一种肉及肉制品中沙门氏菌活菌dna检测的前处理方法
【专利摘要】本发明公开了一种检测肉及肉制品中沙门氏菌活菌DNA的前处理方法。本方法先对肉及肉制品进行处理：在处理后的样品中加入PMA，控制PMA终浓度为15μg/mL，充分混匀后暗处孵育3min；置于500w卤钨灯下20cm处光照3min；提取处理后样本的基因组DNA；以提取的样本基因组DNA为模板，进行实时荧光PCR定量检测样本中的沙门氏活菌。该方法可针对肉及肉制品基质中的致病性活菌进行快速检测，避免了食品基质浊度和细菌污染背景值的干扰，提高了检测的有效性。
【专利说明】—种肉及肉制品中沙门氏菌活菌DNA检测的前处理方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种沙门氏菌的检测方法，特别是涉及一种肉及肉制品中沙门氏活菌的检测方法。
【背景技术】
[0002]基因检测是致病菌的快速检测方法之一，但目前无法识别活菌与死菌，降低了致病菌检测的有效性。因为只有“活”的病菌才能保留原菌的毒力和致病性，才对食品安全构成潜在的威胁。而经过高温、紫外线等各种途径灭活的“死”病菌已经丧失原菌毒力和致病性，并不会威胁到食品安全。因此病原菌检测关键是要区分“活”菌与“死”的菌。研究区分活菌与死菌的检测方法是有效检测致病菌的关键环节与技术。
[0003]由于“活性菌”定义的不统一，检测细菌活性的方法也较多，其检测的优缺点见下表。
【权利要求】
1.一种肉及肉制品中沙门氏菌活菌DNA检测的前处理方法，其特征在于，包括如下步骤:(1)样本制备:样本粉碎后，用10倍的生理盐水均质拍打5min，3000r/m离心，取上清液500KL于1.5mL尚心管中备用；(2)PMA处理:在上述500μ?上清液中，加入PMA工作液，暗处孵育，置于卤钨灯下照射；(3)样本DNA提取:将ΡΜΑ处理液按照一般的DNA提取方法进行操作；(4)以步骤(3)提取的样本基因组DNA为模板，进行实时荧光PCR定量检测样本中的沙门氏活菌。
2.根据权利要求1所述的一种肉及肉制品中沙门氏菌活菌DNA检测的前处理方法，其特征在于:步骤(2)中ΡΜΑ处理的终浓度为10-15Pg/mL。
3.根据权利要求1所述的一种肉及肉制品中沙门氏菌活菌DNA检测的前处理方法，其特征在于:步骤(2)中暗处孵育的时间为3min，卤钨灯照射处理方法为:PMA处理液置于500 w齒鹤灯下20cm处光照3min。
4.根据权利要求1所述的一种肉及肉制品中沙门氏菌活菌DNA检测的前处理方法，其特征在于:步骤(3)样本DNA提取方法包括酚/氯仿法或煮沸法。
【文档编号】C12R1/42GK103667493SQ201310690144
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月17日 优先权日:2013年12月17日
【发明者】李苏龙, 徐义刚, 鞠文东, 程成, 刘忠梅, 肖性龙 申请人:黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心