾液、阴道分泌物和精液中的一种或多种， 具有GYPA和/或SPTB基因表达的体液为含有外周血的体液；具有GYPA和SPTB基因 中的至少一种表达，并同时存在MMP-7基因表达的体液为含有月经血的体液；具有STATH基 因表达的体液为含有唾液的体液；具有MUC4基因表达的体液为含有阴道分泌物的体液；具 有PRM2和/或TGM4基因表达的体液为含有精液的体液。
2. 根据权利要求1所述的方法，包括： 从待检测体液中提取RNA ; 将提取的RNA反转录为cDNA ; 使用针对所述七个基因的PCR扩增引物组对上述cDNA进行扩增，得到扩增后的PCR 产物； 检测该PCR产物中所述七个基因的扩增产物是否存在。
3. 根据权利要求2所述的方法，所述PCR扩增引物组由与所述七个基因一一对应的七 对扩增引物组成，所述扩增引物为序列表中SEQ ID No. 1至SEQ ID No. 14的核苷酸序列。
4. 根据权利要求2或3所述的方法，通过测序检测该PCR产物中所述七个基因的扩增 产物是否存在。
5. 根据权利要求3所述的方法，所述PCR扩增引物组为具有荧光的PCR扩增引物组，通 过遗传分析仪确定该PCR产物中所述七个基因的扩增产物是否存在。
6. -种从基因水平鉴定中国人群体液组织来源的系统，所述系统用于检测体液中 GYPA、SPTB、MMP-7、STATH、MUC4、PRM2和TGM4七个基因的表达状况，所述体液包括外周血、 月经血、唾液、阴道分泌物和精液中的一种或多种，具有GYPA和/或SPTB基因表达的体液 为含有外周血的体液；具有GYPA和SPTB基因中的至少一种表达，并同时存在MMP-7基因表 达的体液为含有月经血的体液；具有STATH基因表达的体液为含有唾液的体液；具有MUC4 基因表达的体液为含有阴道分泌物的体液；具有PRM2和/或TGM4基因表达的体液为含有 精液的体液。
7. 根据权利要求6所述的系统，包括RNA提取体系，反转录体系，PCR扩增体系和检测 扩增产物体系， 所述RNA提取体系用于从待检测体液中提取RNA ; 所述反转录体系用于将提取的RNA反转录为cDNA ; 所述PCR扩增体系用于对上述cDNA针对GYPA、SPTB、MMP-7、STATH、MUC4、PRM2和TGM4 七个基因进行扩增，获得扩增产物； 所述检测扩增产物体系用于检测所述扩增产物中是否存在所述七个基因的扩增产物。
8. 根据权利要求7所述的系统，所述PCR扩增引物组由与所述七个基因一一对应的七 对扩增引物组成，所述扩增引物为序列表中SEQ ID No. 1至SEQ ID No. 14的核苷酸序列。
9. 根据权利要求7或8所述的系统，所述检测扩增产物体系通过测序检测所述扩增产 物中是否存在所述七个基因的扩增产物。
10. 根据权利要求7所述的系统，所述PCR扩增引物组为具有荧光的PCR扩增引物组， 所述检测扩增产物体系通过遗传分析仪确定所述扩增产物中是否存在所述七个基因的扩 增产物。
【文档编号】C12Q1/68GK104419753SQ201310384486
【公开日】2015年3月18日 申请日期:2013年8月29日 优先权日:2013年8月29日
【发明者】王冲, 李万水, 胡兰, 徐秀兰, 石屹, 凃政 申请人:公安部物证鉴定中心