用于不断富集由微藻产生的、具有dha乙酯的一种油的方法

用于不断富集由微藻产生的、具有dha乙酯的一种油的方法
【专利摘要】本发明涉及一种用于制备由发酵微生物产生的、富含DHA乙酯的油的方法，其特征在于所述方法包括通过所谓的“短路径”分子蒸馏进行的纯化步骤。CNCM I-446920110414
【专利说明】用于不断富集由微藻产生的、具有DHA乙酯的一种油的方 法
[0001] 本发明涉及一种连续方法，该方法使得在工业上能够获得一种油，该油富含来自 微藻的一种天然脂肪酸：二十二碳六烯酸或DHA的乙酯。
[0002] 更具体地，本发明涉及从一种微藻衍生的油生产富含DHA乙酯的一种油，该微藻 衍生的油最初：
[0003]-中等富含DHA并且
[0004]-包含大量的不可皂化的、基本由角鲨烯组成的化合物。
[0005] 为了本发明的目的，术语"微藻衍生的油"旨在意指从破囊壶菌目 (Thraustochytriales sp.)家族的微藻提取的油。
[0006] 为了本发明的目的，术语"破囊壶菌目家族的微藻"旨在意指属于裂殖壶 菌属（Schizochytrium sp.)、澄黃壶菌属（Aurantiochytrium sp.)和破囊壶菌属 (Thraustochytrium sp.)物种的微藻。
[0007] 为了本发明的目的，术语"中等富含DHA的油"旨在意指包含按总脂肪酸的质量计 30%至45%的DHA的一种油（为了简化，使用了术语总脂肪酸的"重量"）。
[0008] 为了本发明的目的，表述"包含大量的不可皂化的、基本由角鲨烯组成的化合物的 油"同样旨在意指包含按不可皂化的化合物的重量计约10%至30%、包括15%至25%的角 鲨烯的一种油。
[0009] 最后，表述"使一种油富含衍生自微藻的DHA乙酯"旨在意指一种方法，该方法使 得能够将该油的DHA含量增加到1. 5至2倍，在这种情况下从最初的按总脂肪酸的重量计 30%和45%之间的DHA含量到具有按总脂肪酸的重量计60%和70%之间的DHA的DHA乙 酯含量的一种油。
[0010] 脂质与蛋白质和碳水化合物一起构成了大量营养元素的三个主要家族。
[0011] 在脂质中，甘油三酸酯和磷脂是特别突出的。
[0012] 甘油三酸酯代表大约95%的摄取的食物脂质。在生物中，它们主要存在于脂肪组 织并构成能量存储的主要形式。
[0013] 磷脂是结构性脂质，因为他们是细胞膜的组分，在细胞膜中它们尤其提供流动性。
[0014] 甘油三酸酯和磷脂主要由脂肪酸组成，它们都是由饮食提供，对于它们中的一些， 是由生物合成的。
[0015] "必需"多不饱和脂肪酸的饮食来源是植物油（即和脂肪酸）以及特别包 含大量《 3脂肪酸的鱼油。
[0016] 多不饱和脂肪酸是根据第一双键的位置（从最终甲基官能开始）归类的。
[0017] 因此，在命名中对于《 "x"或"nx"，"x"对应于第一不饱和的位置。
[0018] 生物学上感兴趣的多不饱和脂肪酸的大部分属于《6(花生四烯酸或ARA)或 ? 3 (二十碳五烯酸或EPA，二十二碳六烯酸或DHA)家族。
[0019] 此外，在命名中，构成该链的碳的数目也被定义：从而EPA被描述为C20:5并且 DHA被描述为C22:6。
[0020] 该"5"和"6"从而对应于该碳链的不饱和数目，该碳链分别由EPA和DHA呈现。
[0021] ? 3脂肪酸家族的DHA是生物可以从a -亚麻酸合成的或通过消耗脂质鱼（金枪 鱼、鲑鱼、鲱鱼等）提供的一种脂肪酸。
[0022] DHA在膜结构中以及在脑和视网膜发育和功能中发挥重要作用。
[0023] 鱼油主要用作《 3型脂肪酸例如DHA和EPA的来源，但DHA和EPA也在微藻的油 (从其中它们是作为一种混合物或分开地提取的）中看到，如在这种情况下，例如该油衍生 自某些选择的菌株，例如裂殖壶菌属的那些，其仅包含痕量的EPA，但包含高DHA含量。
[0024] 用于使鱼油富含DHA和/或EPA的常规方法基于针对该油的长链的组分脂肪酸或 其饱和度的选择性。
[0025] 第一必要的是分离连接到甘油酯骨架的脂肪酸，为了能够随后分离DHA和/或EPA 链。
[0026] 从该甘油链分离这些脂肪酸的操作是通过乙醇转酯（乙醇分解）进行的。
[0027] 最常见地随后使用的针对这样的脂肪酸或其酯实施的富集方法是：
[0028] _ 结晶、
[0029]-逆流萃取、
[0030]-分子蒸馏、或
[0031] _制备型层析。
[0032] 通常，为了获得有力的富集，会将各种方法进行组合。
[0033] 然而，这些方法具有以下缺点：
[0034] _高温富集方法引起脂肪酸的热降解（异构化、过氧化、低聚化）。
[0035] _层析技术的缺点是保留大量常常是有毒的溶剂的使用。
[0036] 此外，使用这些技术的大规模生产常常极不易。
[0037] 因为这些原因，已经开发和研究了替代方法，所述方法基于使用超临界流体，特别 是通过用超临界C0 2进行的分级方法。
[0038] 在使用超临界C02使鱼油富含DHA和/或EPA之前使用的一个步骤是使用甲醇或 乙醇对这些脂肪酸进行转酯。
[0039] 使用超临界C02将脂肪酸的乙酯分级的方法已经例如在文献中充分地描述。
[0040] 然而，应注意大部分引用的方法尤其描述了联合富集EPA和DHA乙酯，而不仅是 DHA。
[0041] 此外，这些方法的绝大多数：
[0042] _是分批方法，
[0043] -过度地使用大量的超临界流体，
[0044] _具有低产率，
[0045] -并且最后具有低生产力。
[0046] 此外，在许多情况下，柱中应用的100°C温度可引起脂肪酸降解。
[0047] 应用的压力也太强，并且降低它们直接导致超临界C02的消耗增加。
[0048] 换句话说，这些方法在经济上可行的条件下不可用于工业规模。
[0049] 一种用于使鱼油富含EPA和DHA乙酯的方法是例如描述于专利申请JP 2005-255971〇
[0050] 温度与压力范围分别是从35°C至200°C和从100X 105Pa至500X 105Pa。
[0051] 作者建议为了获得高含量进行两次连续提取。
[0052] 第一次提取是在原料上进行，并且第二次提取在来自第一次操作的残余物上进 行。
[0053] 使用的柱是3m高，直径是50mm。它包括6个不同的加热室。
[0054] 用于获得高DHA百分比的、定义为超临界C02的流速与所处理的油的流速的比率 的溶剂水平保持高水平。
[0055] 这两次连续提取液使该方法复杂并使它不可在工业上应用。
[0056] 似乎，在阅读这些元素时，使用超临界流体使油富集脂肪酸的技术是优选的选择， 但仍需要优化研究。
[0057] 如上所述，《 3脂肪酸的另一个来源是微藻。
[0058] 然而，在来自微藻的油的领域中该情况更加复杂，因为存在另外的困难，这与来自 微藻的油中不可皂化的化合物的存在有关。
[0059] 因此，尽管通常在鱼油上进行的转酯操作不构成任何重大技术问题，对于来自微 藻的油这变得有问题，因为大规模的粗制油转酯从实用的观点上看实际上是不可能的。
[0060] 这种技术不可能性和可变（但通常是高的）含量的不可皂化的化合物（例如角鲨 烯）的存在有关。
[0061] 因此，显著损失可利用化合物受到批判。
[0062] 角鲨烯是在医药、美容和饮食上感兴趣的一种多不饱和的烃，特别存在于来自微 藻的油中。
[0063] 其中发现按某些选择的菌株（例如裂殖壶菌属的那些）的质量计的超过15%的可 变含量（时常是高的）。
[0064] 在现有技术中，已知如果目的是从该油中提取该角鲨烯并且随后生产仅包含痕量 的角鲨烯的一种油的话，角鲨烯可从脂质（基本上由甘油三酸酯组成）例如通过分子蒸馏 而花费几个连续步骤获得。
[0065] 因为所有来自微藻的油的组分对热特别敏感，这种方法常规地必须在非常强的真 空下进行，考虑到其非常低的生产力，需要配备非常大的容积。
[0066] 因此，可建议提出其他方法：
[0067]-更高效的（如果希望的是使用分子蒸馏而不是常规实施的操作的话）的方法，或 [0068]-在中等温度下操作并确保保护对氧化非常不稳定的不饱和的产物和空气没有任 何接触，而同时可以容易地工业化直到每年加工成百上吨所处理的油的能力。
[0069] 就本 申请人:公司的知识所及，目前对于本领域的普通技术人员来说没有可得的用 于使用微藻通过分子蒸馏技术使油富集DHA乙酯的高效和可工业化的方法。
[0070] 关于开发用于富集由微藻产生的DHA的高效方法，本 申请人:公司已经开发了它自 身的研究并已成功改进分子蒸馏技术以确保富集超过两倍的初始油的含量的DHA。
[0071] 本发明因此涉及一种用于制备富含由发酵微生物产生的DHA乙酯的油的方法，其 特征在于它包括通过"短路径"分子蒸馏进行的纯化步骤。
[0072] 这些微生物优先地是属于破囊壶菌目家族的微藻，甚至更优先地是属于裂殖壶菌 属、橙黃壶菌属和破囊壶菌属物种的微藻。
[0073] 分子蒸馏的实施
[0074] 在根据本发明的用于制备富含DHA乙酯的油的方法中，实施了一种方法，其特征 在于所述方法包括以下步骤：
[0075] 1)通过发酵破囊壶菌目家族的微藻制备包含以下物质的混合物的粗制油：富含 DHA的甘油三酸酯和基本上由角鲨烯组成的不可皂化的化合物，
[0076] 2)任选地通过脱胶、脱酸、褪色和脱臭的一系列步骤，精炼所得到的粗制油，
[0077] 3)通过"短路径"分子蒸馏提取该角鲨烯，以获得不含角鲨烯的提余液，
[0078] 4)在碱性或酶催化剂、优选酶催化剂的存在下通过醇转酯将所得到的提余液进行 转酯，
[0079] 5)通过"短路径"分子蒸馏将步骤4)中的脂肪酸酯的混合物进行分级，以获得富 含短链脂肪酸酯的提取物以及极富含长链脂肪酸酯的提余液，
[0080] 6)通过"短路径"分子蒸馏将步骤5)中获得的长链脂肪酸酯的混合物进行纯化， 以获得极富含长链酯的不含杂质的提取物，
[0081] 7)任选地，通过褪色和脱臭的一系列步骤，精炼极富含长链酯级分的该提取物，
[0082] 8)收集所得到的富含DHA乙酯的化合物。
[0083] 根据本发明的这种方法的第一步在于通过发酵破囊壶菌目家族的微藻制备包含 以下物质的混合物的粗制油：富含DHA的甘油三酸酯和基本上由角鲨烯组成的不可皂化的 化合物。
[0084] 作为属于破囊壶菌目家族的微藻，例如以下菌株是可商购的：
[0085]-裂殖壶菌，参考号为ATCC 20888，
[0086]-橙黃壶菌，参考号ATCC PRA 276，
[0087] 此外，本 申请人:公司还拥有自己生产的菌株，裂殖壶菌，于2011年4月14日保 藏在法国巴斯德研究所的国家微生物保藏中心[Collection Nationale de Cultures de Microorganismes]，保藏号为CNCMI-4469,并且还保藏在中国武汉大学的中国典型培养物 保藏中心，中国武汉，430072,保藏号为M 209118。
[0088] 该培养在异养条件下进行。总的来讲，该培养步骤包括预培养步骤（为了使该菌 株复苏），并且然后是实际培养或发酵步骤。后一步骤对应于生产感兴趣的脂类化合物的步 骤。
[0089] 用于培养这些微藻的条件在本领域是熟知的。然后处理该生物质以获得包含DHA 和基本上由角鲨烯组成的不可皂化的化合物的混合物的粗制油。
[0090] 此外，这些处理可以通过本领域普通技术人员已知的任何方法进行。
[0091] 这使得能够获得由甘油酯（主要是甘油三酸酯）和不可皂化的化合物（主要是角 鲨烯）和任选的较低比例的游离脂肪酸和磷脂组成的粗制油。如将在后文示例的，可从上 述的CNCM 1-4469菌株容易地获得按总脂肪酸的重量计30%和45 %之间的DHA和按重量 计10%和30%之间的不可皂化的化合物（包括15%至25%角鲨烯）的含量。
[0092] 根据本发明的这种方法的第二步在于任选地通过脱胶、脱酸、褪色和脱臭的一系 列步骤，精炼所得到的粗制油。
[0093] 因此，在提取角鲨烯之前，事先将富含角鲨烯的粗制油经历粗精炼。
[0094]可设想以下步骤中的一个或多个：
[0095] _脱胶：在酸性介质中通过沉淀去除磷脂，
[0096] _脱酸：使用碱中和这些游离脂肪酸。为了避免夹带角鲨烯，似乎应禁用用于去除 该游离脂肪酸的分子蒸馏的使用，
[0097] _褪色：通过用活性炭处理，
[0098]-脱臭（真空蒸馏、汽提等）。
[0099] 这些精炼步骤是在植物油的精炼中专业人士常用的步骤。
[0100] 根据本发明的这种方法的第三步在于通过"短路径"分子蒸馏提取该角鲨烯，以获 得不含角鲨烯的提余液。
[0101] 该粗制的（或部分纯化的）油的角鲨烯是通过分子蒸馏提取的。
[0102] 对于少于0. 1毫巴的真空，该角鲨烯的沸点是大约200°C。
[0103] 这种高真空使得能够限制该温度并且因此限制该角鲨烯以及这些多不饱和脂肪 酸的降解/聚合风险。
[0104] 该 申请人:公司已发现，重要的是在该设备上将滞留时间调节到少于1分钟的非常 短的时间。在本申请中，通常优选理解的是，"短路径"意指少于1分钟的接触时间。
[0105] 从而从氮惰性进料池中，通过用恒温器控制的在从25°C到150°C范围中的一个第 一回路将该油泵到排气器（去除水和溶剂的痕迹）。
[0106] 在排气器出口，将该油泵入（"短路径"）蒸发室以通向用恒温器控制的在从50°C 至lj 150°C、优选从100°C到140°C、特别是大约120°C的温度范围中的一个回路。
[0107] 在从150°C到250°C、优选从200°C到240°C、特别是大约220°C的范围中调节该蒸 发器的温度。
[0108] 在从0到50°C、优选10°C和30°C之间、特别是大约20°C的温度范围中调节该冷凝 器。
[0109] 将该蒸发室中的压力调节到少于1(T2毫巴、优选少于1(T3毫巴的高真空。
[0110] 通过这些收集回路将主要包含角鲨烯的蒸馏物和主要包含甘油三酸酯的残余物 运送到惰性的储存槽中。
[0111] 该提余液中的角鲨烯含量少于5 %，优选少于2 %。
[0112] 去除角鲨烯使得能够获得感兴趣的纯化的级分（富含DHA的甘油三酸酯）（提余 液），然后其可进入用于富集处于乙酯形式的DHA的操作的链中。
[0113] 该提余液具有包含按重量计的大约40 %的DHA的氨基酸谱。
[0114] 根据本发明的这种方法的第四步在于在碱性或酶催化剂、优选酶催化剂的存在下 通过醇转酯将所得到的提余液进行转酯。
[0115] 为了能够富集DHA，必要的是分离连接到甘油酯骨架的脂肪酸，为了能够随后分离 DHA 链。
[0116] 从该甘油链分离这些脂肪酸的操作是优先通过酶促乙醇转酯（乙醇分解）进行 的。
[0117] 该转化伴随着甘油的释放。
[0118] 酶促乙醇分解是用来自诺维信公司的商业酶N 435(南极假丝酵母（Candida antartica))在50°C以化学计量比例的乙醇分批操作进行的。
[0119] 在这些条件下，在大约8h的反应中获得大于90%的转化度。
[0120] 在反应结束时，这些脂肪酸主要分布在转化为乙酯（超过90 % )的级分中，剩下的 保持残余的甘油酯（单-二-三甘油酸酯）的形式。
[0121] 在进行乙酯的分级之前，使在酶转化结束时的反应混合物经历过滤步骤，以提取 该酶。
[0122] 通过沉析或离心分离该甘油。还可将该混合物用水洗涤，以去除残余的甘油。
[0123] 如果乙醇的残余浓度高，可在真空下通过蒸发去除后者。
[0124] 根据本发明的这种方法的第五步在于通过"短路径"分子蒸馏将步骤4)中获得的 脂肪酸酯的混合物进行分级，以获得富含短链脂肪酸酯的提取物以及极富含长链脂肪酸酯 的提余液。
[0125] 如步骤4中所述获得的乙酯的混合物具有对应于起始的油并且因此除了感兴趣 的DHA之外还包括脂肪酸的脂肪酸谱。
[0126] 该分级操作的目标是去除具有短于（〈C 22)DHA的链的最大量的脂肪酸。
[0127] 用来进行这一操作的蒸馏技术利用了这些乙酯的挥发性上的不同（这取决于它 们的分子量以及它们的脂肪链的长度）。
[0128] 如以上解释的，高真空以及还有该技术的非常短的滞留时间（少于一分钟）使得 能够限制该温度并且因此限制这些多不饱和脂肪酸的降解/聚合风险。
[0129] 对于少于0. 1毫巴的真空，这些乙酯的沸点通常在250°C以下的温度范围内。
[0130] 该操作实际上以两步进行：
[0131] _分子蒸馏的第一步是照这样的分级，目标是分离该"短链"乙酯级分，以相对于多 不饱和脂肪酸浓缩该残余物，
[0132] -第二步代替地是纯化步骤，在此意义上，相对于多不饱和脂肪酸浓缩的乙酯是从 重杂质（残余的甘油酯、留醇、颜料、不可皂化的化合物等）分离的。
[0133] 从氮惰性进料池中，通过用恒温器控制的在从25°C到100°C、例如从70°C到 100°C、特别地大约100°C范围中的一个第一回路将从该乙醇分解中得到的混合物送到排气 器（去除乙醇的痕迹）。
[0134] 在排气器出口，通过用恒温器控制的在从50°C到100°C、例如从70°C到90°C、特别 是大约85°C的温度范围中的一个回路将该油泵入（"短路径"）蒸发室。
[0135] 将该蒸发室中的压力调节到少于1(T2毫巴、优选少于1(T3毫巴的高真空。
[0136] 在从0到50°C、优选10°C和30°C之间、特别是大约20°C的温度范围中调节该冷凝 器。
[0137] 在从100°C到200°C、优选100°C和150°C之间、特别是大约110°C的范围中调节该 蒸发器的温度。
[0138] 调节该温度以获得一种提余液/馏出物，重量比率对应于理论预测，允许优化多 不饱和脂肪酸纯度和产率的分离。
[0139] 通过这些收集回路将主要包含"短链"乙酯的馏出物和主要包含"长链"乙酯的提 余液以及还有杂质运送到惰性的储存槽中。
[0140] 该提余液中的DHA乙酯含量（重量百分比）是大于45%，优选大于50%。
[0141] 该馏出物中的DHA含量少于20%，优选少于10%。
[0142] 根据本发明的这种方法的第六步在于通过"短路径"分子蒸馏将步骤5)中获得的 长链脂肪酸酯的混合物进行纯化，以获得极富含长链酯的不含杂质的提取物。
[0143] 从氮惰性进料池中，通过用恒温器控制的在从25°C到100°C、优选从70°C到 100°C、特别地大约KKTC范围中的一个第一回路将在步骤5)结束时获得的提余液送到排 气器。
[0144] 在排气器出口，通过用恒温器控制的在从50°C到150°C、例如从70°C到90°C、特别 是大约85°C的温度范围中的一个回路将该油泵入（"短路径"）蒸发室。
[0145] 将该蒸发室中的压力调节到少于1(T2毫巴、优选少于1(T3毫巴的高真空。
[0146] 在从0到50°C、优选10°C和30°C之间、特别是大约20°C的温度范围中调节该冷凝 器。
[0147] 在从100°C到250°C、优选180°C和220°C之间、特别是大约200°C的范围中调节该 蒸发器的温度。调节该温度以获得一种残余物/馏出物，重量比率对应于理论预测，允许高 效分尚杂质。
[0148] 通过这些收集回路将主要包含纯化的"长链"乙酯的馏出物和包含杂质的残余物 运送到惰性的储存槽中。
[0149] 该馈出物中的DHA乙酯含量（重量百分比）是大于50%，优选大于55%。
[0150] 该残余物中的DHA含量少于30%，优选少于20 %。从而该残余物浓缩了这些杂质 (不可皂化的化合物、残余的甘油酯、颜料等）。
[0151] 根据本发明的这种方法的第七步在于任选地通过褪色和脱臭的一系列步骤，精炼 极富含长链酯级分的该提取物。
[0152] 尽管在第六步中纯化了，如果必要可使富含DHA乙酯的提取物经历额外的精炼， 该额外的精炼由一个褪色步骤和一个脱臭步骤组成：
[0153] _ 一个褪色步骤，为了减少浅黄色的颜色。
[0154] 这一褪色步骤是经漂白土例如活性炭，以类似于在精炼植物油中常规使用的褪色 的方式进行。
[0155] _ 一个脱臭步骤，通过在真空下的汽提进行。
[0156] 最后，根据本发明的方法的此第二优先模式的第八步骤在于收集富含DHA乙酯 的、所得到的组合物。
[0157] 在控制气氛（理想地用氮惰化的）下储存由此纯化的DHA乙酯。
[0158] 添加抗氧化剂可有利于这一级分的稳定。
[0159] 本发明还涉及通过本发明的方法获得的富含DHA乙酯的组合物在食品行业中的 用途。
[0160] 本发明将通过以下实例更清楚地被理解，这些实例意为说明性的和非限制性的。
[0161] 实例1:从裂殖壶菌CNCM 1-4469菌株制备包含按总脂肪酸的重量计30 %和45% 之间的DHA和按重量计10%和30%之间的不可皂化的化合物（包括15%至25%角鲨烯） 的一种油。
[0162] 这个实例说明了用于获得一种粗制油的方法，该油包含DHA和基本上由角鲨烯组 成的不可皂化的化合物的混合物，该油通过发酵属于本 申请人:公司的微藻裂殖壶菌（于 2011年4月14日保藏在法国巴斯德研究所的国家微生物保藏中心[Collection Nationale de Cultures de Microorganismes]，保藏号 CNCM 1-4469)产生。
[0163] 在这种情况下，发酵在201反应器中实际培养/生产阶段之前以两个先前的连续 的预培养阶段进行。
[0164] 为了本实验，在第一个预培养介质内添加了维生素类，但是在第二个预培养介质 中和在生产中添加维生素类是任选的。
[0165] 因此预培养介质具有下面表I和II中示出的组成：
[0166] 表 I
【权利要求】
1. 一种用于制备由发酵微生物产生的、富含二十二碳六烯酸（DHA)乙酯的油的方法， 其特征在于，所述方法包括通过"短路径"分子蒸馏进行的纯化步骤。
2. 如权利要求1所要求的方法，其特征在于，所述些微生物是属于破囊壶菌目 (Thraustochytriales sp.)家族的微藻。
3. 如权利要求1和2中任一项所要求的方法，其特征在于，所述属于破囊壶菌目 (Thraustochytriales sp.)家族的微藻是以下物种的微藻：裂殖壶菌属（Schizochytrium sp.)、澄黃壶菌属（Aurantiochytrium sp.)以及破囊壶菌属（Thraustochytrium sp.)。
4. 如权利要求1到3中任一项所要求的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： 1) 从破囊壶菌目家族的微藻的发酵制备包含以下物质的混合物的粗制油：富含DHA的 甘油三酸酯和基本上由角鲨烯组成的不可皂化的化合物， 2) 任选地通过脱胶、脱酸、褪色和脱臭的一系列步骤，精炼所得到的粗制油， 3) 通过"短路径"分子蒸馏提取该角鲨烯，以获得不含角鲨烯的提余液， 4) 在碱性或酶催化剂、优选酶催化剂的存在下通过醇转酯将所得到的提余液进行转 酯， 5) 通过"短路径"分子蒸馏将步骤4)中的脂肪酸酯的混合物进行分级，以获得富含短 链脂肪酸酯的提取物以及极富含长链脂肪酸酯的提余液， 6) 通过"短路径"分子蒸馏将步骤5)中获得的长链脂肪酸酯的混合物进行纯化，以获 得极富含长链酯的不含杂质的提取物， 7) 任选地，通过褪色和脱臭的一系列步骤，精炼极富含长链酯级分的该提取物， 8) 收集所得到的富含DHA乙酯的化合物。
5. 如权利要求1至4中任一项所要求的方法，其特征在于该分子蒸馏步骤是在少于 〇. 1毫巴的值的高真空下进行。
6. 如权利要求1和5中任一项所要求的方法，其特征在于该"短路径"意指接触持续时 间少于1分钟。
7. 通过前述权利要求中任一项获得的富含DHA乙酯的组合物在食品行业中的用途。
【文档编号】A23D9/02GK104394702SQ201380028599
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2013年5月28日 优先权日:2012年5月29日
【发明者】塞缪尔·帕蒂尼尔, 菲利皮·卢腾 申请人:罗盖特兄弟公司