一株克里本类芽孢杆菌及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一株克里本类芽孢杆菌及其菌剂的制备方法和应用。本发明所提供的克里本类芽孢杆菌，其拉丁名为Paenibacillus?kribbensis，菌种代号为TRCC82001，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为：CGMCCNo.7996。本菌株生产性状好，代谢产物抑菌效果好；同时对水稻稻瘟病、纹枯病抑菌活性强，发酵液经无菌处理后稀释100倍对水稻稻瘟病、纹枯病的抑制效果均在80％以上。而且，该菌株及其代谢产物抑菌谱广，可用于制备广谱性抑制病原真菌的生防制剂，防治植物真菌病害。
【专利说明】一株克里本类芽孢杆菌及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于生物技术防治领域,具体涉及一株克里本类芽孢杆菌(Paenibacilluskribbensis)及其菌剂的制备和在抑制病原真菌与防治植物真菌病害中的应用。
【背景技术】
[0002]植物病害是现代农业生产中，对植物产量产生影响的因素，据FAO资料，全世界每年因植物遭受病害侵袭导致的损失占作物生产总量的10% -15%，随着农业种植产业结构的调整，农作物病害的控制与防治越来越为人们所重视。植物病原真菌引起的植物病害为植物三大病害之首，占所有植物病害的70%。一些农作物主要发生的病害如水稻稻瘟病、水稻纹枯病；小麦锈病、小麦白粉病；玉米大、小斑病、纹枯病；蔬菜霜霉病等，以及农作物采收后和贮存期发生的病害多为真菌性病害。长期以来，防治植物病害所使用的农药大多是化学杀菌剂，且杀菌剂品种单一，植物病原菌对不少品种已产生了严重的抗性。此外，由于长期大量使用少数几种杀菌剂，致使土壤中农药残毒积累，导致环境污染，破坏了土壤和植物体内的微生物平衡，使得植物病害发生更为频繁，甚至影响人类的身体健康。因此迫切需要开发具有不同作用机理的、结构新颖、安全有效环保的杀菌剂，尤其是“无公害食品”生产的生物源杀菌剂。
[0003]克里本类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)属于原核生物界,厚壁菌门，杆菌纲，芽孢杆菌目，芽孢杆菌科，类芽孢杆菌属。通过研究发现该菌株在培养过程中能产生胞外抑菌物，对供试的13种植物病原真菌都有抑生长活性，抗菌谱广，对稻瘟病、水稻纹枯病病原菌较为敏感，是一株具有研究和开发应用前景的生防菌株。关于克里本类芽孢杆菌的抗真菌生物活性物质的研究报道较少。本发明报道了一株具有农用生物活性的克里本类芽孢杆菌。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供一株新的克里本类芽孢杆菌，该菌株经过发酵后产生具有强烈地、广谱地抑制病原真菌的活性代谢产物，该菌株及其活性代谢产物可用于制备广谱抑制病原真菌的生防制剂，用于防治植物真菌病害。
[0005]本发明所提供的克里本类芽孢杆菌菌株是(Paenibacillus kribbensis)TRCC82001，菌株于2013年8月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为:CGMCC N0.7996。
[0006]本发明另提供一种生防制剂，该生防制剂的活性成分为所述的克里本类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)TRCC8200ICGMCC N0.7996 的代谢产物，或 / 和所述克里本类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis) TRCC8200ICGMCC N0.7996。所述的代谢产物是从克里本类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)TRCC8200ICGMCC N0.7996 的菌体发酵液中
获得。
[0007]本发明中所述的生防制剂分为三种:生防制剂1，菌体与代谢物的混合制剂，是所述克里本类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)TRCC8200ICGMCC N0.7996 的发酵液，内含有述克里本类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)TRCC8200ICGMCC N0.7996 菌体及其代谢物；生防制剂2,菌体,是所述克里本类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)TRCC8200ICGMCC N0.7996的菌体，包括营养体和芽孢；生防制剂3，代谢产物，是所述克里本类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)TRCC8200ICGMCC N0.7996 的无菌发酵液。
[0008]本发明的所述的生防制剂具体按照以下A)或B)的方法获得:
[0009]A)将所述克里本类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)TRCC8200ICGMCCN0.7996用改良的固体察氏培养基II活化后挑取单菌落或菌苔接种到装量为摇瓶20%-30%体积的改良的液体察氏培养基II中。30摄氏度，180r / min振荡培养84小时，所获得的发酵液即为所述生防制剂I。
[0010]B)将所述克里本类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)TRCC8200ICGMCCN0.7996用改良的固体察氏培养基II活化后挑取单菌落或菌苔接种到装量为摇瓶20%-30%体积的改良的液体察氏培养基II中。30摄氏度，180r / min振荡培养84小时，将所获得的发酵液进行离心分离，获得上清液与固体沉淀。所获得的固体即为所述生防制剂2 ;上清液经灭菌即为所述生防制剂3。
[0011]所述改良的察氏培养基II配方如下:
[0012]
【权利要求】
1.一株克里本类芽孢杆菌，其拉丁名为Paenibacillus kribbensis,菌种代号为TRCC82001，该菌株于2013年8月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为:CGMCC N0.7996。
2.一种生防制剂，其活性成分为权利要求1所述的克里本类芽孢杆菌，其拉丁名为Paenibacillus kribbensis，菌种代号为 TRCC82001，其保藏号为 CGMCC N0.7996 的代谢产物和/或权利要求1所述的克里本类芽孢杆菌，其拉丁名为Paenibacillus kribbensis,菌种代号为TRCC82001，保藏号为:CGMCC N0.7996。
3.根据权利要求2所述的生防制剂，其特征在于:所述生防制剂为下述I)-2)中的任一生防制剂: 1)用于防治植物真菌病害的生防制剂； 2)用于抑制病原真菌的生防制剂。
4.权利要求1所述的克里本类芽孢杆菌,其拉丁名为Paenibacilluskribbensis,菌种代号为TRCC82001，保藏号为:CGMCC N0.7996，其在制备下述I)-2)中任一生防制剂中的应用: 1)用于防治植物真菌病害的生防制剂； 2)用于抑制病原真菌的生防制剂。
5.根据权利要求3所述的生防制剂或权利4所述的应用，其特征在于:所述病原真菌为下述中至少一种:水稻纹枯病，其拉丁名为Thanatephorus cucumeris (Frank)Donk、小麦根腐病，其拉丁名为 Drechslera SoFokiniana(Sacc.) Subram.Gain、稻痕病，其拉丁名为 Phyricularia gri sea (Cooke) Sacc.、蒸枝炭疽病，其拉丁名为 Colletotrichumlitch1、玉米大斑病菌，其拉丁名为Exerohilum turcicum、玉米小斑病菌，其拉丁名为Helminthosporium maydis、玉米黄斑病菌，其拉丁名为Curvularia lunata、玉米基莖腐病菌，其拉丁名为Fusarium graminearum、棉花黄萎病菌，其拉丁名为Verticilliumdahliae、西瓜枯萎病菌，其拉丁名为Fusarium oxysporum f.sp.niveum、辣椒炭疽病菌，其拉丁名为Colletotrichum capsic1、白菜黑斑病菌，其拉丁名为Alternariabrassicae (Berk.) Sace.、葱紫斑病菌，其拉丁名为 Alternaria porri (Ell.) Cifferri。
6.权利要求2、3或5所述生物制剂的制备方法，包括如下步骤:将所述克里本类芽孢杆菌，其拉丁名为Paenibacillus kribbensis，菌种代号为TRCC82001，保藏号为:CGMCCN0.7996的代谢产物，或/和所述克里本类芽孢杆菌，菌种代号为TRCC82001，保藏号为:CGMCC N0.7996作为活性成分，得到所述生物制剂。
【文档编号】C12R1/01GK103756931SQ201310643992
【公开日】2014年4月30日 申请日期:2013年12月5日 优先权日:2013年12月5日
【发明者】梁小文, 王根豪, 陈晓燕, 廖美德, 范志金, 周立峰, 李肖宇, 马忠岩, 曾繁富, 肖筱成, 熊建生, 曾升华, 吴俊杰, 钱凤, 朱湘盛 申请人:江西天人生态股份有限公司