对转染质粒进行制备的方法
【专利摘要】本发明公开了对转染质粒进行制备的方法。步骤如下：首先对受体菌进行培养，使其在37摄氏度的环境下振荡培养1-2小时；然后制备感受态细胞，弃上清，悬浮细胞放置冰箱中保存备用；将摇匀后的感受态细胞悬液进行转化，其后在35摄氏度的环境下正面朝上的放置半小时，倒置培养12-13小时；最后进行质粒的抽提，先小提后大提，其中大提的时候，只需要离心一次，且应去除壁上的所有乙醇；所述大提过程中，加入的乙醇为75%-85%；转化的时候，需要加入36摄氏度预热的LB液体培养基。本发明的有益效果是，与预期的结果一致，经抗性筛选后可以获得稳定表达的细胞，而且为将来建立转基因的核供体提供了良好的体细胞。
【专利说明】对转染质粒进行制备的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种实验方法，具体来说，对转染质粒进行制备的方法。
【背景技术】
[0002]转染(transfection)指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染(永久转染)两大类。常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染(永久转染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24-72小时内(依赖于各种不同的构建)分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染，外源DNA既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体(印isome)存在。尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小，大约1/104转染细胞能整合，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶(ΑΡΗ;新霉素抗性基因)，潮霉素B磷酸转移酶(HPH)，胸苷激酶(TK)等反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。转染技术的选择对转染结果影响也很大，许多转染方法需要优化DNA与转染试剂比例，细胞数量，培养及检测时间等。
【发明内容】
[0003]为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案: 对转染质粒进行制备的方法，步骤如下:首先对受体菌进行培养，使其在37摄氏度的环境下振荡培养1-2小时；然后制备感受态细胞，弃上清，悬浮细胞放置冰箱中保存备用；将摇匀后的感受态细胞悬液进行转化，其后在35摄氏度的环境下正面朝上的放置半小时，倒置培养12-13小时；最后进行质粒的抽提，先小提后大提，其中大提的时候，只需要离心一次，且应去除壁上的所有乙醇。
[0004]本发明中，所述大提过程中，加入的乙醇为75%_85%。
[0005]本发明中，转化的时候，需要加入36摄氏度预热的LB液体培养基。
[0006]本发明的有益效果是，与预期的结果一致，经抗性筛选后可以获得稳定表达的细胞，而且为将来建立转基因的核供体提供了良好的体细胞。
【具体实施方式】
[0007]对转染质粒进行制备的方法，步骤如下:首先对受体菌进行培养，使其在37摄氏度的环境下振荡培养2小时；然后制备感受态细胞，弃上清，悬浮细胞放置冰箱中保存备用；将摇匀后的感受态细胞悬液进行转化，其后在35摄氏度的环境下正面朝上的放置半小时，倒置培养12小时；最后进行质粒的抽提，先小提后大提，其中大提的时候，只需要离心一次，且应去除壁上的所有乙醇。所述大提过程中，加入的乙醇为75%。转化的时候，需要加入36摄氏度预热的LB液体培养基。[0008] 以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本【技术领域】的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改 变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.对转染质粒进行制备的方法，其特征在于，步骤如下:首先对受体菌进行培养，使其在37摄氏度的环境下振荡培养1-2小时；然后制备感受态细胞，弃上清，悬浮细胞放置冰箱中保存备用；将摇匀后的感受态细胞悬液进行转化，其后在35摄氏度的环境下正面朝上的放置半小时，倒置培养12-13小时；最后进行质粒的抽提，先小提后大提，其中大提的时候，只需要离心一次，且应去除壁上的所有乙醇。
2.如权利要求1所述的对转染质粒进行制备的方法，其特征在于，所述大提过程中，加入的乙醇为75%-85%。
3.如权利要求1所述的对转染质粒进行制备的方法，其特征在于，转化的时候，需要加入36摄氏度预热的LB液体培养基。
【文档编号】C12N15/79GK103602702SQ201310525136
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年10月31日 优先权日:2013年10月31日
【发明者】徐丽 申请人:徐丽