克隆苹果bki1基因和苹果bki1基因编码区序列的方法
【专利摘要】本发明公开了克隆苹果BKI1基因和苹果BKI1基因编码区序列的方法。苹果BKI1基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，编码区序列如SEQIDNO:2所示，编码区序列编码氨基酸序列如SEQIDNO:3所示。苹果BKI1基因及其基因编码区序列的克隆方法，包括如下步骤：1）提取苹果叶片中的总DNA；2）提取苹果叶片中的总RNA反转录成cDNA；3）通过设计的特定引物对苹果的总DNA及cDNA分别进行PCR扩增反应；4）PCR产物回收和纯化；5）克隆，测序。本发明简单快捷的获取了苹果BKI1基因及其完整编码区序列，填补了该基因在苹果基因组注释上的空白，为研究苹果的矮化特性提供理论参考。
【专利说明】克隆苹果BKM基因和苹果BKM基因编码区序列的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物【技术领域】，尤其是苹果BKIl基因和克隆苹果BKIl基因编码区全长序列的方法。
【背景技术】
[0002]油菜素内酯是一类对植物生长起调节作用的激素类物质，在调控植物茎的伸长、维管束分化、光合作用、育性以及植株对逆境的抵抗能力等方面起重要作用。
[0003]油菜素内酯不敏感受体I激酶抑制子I (Brassinosteroids-1nsensitive Ikinase inhibitor I, BKI1),是富含亮氨酸的激酶,其作用是与油菜素内酯不敏感受体I(BRIl)生成二聚体，阻断油菜素内酯信号转导途径。在拟南芥中过表达BKIl的转基因植株表现为矮化。
[0004]苹果是世界性果树，其产量名列果品的前三名。我国是苹果生产大国，栽培面积约2000万亩，产量超过2985万吨，面积和产量均居世界第一位。随着苹果产业的逐年扩大和集约化生产的需要，培养矮化新品种是目前苹果产业的育种目标之一。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种克隆苹果BKIl (BRII kinase inhibitor I)基因及苹果BKIl基因编码区全长序列的方法 。
[0006]本发明提供的苹果BKIl基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0007]上述的苹果BKIl基因，其编码区序列如SEQ ID N0:2所示。
[0008]上述的苹果BKIl基因，其编码区序列的编码氨基酸如SEQ ID NO: 3所示。
[0009]上述的苹果BKIl基因，所述的苹果为“寒富”苹果。
[0010]上述的苹果BKIl基因的制备方法，包括如下步骤:
[0011]I)提取苹果叶片中的总DNA ;
[0012]2)提取苹果叶片中的总RNA，然后将总RNA反转录成cDNA ；
[0013]3)分别以DNA及cDNA为模板，通过设计的特定引物，利用PCR方法扩增，得到PCR产物；
[0014]其中，所述的特定引物是:
[0015]上游引物P1:5 ’ -ATGGAGTCGTCGAGGACGAG-3 ’ ；
[0016]下游引物P2:5 ’ -TCAAATCTCATGACTGACCA-3 ’ ；
[0017]PCR反应体系为:20 μ L体系:
[0018]
【权利要求】
1.苹果BKIl基因，其特征在于:其基因序列如SEQID NO:1所示。
2.根据权利要求1所述的苹果BKIl基因，其特征在于，所述苹果BKIl基因的编码区序列如SEQ ID NO:2所示。
3.根据权利要求2所述的苹果BKIl基因，其特征在于，所述苹果BKIl基因编码区序列的氨基酸序列如SEQ ID N0:3所示。
4.根据权利要求1、2或3所述的苹果BKIl基因，其特征在于:所述的苹果为“寒富”苹果O
5.权利要求1所述的苹果BKIl基因的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: 1)提取苹果叶片中的总DNA； 2)提取苹果叶片中的总RNA，然后将总RNA反转录成cDNA； 3)分别以DNA和cDNA为模板，通过设计的特定引物，利用PCR方法扩增，得到PCR产物； 其中，所述的特定引物是: 上游引物 P1:5 ’ -ATGGAGTCGTCGAGGACGAG-3，； 下游引物 P2:5’ -TCAAATCTCATGACTGACCA-3’ ； 4 )PCR产物经回收、纯化，克隆，测序分别得到DNA序列如SEQ ID NO:1所示的苹果BKII基因序列及cDNA序列如SEQ ID N0:2所不的苹果BKIl基因编码区序列。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤3)中，PCR反应体系为:20μ?体系:
7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于:所述的苹果为“寒富”苹果。
【文档编号】C12N15/10GK103642822SQ201310672331
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2013年12月7日 优先权日:2013年12月7日
【发明者】马跃, 张志宏, 阎忠业, 吕天星, 刘志, 王冬梅, 张景娥, 王丰, 张蕾, 代红艳, 李贺, 刘月学 申请人:沈阳农业大学, 辽宁省果树科学研究所