一种同时分析人基因组dna 26个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒及其使用方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种同时检测人基因组DNA?26个基因座的五色荧光标记复合扩增系统；本发明将26个基因座分为4组，共涉及5种颜色的荧光标记；本发明的荧光标记复合扩增系统的灵敏度高，在DNA模板量为0.12ng的条件下，可检出全部26个基因座；适用于血滤纸、FTA卡采集样本的直接扩增。
【专利说明】—种同时分析人基因组DNA 26个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒及其使用方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种26个基因座的荧光标记复合扩增检验系统，具体是涉及一种同时分析人基因组DNA26个基因座的五色荧光标记复合扩增系统，该系统可以应用于个体识别和亲子鉴定。
【背景技术】
[0002]短串联重复序列基因座(STR)是目前普遍应用的遗传标记。90年代初STR基因座多态性的发现，特别是STR基因座具有片段小容易扩增，适宜于检验微量和降解检材，而且各基因座的扩增条件相似而能够复合扩增，因而具有灵敏、准确、快速、信息量大等优点。尤其是在建立DNA数据库方面，STR复合扩增技术具有极大的优越性。因此美国FBI进行了大量研究，选择了 13个STR基因座用于建立DNA数据库——CODIS (Combined DNA IndexSystem):CSF1P0、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA, THOU TPOX, vWA。这些STR基因座通常被称为13个核心基因座。
[0003]正因为STR所具备的优点和应用前景，法医学界以及一些大的公司均投入大量的资金对其进行了开发性的研究。90年代中后期以美国ABI公司为代表的研发商建立起荧光复合扩增体系。目前最具代表性的是ABI(Applied Biosystems, USA)公司的Identifiler?和Promega (USA)公司的PowerPlex-16突光检测试剂盒。这两个试剂盒均包括上述13个核心基因座。
[0004]长期的DNA检验实践表明，短串联重复序列基因座的遗传多态性在种族间存在一定的差异，各个基因座间差别也很大。在美国FBI推荐的13个核心基因座中，有部分基因座遗传多态性不高，或是不同人群间差异较大。由此给DNA检验技术的应用及其效率带来一定的影响。`[0005]随着法医DNA分型技术的发展，目前已经能对类似血痕、精斑、唾液斑、毛发、骨骼等进行DNA分型；同时，随着PCR技术的发展，多重复扩体系可检测的基因座数量也越来越多。专利ZL200510096613.6公开了一种同时分析人基因组DNA的多个基因座的荧光标记复合扩增系统，其特征在于:所述的15个基因座为:Amelogenin、D2S1338、D3S1358、D5S818、D6S1043、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、Penta E、CSF1P0、vWA、FGA。该专利提供了对15个基因座的分型结果，为4色荧光检测系统。2011102293253 —种同时分析人基因组DNA22个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒及其使用方法和应用，该专利公开了一种同时分析人基因组DNA22个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒，所述的22个基因座为:D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta E、D2S441、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1P0、Penta D、D10S1248、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA、性别基因座 Amelogenin。
[0006]我们对中国人群的短串联重复序列基因座的遗传多态性进行了深入的研究，并以此为依据开发新的短串联重复序列基因座的复合扩增检验系统，特别是针对男性Y染色体部分丢失样本，加入Y染色体长臂上的2个基因座DYS391和Y indel用以鉴别，以求在5色荧光检测系统中，提供对包括Amelogenin在内的26个基因座的分型结果，是目前国内累计个体识别能力和累积非父排除率最高的试剂盒。
【发明内容】
[0007]本发明的目的之ー在于:提供ー种通过复合扩增26个基因座来进行个体识别和亲子鉴定的荧光标记STR复合扩增检验系统。涉及检测人基因组中具有多态性的遗传标记。本发明特别涉及用聚合酶链式反应在ー个体系中同时扩增多个短串联重复基因座。
[0008]为了实现本发明的目的，采用如下技术方案:
[0009]一种同时分析人基因组DNA26个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒，所述的26个基因座为:D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、D1S1656、Penta E、D2S441、TPOX、THOUD2S1338、CSF1P0、Penta D、D10S1248、D22S1045、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、Y indel、DYS391、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA、性别基因座 Amelogenin ;其特征在于:该
试剂盒包括26个基因座对应的引物如下:
[0010]
【权利要求】
1.一种同时分析人基因组DNA26个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒，所述的26个基因座为:D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、D1S1656、Penta E、D2S441、TPOX、THOUD2S1338、CSF1PO、Penta D、D10S1248、D22S1045、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA、DYS391、Y indel 及性别基因座 Amelogenin ;其特征在于:该试剂盒包括26个基因座对应的引物如下:
2.根据权利要求1所述的ー种同时分析人基因组DNA26个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒，其特征在于:26个基因座对应的引物的浓度为:
3.根据权利要求1或2所述的一种同时分析人基因组DNA26个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒，其特征在于所述的每个基因座对应的引物中至少有一个引物的5’端进行荧光染料标记。
4.根据权利要求3所述的一种同时分析人基因组DNA26个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒，其特征在于所述的荧光染料标记物为蓝色荧光染料6-FAM、绿色荧光染料HEX、黄色荧光染料TAMRA和红色荧光染料标记R0X，内标选用橙色荧光SIZ。
5.根据权利要求4所述的一种同时分析人基因组DNA26个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒，其特征在于将所述26个基因座分组，具体为:D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、D1S1656和Penta E为第一组，该组基因座对应的引物的荧光标记物为6-FAM、HEX、TEMRA 和 ROX 的任意ー种;D2S441、TP0X、THOl、D2S1338、CSF1P0、Penta D 和 D10S1248为第二组，该组基因座对应的引物的荧光标记物为与第一组不同的荧光染料标记物；D22S1045、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043 和 Y indel 为第三组，该组基因座对应的引物的荧光标记物为与第一组和第二组都不同的荧光染料标记物；DYS391、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA，以及性别基因座Amelogenin为第四组，该组基因座对应的引物的荧光标记物为与第一组、第二组和第三组都不同的荧光染料标记物；内标选用橙色荧光标记，荧光标记物为SIZ。
6.根据权利要求1-5任意一种所述的一种同时分析人基因组DNA26个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒，其特征在于所述的试剂盒由如下组成:
7.一种同时分析人基因组DNA26个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒的使用方法，其特征在于按如下步骤实现: A、扩增体系为:
8.根据权利要求7—种同时分析人基因组DNA26个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒的使用方法，其特征在于:电泳采用多道或单道毛细管电泳。
9.根据权利要求7—种同时分析人基因组DNA26个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒的使用方法，其特征在于:其中基因组DNA样品来源于精斑、唾液斑、组织、血痕或血液。
10.一种同时分析人基因组DNA26个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒的应用，其特征在于:该试剂盒用于个体识别、亲子鉴定。
【文档编号】C12Q1/68GK103451311SQ201310439926
【公开日】2013年12月18日 申请日期:2013年9月24日 优先权日:2013年9月24日
【发明者】郑卫国, 卢文翔, 杜蔚安, 卢青, 葛海鹏, 薛佳, 郭育林, 朱丽君 申请人:无锡中德美联生物技术有限公司