禽流感病毒阳性质粒的构建的制作方法
【专利摘要】本发明公开了禽流感病毒阳性质粒的构建，其特征在于，步骤如下：首先提取所需的AIV病毒的ＲＮＡ的提取，至少提前24小时在零下85摄氏度的环境下进行冷藏保存；进行ＰＣＲ反应；然后回收PCR产物，并使其连接至Ｃ载体；筛选出来后设计出上下游引物；一起模版再加入对应的上下游引物；与体系进行ＰＣＲ扩增；零下65－75摄氏度环境下进行保存备用。基因片段需要按照核苷酸序列的顺序设计成含有互补碱基对的核苷酸片段，所述互补碱基对的核苷酸片段需要在等温条件下延伸获得。本发明的有益效果是：操作简单，成本较低，纯度较高，再现性强，数据精确。
【专利说明】禽流感病毒阳性质粒的构建
【技术领域】
[0001]本发明涉及生化实验领域，具体涉及禽流感病毒阳性质粒的构建。
【背景技术】
[0002]禽流感病毒(AIV)属甲型流感病毒。流感病毒属于RNA病毒的正黏病毒科，分甲、乙、丙3个型。其中甲型流感病毒多发于禽类，一些亚型也可感染猪、马、海豹和鲸等各种哺乳动物及人类；乙型和丙型流感病毒则分别见于海豹和猪的感染。一般来说，禽流感病毒与人流感病毒存在受体特异性差异，禽流感病毒是不容易原形毕露的h5nl型禽流感病毒感染给人的。个别造成人感染发病的禽流感病毒可能是发生了变异的病毒。变异的可能性一是两种以上的病毒进入同一细胞进行重组，如猪既可感染人流感病毒，又可能感染禽流感病毒，每种病毒都具有8个基因片段，从理论上讲，可以形成256个新的重组病毒；二是病毒基因位点由于某种因素的影响。美国宾夕法尼亚州曾暴发H5N2型病毒引起的鸡和火鸡低致病性禽流感，由于没有及时得到有效控制，到同年10月份，同样的H5N2型毒株突然由低致病性变成高致病性，造成禽类大量死亡。
【发明内容】
[0003]本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术缺陷，提供一种技术方案:
禽流感病毒阳性质粒的构建，步骤如下:首先提取所需的AIV病毒的RNA的提取，至少提前2 4小时在零下8 5摄氏度的环境下进行冷藏保存；进行P C R反应；然后回收PCR产物，并使其连接至C载体；筛选出来后设计出上下游引物；一起模版再加入对应的上下游引物；与体系进行P C R扩增；零下6 5 - 7 5摄氏度环境下进行保存备用。
[0004]本发明中，基因片段需要按照核苷酸序列的顺序设计成含有互补碱基对的核苷酸片段。
[0005]本发明中，所述互补碱基对的核苷酸片段需要在等温条件下延伸获得。
[0006]本发明的有益效果是:操作简单，成本较低，纯度较高，再现性强，数据精确。【具体实施方式】
禽流感病毒阳性质粒的构建，步骤如下:首先提取所需的AIV病毒的RNA的提取，至少提前2 4小时在零下8 5摄氏度的环境下进行冷藏保存；进行P C R反应；然后回收PCR产物，并使其连接至C载体；筛选出来后设计出上下游引物；一起模版再加入对应的上下游引物；与体系进行P C R扩增；零下6 5 - 7 5摄氏度环境下进行保存备用，基因片段需要按照核苷酸序列的顺序设计成含有互补碱基对的核苷酸片段，所述互补碱基对的核苷酸片段需要在等温条件下延伸获得。
[0007]以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本【技术领域】的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.禽流感病毒阳性质粒的构建，其特征在于，步骤如下:首先提取所需的AIV病毒的RNA的提取，至少提前2 4小时在零下8 5摄氏度的环境下进行冷藏保存；进行P C R反应；然后回收PCR产物，并使其连接至C载体；筛选出来后设计出上下游引物；一起模版再加入对应的上下游引物；与体系进行P C R扩增；零下6 5 — 7 5摄氏度环境下进行保存备用。
2.如权利要求1所述的禽流感病毒阳性质粒的构建，其特征在于，基因片段需要按照核苷酸序列的顺序设计成含有互补碱基对的核苷酸片段。
3.如权利要求1所述的禽流感病毒阳性质粒的构建，其特征在于，所述互补碱基对的核苷酸片段需要在等温条件下延伸获得。
【文档编号】C12N15/66GK103614401SQ201310537920
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年11月5日 优先权日:2013年11月5日
【发明者】辛竹 申请人:辛竹