一种对质粒ｄｎａ进行有效纯化的简易方法
【专利摘要】本发明公开了一种对质粒ＤＮＡ进行有效纯化的简易方法，其特征在于，步骤如下：首先，将需要进行纯化的质粒装至适当的试管中，加入5u;的溶解液消化ＲＮＡ，然后将其混合均匀，在５０摄氏度的环境下热浴１－１.５小时；用１.５倍提及的氯仿抽提蛋白；室温干燥；加二分之一的醋酸钠溶液和三分之一的醋酸钙溶液，摇晃；弃上清保留沉淀即可；所述氯仿中，可以混入等体积的酚；其特征在于，最后弃上清的时候，使用四层纱布。本发明的有益效果是：操作简单，成本较低，实验条件要求不高，可以用于反复性操作，获得预期效果。
【专利说明】一种对质粒D NA进行有效纯化的简易方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生化实验领域，具体涉及一种对质粒D N A进行有效纯化的简易方法。
【背景技术】
[0002]大量提取的质粒DNA —般需进一步纯化，常用柱层析法和氯化铯梯度离心法。常使用的所有纯化方法都利用了质粒DNA相对较小及共价闭合环状这样两个性质。例如，用氯化铯一溴化乙锭梯度平衡离心分离质粒和染色体DNA就取决于溴化乙锭与线状以及与闭环DNA分子的结合量有所不同。溴化乙锭通过嵌入碱基之间而与DNA结合，进而使双螺旋解旋。由此导致线状DNA的长度有所增加，作为补偿，将在闭环质粒DNA中引入超螺旋单位。最后，超螺旋度大为增加，从而阻止了溴化乙锭分子的继续嵌入。但线状分子不受此限，可继续结合更多溴化乙锭，直至达到饱和(每2个碱基对大约结合I个溴化乙锭分子)。由于染料的结合量有所差别，线状和闭环DNA分子在含有饱和量溴化乙锭的氯化铯度中的浮力密度也有所不同。多年来，氯化铯一溴化乙锭梯度平衡离心已成为制备大量质粒DNA的首选方法。然而该过程既昂贵又费时，为此发展了许多替代方法。其中主要包括利用离子交换层析、凝胶过滤层析、分级沉淀等分离质粒DNA和宿主DNA的方法。尽管这些方法大多数均被束之高阁，但其中最好的方法，也应是聚乙二醇分级沉淀法。
【发明内容】
[0003]本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术缺陷，提供一种技术方案:
一种对质粒D N A进行有效纯化的简易方法，步骤如下:首先，将需要进行纯化的质粒装至适当的试管中，加入5u;的溶解液消化RN A，然后将其混合均匀，在5 0摄氏度的环境下热浴I 一 1.5小时；用1.5倍提及的氯仿抽提蛋白；室温干燥；加二分之一的醋酸钠溶液和三分之一的醋酸钙溶液，摇晃；弃上清保留沉淀即可。
[0004]本发明中，所述氯仿中，可以混入等体积的酚。
[0005]本发明中，最后弃上清的时候，使用四层纱布。
[0006]本发明的有益效果是:操作简单，成本较低，实验条件要求不高，可以用于反复性操作，获得预期效果。
【具体实施方式】
[0007]—种对质粒D N A进行有效纯化的简易方法，步骤如下:首先，将需要进行纯化的质粒装至适当的试管中，加入5u;的溶解液消化R NA，然后将其混合均匀，在5 0摄氏度的环境下热浴1 一 1.5小时；用1.5倍提及的氯仿抽提蛋白；室温干燥；加二分之一的醋酸钠溶液和三分之一的醋酸钙溶液，摇晃；弃上清保留沉淀即可。所述氯仿中，可以混入等体积的酚。最后弃上清的时候，使用四层纱布。
[0008]以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本【技术领域】的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或 改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种对质粒D N A进行有效纯化的简易方法，其特征在于，步骤如下:首先，将需要进行纯化的质粒装至适当的试管中，加入5u;的溶解液消化R N A，然后将其混合均匀，在5 O摄氏度的环境下热浴I 一 1.5小时；用1.5倍提及的氯仿抽提蛋白；室温干燥；加二分之一的醋酸钠溶液和三分之一的醋酸钙溶液，摇晃；弃上清保留沉淀即可。
2.如权利要求1所述的一种对质粒DN A进行有效纯化的简易方法，其特征在于，所述氯仿中，可以混入等体积的酚。
3.如权利要求1所述的一种对质粒DN A进行有效纯化的简易方法，其特征在于，最后弃上清的时候，使用 四层纱布。
【文档编号】C12N15/10GK103614363SQ201310536694
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年11月4日 优先权日:2013年11月4日
【发明者】辛竹 申请人:辛竹