一种鸡黄色羽相关的分子标记及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种鸡黄色羽相关的分子标记及其应用。所述分子标记为SEQIDNO:1所示序列中的第883位处的A/G碱基突变。利用引物SEQIDNO:2和SEQIDNO:3对其进行扩增，将所得扩增产物进行直接测序。本方法操作简便，结果可靠。通过对上述A/G突变位点的检测，可以确定目标鸡群黄色羽这一性状的基因型，也可以通过基因型判别某一个体的羽色是纯合子黄色羽还是杂合子黄色羽，为有目的地对鸡群羽色性状进行选择提供依据，提高后代鸡黄色羽的一致性。
【专利说明】—种鸡黄色羽相关的分子标记及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于生物【技术领域】，具体涉及一种鸡黄色羽相关的分子标记及其应用。
【背景技术】
[0002]鸡的羽色是品种的重要特征之一，也是影响其经济价值的一个重要指标。影响鸡羽色的主要色素为黑色素，黑色素又可分为两类，一类是真黑素，呈现褐色或黑色；另一类是嗜黑素，呈黄色或红色。鸡羽毛色素沉着取决于其所含真黑色素与嗜黑素的相对数量。鸡的黑色素起始于胚胎的躯干神经脊细胞，在胚胎形成期间就开始分散迁移至真皮中定居，渐布于全身，多数黑色素细胞聚集于毛囊内(Kerje et al.，2003)。
[0003]羽色是一个由众多基因控制的极其复杂的性状，许多位点在黑色素的生成和羽色表达过程中发挥重要作用，其中一个非常重要的位点是扩展位点(Extension)，该位点影响黑色色素(真黑素)和红色色素(嗜黑素)的相对分布。在几种哺乳动物中以及鸡上的研究显示E位点编码黑素皮质激素受体I基因(MClR) (Robbins et al., 1993; Jackson etal., 1994; Kerje et al.，2003)，MClR在两种类型的黑色素生成中起着关键的作用。
[0004]黑色素的生成过程中MClR基因需要与两个配体α -促黑素细胞激素(a -MSH)和促肾上腺皮质激素(ACTH)共同作用，它们与黑色素细胞膜上的MClR基因结合后，使与受体偶联的G蛋白由无活性的二磷酸鸟苷(CDP)型转变为有活性的三磷酸鸟苷(GTP)型，激活膜上的腺苷酸环化酶系统，三磷酸腺苷(ATP)转变为环腺苷酸(cAMP)，cAMP进一步激活酪氨酸激酶，活化酪氨酸酶TYR。TYR催化黑色素细胞内的酪氨酸生成多巴，多巴在黑素体内聚积到一定的量后，释放黑色素，如果细胞中的TYR过量，多巴及多巴醌将通过各自的通道合成真黑色素；如果黑素细胞中的TYR过少，酪氨酸则转化为半胱氨酰多巴，从而导致嗜黑素的广泛表达(于云柱等，2010)。如果MClR基因发生变异可能导致机体不能合成真黑色素，使鸡的羽毛颜色表现为黄色或红色。
[0005]广东、广西及港澳地区偏好具有“三黄”特征的优质肉鸡，其中一个特征就是黄羽。在优质黄羽肉鸡的选育中，传统的育种方法是根据杂交后代鸡的表型性状留种，进行测交检测，繁殖扩群等步骤，但由于羽色是一个多基因控制的性状，在此过程中容易出现性状分离，且选择进程缓慢。因此，建立一种快速鉴别鸡黄色羽相关基因型的分子方法，可大大缩短育种时间，加速黄色羽肉鸡的选育进程，节约生产成本。
【发明内容】
[0006]本发明要解决的技术问题是为了克服现有技术中缺乏快速鉴别鸡黄色羽相关基因型的方法的缺陷，提供一种鸡黄色羽相关的分子标记。
[0007]本发明的另一个目的在于提供一种利用鸡黄色羽相关分子标记快速鉴别鸡黄色羽相关基因型的方法。
[0008]本发明的目的通过以下技术方案予以实现:
一种鸡黄色羽相关的分子标记， 所述分子标记为SEQ ID NO:1所示序列中的第883处的Α/G碱基突变。
[0009]一种利用鸡黄色羽相关分子标记快速鉴别鸡黄色羽相关基因型的方法，包括如下步骤:
S1.以鸡MClR基因的DNA序列为参考，设计如下引物并进行PCR扩增:
正向引物 F:5’ —ATCCCAAGGTACACAGTGAC— 3’，
反向引物 R:5’ — GGGCACCCAGGGGACACC— 3’。
[0010]S2.将所得扩增产物直接测序，
若基因型为GG型，则该个体为黄色羽纯合子；
若基因型为AG型，则该个体为黄色羽杂合子；
若基因型为AA型，则该个体为野生型，即非黄色羽纯合子。[0011 ] 上述分子标记在鸡黄色羽性状辅助选择中的应用。
[0012]本发明的有益效果是:可以准确的判定个体为黄色羽是纯合子还是杂合子。提高鸡群羽色的一致性。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]图1是通过PCR获得的10个品种鸡MClR基因上的部分DNA序列，用来寻找分子标记的片段的电泳图片，琼脂糖凝胶浓度为1.5%。
[0014]图2是对上述10个品种黄羽和非黄羽鸡MClR基因部分DNA序列进行对比的结果。【具体实施方式】
[0015]下面结合说明书附图和具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明保护的范围并不局限于此。
[0016]实施例1
51.引物设计
以NCBI数据库中鸡MClR基因⑶S序列(GenBank登录号:D78272.1)为参考，利用GeneTool软件设计一对引物，该引物扩增得到的DNA序列如SEQ ID NO:1所示，全长1538bp ο引物由上海捷瑞生物科技有限公司合成。引物序列如下:
MClR-F:5’ —ATCCCAAGGTACACAGTGAC— 3’
MClR-R:5，— GGGCACCCAGGGGACACC— 3，
52.筛选分子标记
S21.实验材料如表1所示。
[0017]表1实验材料
【权利要求】
1.一种鸡黄色羽相关的分子标记，其特征在于，所述分子标记为SEQ ID NO:1所示序列中的第883处的Α/G碱基突变。
2.权利要求1所述的分子标记在鸡黄色羽性状辅助选择中的应用。
3.一种利用鸡黄色羽相关分子标记快速鉴别鸡黄色羽相关基因型的方法，其特征在于，包括如下步骤: S1.以鸡MClR基因的DNA序列为参考，设计引物F和R，并进行PCR扩增:所述引物F和R的序列如SEQ ID NO:2~3所示； S2.将所得扩增产物直接测序，若基因型为GG型，则该个体为黄色羽纯合子；若基因型为AG型，则该个体为黄色羽杂合子；若基因型为AA型，则该个体为野生型，即非黄色羽纯合子。
【文档编号】C12N15/11GK103898102SQ201410050813
【公开日】2014年7月2日 申请日期:2014年2月14日 优先权日:2014年2月14日
【发明者】张细权, 许继国, 聂庆华, 吴海清 申请人:华南农业大学