一种金色链霉菌发酵生产金霉素的新型培养基和培养方法
【专利摘要】本发明涉及一种金色链霉菌发酵生产金霉素的新型培养基和培养方法，本发明优化培养基配方，并且配方中使用了土霉素菌渣，降低了发酵成本，并且最大限度的降低原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现金霉素稳定、高效的生产。同时利用该培养基可提高发酵单位、缩短发酵周期、提高金霉素产量。
【专利说明】一种金色链霉菌发酵生产金霉素的新型培养基和培养方法
【技术领域】
[0001]本发明属于发酵【技术领域】，特别是涉及一种金色链霉菌发酵生产金霉素的新型培养基和培养方法。
【背景技术】
[0002]金霉素属四环类抗生素，具有广谱抗菌作用，其抗菌谱与四环素相似，对多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抗菌作用。此外，它们还能抑制立克次氏体和砂眼病毒及淋巴肉芽肿病毒。
[0003]目前，国内金霉素的发酵生产采用二级或三级模式，该方式存在的主要问题有以下几点:
I国内部分厂家采用三级发酵模式生产金霉素，生产工序较为繁琐。
[0004]2金霉素发酵水平较低，一般控制在25000~30000u/ml。
[0005]3金霉素种子培养和发酵培养周期较长。其中，种子培养周期25~30h，发酵周期控制在110~115h。
[0006]4金霉素发酵成本较高，体现在以下几点:首先原材料采购成本较高。金霉素培养基中常用的有机氮源主要是花生饼粉(或黄豆饼粉)、蛋白胨、酵母粉，其市场价格较高；其次，采用三级发酵模式生产金霉素，用水量大，能耗较高。
【发明内容】
[0007]本发明的目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种发酵工艺简单，有效提高发酵单位，同时最大限度的降低原辅料对发酵单位的影响，降低生产成本，且原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现金霉素稳定、高效生产的金色链霉菌发酵生产金霉素的新型培养基。
[0008]本发明的另一目的是提供利用上述培养基生产金霉素的培养方法。
[0009]为实现上述目的所采取的技术方案为:
一种金色链霉菌发酵生产金霉素的新型培养基，包括种子培养基和发酵培养基组成，其特征在于所述种子培养基和发酵培养基中均含有土霉素菌渣。
[0010]所述土霉素菌渣来源于土霉素发酵液经板框过滤得到的固体产物，质量要求为:氨基氮含量≥ 20% ;水分≤ 6% ;灰分≤ 5% ;碳水化合物≥ 10% ;干渣颗粒通过60目筛的数量≥ 85%。
[0011]所述种子培养基组成为:乳清粉6~10g/L、麦芽糊精9~12g/L、低温黄豆饼粉6~9g/L、玉米衆8~10ml/L、土霉素菌洛10~15g/L、硫酸铵I~3g/L、轻质碳酸钙I~3g/L、磷酸二氢钾0.5~1.5g/L,玉米油5~10ml/L。 [0012]所述发酵培养基组成为:乳清粉8~12g/L、麦芽糊精12~15g/L、低温黄豆饼粉8~12g/L、玉米衆9~13ml/L、土霉素菌洛15~20g/L、硫酸铵I~3g/L、轻质碳酸|丐I~3g/L、磷酸二氢钾0.5~1.5g/L、玉米油10~15ml/L、氯化钠0.9~1.lg/L、硫酸镁0.4~0.8g/L、硫酸亚铁 0.2 ~0.5g/L。
[0013]利用上述培养基发酵生产金霉素的培养方法，其特征在于其工艺步骤为:
O采用平行种子发酵模式进行种子培养:首先将种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的金色链霉菌母瓶发酵液接入种子罐进行培养，接种量控制在种子培养基体积的0.1~0.2% ;
2)发酵培养:先将发酵培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后将采用平行种子发酵模式培养的种子液移入发酵罐进行发酵培养。
[0014]所述种子培养条件为:罐压0.05~0.06MPa ;罐温31~33°C;空气流量:0~12h，20 ~30m3/h ； 12h ~移种:50 ~60m3/h ;揽祥转速 80 ~100r/min。
[0015]所述发酵培养条件为:
a培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在6~7 ;
b温度:采用变温控制方法，O~20h:培养温度29~31°C;20h~发酵结束:培养温度31 ~33。。；
c搅拌转速:100~130r/min ；
d压力控制:罐压0.05~0.06MPa ；
e pH控制:发酵过程中pH控制在5.5~6.5 ;
f无菌检查:发酵过程中进`行菌检，要求无其它杂菌；
g空气流量:0~20h:150~200mVh ；20h~发酵结束:250~300mVh ；
h溶氧控制:
发酵前5h内，不控制溶氧；
6~20h，溶氧控制在80%以上；
21~60h，溶氧控制在20%以上；
61~发酵结束:溶氧控制在40%以上。
[0016]所述种子培养过程中的移种条件为:种子培养结束，其菌体浓度15~25% ;pH值
5.5~6.5 ;无其它杂菌污染；培养时间15~18h。
[0017]发酵培养停止条件为:
a 氨基氮:10 ~50mg/100ml ； b 化学效价:> 33000u/mL ； c pH:5.5 ~ 6.5 ； d还原糖:< 2g/L ； e菌体浓度:35~40% ； f发酵周期:培养时间90~95h。
[0018]在发酵过程中采用流加法进行补料，补料包括补麦芽糖、补水和补氨， a补麦芽糖工艺控制:
发酵前20h不用进行补糖；
发酵时间在21~60h，当总糖含量低于5%，补入20%麦芽糖，控制总糖含量为5~7%，每隔6~8h检测发酵液总糖含量；
发酵时间在61~85h，当总糖含量低于4%，补入20%麦芽糖，控制总糖含量为3~4%，每隔6~8h检测发酵液总糖含量；发酵时间在86h~发酵结束，当总糖含量低于1.5%，补入20%麦芽糖，控制总糖含量为
1.5~2.5%，每隔6~8h检测发酵液总糖含量；
上述20%麦芽糖溶液中加入麦芽糖酶，其浓度控制在0.002~0.003% ；b补水工艺控制:发酵过程中，按照工艺要求必须定时补入一定量的水，其目的是控制发酵液的粘度和菌体浓度，有利于代谢产物的生成，
发酵前40h不用进行补水，
发酵时间在40~60h，当菌体浓度高于50%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在40~45%，每隔6~8h检测发酵液菌体浓度，
发酵时间在61~发酵结束，当菌体浓度高于40%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在35~40%，每隔6~8h检测发酵液菌体浓度；c补氨工艺，补入浓度为10~20%的氢氧化钠，
发酵前20h，pH不进行控制，
发酵时间在30~60h，若pH < 6，加入10~20%的氢氧化钠，调节pH至6~6.5， 发酵时间在61h~发酵结束，若pH < 5.5，加入10~20%的氢氧化钠，调节pH控至
5.5 ~6.5o
[0019]所述平行种子发酵模式是指种子培养2次，符合移种标准后，加入到发酵培养基中进行发酵培养。
[0020]本发明的技术优势:
I本发明确认了种子培养基、发酵培养基基础碳源和氮源和最佳配伍比例。
[0021]2本发明采用土霉素菌渣代替培养基中有机氮源的部分用量，降低了生产成本。
[0022]3本发明采用二级发酵模式生产金霉素，减少能耗和水的用量。
[0023]4本发明对种子培养、发酵培养的工艺进行了详细的阐述，确认了金霉素最佳的发酵工艺和控制参数。达到的技术效果为发酵单位在33000u/ml以上，生产周期不超过113h，同国内技术相比，发酵单位提高了 10%，生产周期减少了 15h以上。
[0024]5本发明提供了一种土霉素菌渣回收、利用的方法，降低了其对环境污染的风险。
[0025]6本发明种子培养的规模适宜在5m3以内，发酵培养规模可以控制在100~150m3,能够满足年产30000吨以上的技术需求。
[0026]具体实施方法
下面用实例予以说明本发明，应该理解的是，实例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。本发明的范围与核心内容依据权利要求书加以确定。
[0027]下述实施例的菌种选用金色链霉菌:生产使用的菌种来源为母瓶发酵液。母瓶发酵液质量:pH6~8 ;菌体浓度10~30% ;镜检无杂菌；发酵单位10000~20000u/ml。
[0028]实施例1
一级种子培养基制备:种子罐体积lm3，有效体积为0.Sm3。分别配置2个批次种子培养基。
[0029](第一个批次种子培养基)一级种子培养基配制过程:乳清粉4.8kg、麦芽糊精7.2kg、低温黄豆饼粉4.8kg、玉米衆6.4L、土霉素菌洛8kg、硫酸铵0.8kg、轻质碳酸钙
0.8kg、磷酸二氢钾0.4kg,玉米油4L。
[0030](第二个批次种子培养基)一级种子培养基配制过程:乳清粉4.8kg、麦芽糊精7.2kg、低温黄豆饼粉4.8kg、玉米衆6.4L、土霉素菌洛8kg、硫酸铵0.8kg、轻质碳酸钙
0.8kg、磷酸二氢钾0.4kg,玉米油4L。
[0031]种子培养:首先将种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的金色链霉菌母瓶发酵液接入种子罐进行培养,接种量为0.8L。种子培养过程中，罐压控制在0.05~0.06MPa ;罐温31~33°C;空气流量:0~12h，20m3/h ;12h~15h:50m3/h ;揽拌转速 80r/min。
[0032]种子培养结束，第一批次的菌体浓度15.7% ;pH值6.5 ;无其它杂菌污染；培养时间15.2h。第二批次的菌体浓度15.2% ；pH值6.6 ;无其它杂菌污染；培养时间15h。
[0033]发酵培养基制备过程:发酵罐体积100m3，有效体积为80m3。
[0034]乳清粉640kg、麦芽糊精960kg、低温黄豆饼粉640kg、玉米浆720L、土霉素菌渣1200kg、硫酸铵80kg、轻质碳酸韩80kg、磷酸二氢钾40kg、玉米油800L、氯化钠72kg、硫酸镁32kg、硫酸亚铁16kg。
[0035]发酵培养:先将发酵培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，pH控制在6.8，然后将2个批次的种子液全部移入发酵罐进行培养。O~20h:培养温度29~31°C;20h~发酵结束:培养温度31~33°C ;搅拌转速:100r/min ;罐压0.05~0.06MPa ;发酵过程中，pH控制在5.5~6.5 ;同时进行菌检，要求无其它杂菌；空气流量:0~20h:150m3/h ；20h~发酵结束:250m3/h ;溶氧控制:发酵前5h内，不控制溶氧；6~20h，溶氧控制在80%以上；21~60h，溶氧控制在20%以上；61~发酵结束:溶氧控制在40%以上。发酵培养结束，氨基氮:13.7mg/100ml ;化学效价33112u/mL ；pH6.4 ;还原糖1.lg/L ;菌体浓度35.7%，培养周期为90h。
[0036]实施例2
一级种子培养基制备:种子罐体积2m3，有效体积为1.5m3。分别配置2个批次种子培养基。
[0037](第一个批次种子培养基)一级种子培养基配制过程:乳清粉10.5kg、麦芽糊精15kg、低温黄豆饼粉10.5kg、玉米衆9.5L、土霉素菌洛16.5kg、硫酸铵1.8kg、轻质碳酸钙
1.8kg、磷酸二氢钾1.05kg,玉米油9L。
[0038](第二个批次种子培养基)一级种子培养基配制过程:乳清粉11.25kg、麦芽糊精
15.3kg、低温黄豆饼粉10.9kg、玉米衆9.7L、土霉素菌洛17kg、硫酸铵1.9kg、轻质碳酸钙2kg、磷酸二氢钾1.03kg，玉米油9.1L。
[0039]种子培养:首先将种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的金色链霉菌母瓶发酵液接入种子罐进行培养,接种量为1.8L。种子培养过程中，罐压控制在0.05~0.06MPa ;罐温31~33°C;空气流量:0~12h，22m3/h ;12h~15h:53m3/h ;揽拌转速 85r/min。
[0040]种子培养结束，第一批次的菌体浓度17.8% ;pH值6.4 ;无其它杂菌污染；培养时间15.5h。第二批次的菌体浓度17.7% ；pH值6.7 ;无其它杂菌污染；培养时间15.3h。
[0041]发酵培养基制备过程:发酵罐体积110m3，有效体积为88m3。
[0042]乳清粉792kg、麦芽糊精1144kg、低温黄豆饼粉800kg、玉米浆880L、土霉素菌渣1408kg、硫酸铵106kg、轻质碳酸|丐105kg、磷酸二氢钾53kg、玉米油970L、氯化钠84kg、硫酸镁44kg、硫酸亚铁22kg。[0043]发酵培养:先将发酵培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，pH控制在6.7，然后将2个批次的种子液全部移入发酵罐进行培养。O~20h:培养温度29~31°C;20h~发酵结束:培养温度31~33°C ;搅拌转速:110r/min ;罐压0.05~0.06MPa ;发酵过程中，pH控制在5.5~6.5 ;同时进行菌检，要求无其它杂菌；空气流量:0~20h:160m3/h ；20h~发酵结束:260m3/h ;溶氧控制:发酵前5h内，不控制溶氧；6~20h，溶氧控制在80%以上；21~60h，溶氧控制在20%以上；61~发酵结束:溶氧控制在40%以上。发酵培养结束，氨基氮:20.3mg/100ml ;化学效价 33563u/mL ；pH6.2 ;还原糖 1.3g/L ;菌体浓度 36.2%，周期为 91h。
[0044]实施例3
一级种子培养基制备:种子罐体积3m3，有效体积为2.3m3。分别配置2个批次种子培养基。
[0045](第一个批次种子培养基)一级种子培养基配制过程:乳清粉18.4kg、麦芽糊精24kg、低温黄豆饼粉17.2kg、玉米衆21L、土霉素菌洛29kg、硫酸铵3.5kg、轻质碳酸钙
3.5kg、磷酸二氢钾2.3kg，玉米油17.5L。
[0046](第二个批次种子培养基)一级种子培养基配制过程:乳清粉18.2kg、麦芽糊精23.5kg、低温黄豆饼粉17kg、玉米衆20L、土霉素菌洛28.5kg、硫酸铵3.4kg、轻质碳酸钙
3.4kg、磷酸二氢钾2.2kg，玉米油17.3L。
[0047]种子培养:首先将种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的金色链霉菌母瓶发酵液接入种子罐进行培养,接种量为3.4L。种子培养过程中，罐压控制在0.05~0.06MPa ;罐温31~33°C;空气流量:0~12h，25m3/h ;12h~15h:55m3/h ;揽拌转速 90r/min。
[0048]种子培养结束，第一批次的菌体浓度20% ;pH值6.3 ;无其它杂菌污染；培养时间
16.2h。第二批次的菌体浓度20.4% ；pH值6.4 ;无其它杂菌污染；培养时间16.5h。
[0049]发酵培养基制备过程:发酵罐体积120m3，有效体积为90m3。
[0050]乳清粉900kg、麦芽糊精1215kg、低温黄豆饼粉900kg、玉米浆990L、土霉素菌渣1575kg、硫酸铵180kg、轻质碳酸韩180kg、磷酸二氢钾90kg、玉米油1130L、氯化钠90kg、硫酸镁60kg、硫酸亚铁35kg。
[0051]发酵培养:先将发酵培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，pH控制在6.6，然后将2个批次的种子液全部移入发酵罐进行培养。O~20h:培养温度29~31°C;20h~发酵结束:培养温度31~33°C ;搅拌转速:115r/min ;罐压0.05~0.06MPa ;发酵过程中，pH控制在5.5~6.5 ;同时进行菌检，要求无其它杂菌；空气流量:0~20h:170m3/h ；20h~发酵结束:280m3/h ;溶氧控制:发酵前5h内，不控制溶氧；6~20h，溶氧控制在80%以上；21~60h，溶氧控制在20%以上；61~发酵结束:溶氧控制在40%以上。发酵培养结束，氨基氮:27.6mg/100ml ;化学效价 34537u/mL ；pH6.1 ;还原糖 1.6g/L ;菌体浓度 37.6%，周期为 93h。
[0052]实施例4
一级种子培养基制备:种子罐体积4m3，有效体积为3m3。分别配置2个批次种子培养
基。
[0053](第一个批次种子培养基)一级种子培养基配制过程:乳清粉27kg、麦芽糊精33.6kg、低温黄豆饼粉25.2kg、玉米衆28.5L、土霉素菌洛42kg、硫酸铵7.5kg、轻质碳酸钙
7.5kg、磷酸二氢钾3.9kg，玉米油24L。[0054](第二个批次种子培养基)一级种子培养基配制过程:乳清粉26.8kg、麦芽糊精33.7kg、低温黄豆饼粉25.1kg、玉米衆29L、土霉素菌洛43kg、硫酸铵7.4kg、轻质碳酸钙
7.4kg、磷酸二氢钾4kg，玉米油25L。
[0055]种子培养:首先将种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的金色链霉菌母瓶发酵液接入种子罐进行培养,接种量为3.4L。种子培养过程中，罐压控制在0.05~0.06MPa ;罐温31~33°C;空气流量:0~12h，27m3/h ;12h~15h:57m3/h ;揽拌转速 95r/min。
[0056]种子培养结束，第一批次的菌体浓度22.7% ;pH值6.2 ;无其它杂菌污染；培养时间17.lh。第二批次的菌体浓度22.3% ；pH值6.4 ;无其它杂菌污染；培养时间17h。
[0057]发酵培养基制备过程:发酵罐体积130m3，有效体积为97m3。
[0058]乳清粉1067kg、麦芽糊精1358kg、低温黄豆饼粉1060kg、玉米浆1165L、土霉素菌渣1750kg、硫酸铵243kg、轻质碳酸钙242kg、磷酸二氢钾117kg、玉米油1350L、氯化钠102kg、硫酸镁68kg、硫酸亚铁43.5kg。
[0059]发酵培养:先将发酵培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，pH控制在6.4，然后将2个批次的种子液全部移入发酵罐进行培养。O~20h:培养温度29~31°C;20h~发酵结束:培养温度31~33°C ;搅拌转速:125r/min ;罐压0.05~0.06MPa ;发酵过程中，pH控制在5.5~6.5 ;同时进行菌检，要求无其它杂菌；空气流量:0~20h:180m3/h ；20h~发酵结束:290m3/h ;溶氧控制:发酵前5h内，不控制溶氧；6~20h，溶氧控制在80%以上；21~60h，溶氧控制在2 0%以上；61~发酵结束:溶氧控制在40%以上。发酵培养结束，氨基氮:38.lmg/100ml ;化学效价 34102u/mL ；pH6.1 ;还原糖 1.7g/L ;菌体浓度 38.7%，周期为 94h。
[0060]实施例5
一级种子培养基制备:种子罐体积5m3，有效体积为4m3。分别配置2个批次种子培养基。
[0061](第一个批次种子培养基)一级种子培养基配制过程:乳清粉40kg、麦芽糊精48kg、低温黄豆饼粉36kg、玉米浆40L、土霉素菌渣60kg、硫酸铵12kg、轻质碳酸钙12kg、磷酸二氢钾6kg,玉米油40L。
[0062](第二个批次种子培养基)一级种子培养基配制过程:乳清粉39kg、麦芽糊精47kg、低温黄豆饼粉35kg、玉米衆39L、土霉素菌洛58.7kg、硫酸铵11.2kg、轻质碳酸韩11.6kg、磷酸二氢钾5.6kg，玉米油39L。
[0063]种子培养:首先将种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的金色链霉菌母瓶发酵液接入种子罐进行培养,接种量为3.4L。种子培养过程中，罐压控制在0.05~0.06MPa ;罐温31~33°C;空气流量:0~12h，30m3/h ;12h~15h:60m3/h ;揽祥转速 100r/min。
[0064]种子培养结束，第一批次的菌体浓度24.6% ;pH值5.9 ;无其它杂菌污染；培养时间18h。第二批次的菌体浓度24.8% ；pH值5.7 ;无其它杂菌污染；培养时间17h。
[0065]发酵培养基制备过程:发酵罐体积150m3，有效体积为120m3。
[0066]乳清粉1440kg、麦芽糊精1800kg、低温黄豆饼粉1440kg、玉米浆1560L、土霉素菌洛2400kg、硫酸铵360kg、轻质碳酸韩360kg、磷酸二氢钾180kg、玉米油1800L、氯化钠132kg、硫酸镁96kg、硫酸亚铁60kg。[0067]发酵培养:先将发酵培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，pH控制在6.4，然后将2个批次的种子液全部移入发酵罐进行培养。O~20h:培养温度29~31°C;20h~发酵结束:培养温度31~33°C ;搅拌转速:125r/min ;罐压0.05~0.06MPa ;发酵过程中，pH控制在5.5~6.5 ;同时进行菌检，要求无其它杂菌；空气流量:0~20h:200m3/h ；20h~发酵结束:300m3/h ;溶氧控制:发酵前5h内，不控制溶氧；6~20h，溶氧控制在80%以上；21~60h，溶氧控制在20%以上；61~发酵结束:溶氧控制在40%以上。发酵培养结束，氨基氮:46.4mg/100ml ;化学效价 33765u/mL ；pH6.1 ;还原糖 1.9g/L ;菌体浓度 39.4%，周期为 95h。
[0068]上述实施例1-5中补料控制按照下述方式实现:
补麦芽糖工艺控制:20%的麦芽糖溶液中加入麦芽糖酶，其浓度控制在0.002~0.003%。
[0069]发酵前20h不用进行补糖。
[0070]发酵时间在21~60h,如果总糖含量低于5%。补入20%的麦芽糖，控制总糖含量为5~7%。每隔6~8h检测发酵液总糖含量。
[0071]发酵时间在61~85h,如果总糖含量低于4%。补入20%的麦芽糖,控制总糖含量为3~4%。每隔6~8h检测发酵液总糖含量。
[0072]发酵时间在86h~发酵结束，如果总糖含量低于1.5%。补入20%的麦芽糖，控制总糖含量为1.5~2.5%。每隔6~8h检测发酵液总糖含量。
[0073]补水工艺控制:发酵过程中，按照工艺要求必须定时补入一定量的水，其目的是控制发酵液的粘度和菌体浓度，有利于代谢产物的生成。
[0074]发酵前40h不用进行补水。
[0075]发酵时间在40~60h，如果菌体浓度高于50%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在40~45%。每隔6~8h检测发酵液菌体浓度。
[0076]发酵时间在61~发酵结束，如果菌体浓度高于40%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在35~40%，每隔6~8h检测发酵液菌体浓度。
[0077]补氨工艺:氢氧化钠浓度为10~20%。
[0078]发酵前20h，pH不进行控制。
[0079]发酵时间在30~60h,若pH < 6,加入氢氧化钠,调节pH至6~6.5
发酵时间在61h~发酵结束，若pH < 5.5,加入氢氧化钠,调节pH控至5.5~6.5。
[0080]对比实施例(二级发酵模式)
一级种子培养基制备:种子罐体积10m3，有效体积为7m3。
[0081]玉米淀粉60kg、黄豆饼粉21kg、酵母粉4kg、蛋白胨6kg、硫酸铵2kg、碳酸钙
2.5kg、氯化钠6.3kg、磷酸二氢钾0.95kg、玉米油56L。
[0082]发酵培养基制备:发酵罐体积60m3，有效体积为45m3。
[0083]玉米淀粉410kg、黄豆饼粉135kg、酵母粉40kg、蛋白胨20kg、硫酸铵13kg、碳酸钙23kg、氯化钠32kg、磷酸二氢钾3.1kg、玉米油450L。
[0084]发酵培养结束，氨基氮:24.8mg/100ml ;化学效价23638u/mL ；pH6.4 ;还原糖1.7g/L ;菌体浓度32.3%，周期为112h。
【权利要求】
1.一种金色链霉菌发酵生产金霉素的新型培养基，包括种子培养基和发酵培养基组成，其特征在于所述种子培养基和发酵培养基中均含有土霉素菌渣。
2.按照权利要求1所述的金色链霉菌发酵生产金霉素的新型培养基，其特征在于所述土霉素菌渣来源于土霉素发酵液经板框过滤得到的固体产物，质量要求为:氨基氮含量≥20% ;水分≤6% ;灰分≤5% ;碳水化合物≤10% ;干渣颗粒通过60目筛的数量≥85%。
3.按照权利要求1或2所述的金色链霉菌发酵生产金霉素的新型培养基，其特征在于所述种子培养基组成为:乳清粉6~10g/L、麦芽糊精9~12g/L、低温黄豆饼粉6~9g/L、玉米衆8~10ml/L、土霉素菌洛10~15g/L、硫酸铵I~3g/L、轻质碳酸钙I~3g/L、磷酸二氢钾0.5~1.5g/L,玉米油5~10ml/Lo
4.按照权利要求1或2所述的金色链霉菌发酵生产金霉素的新型培养基，其特征在于所述发酵培养基组成为:乳清粉8~12g/L、麦芽糊精12~15g/L、低温黄豆饼粉8~12g/L、玉米衆9~13ml/L、土霉素菌洛15~20g/L、硫酸铵I~3g/L、轻质碳酸|丐I~3g/L、磷酸二氢钾0.5~1.5g/L、玉米油10~15ml/L、氯化钠0.9~1.lg/L、硫酸镁0.4~0.8g/L、硫酸亚铁0.2~0.5g/L。
5.一种利用权利要求1至4所述培养基发酵生产金霉素的培养方法，其特征在于其工艺步骤为: 1)采用平行种子发酵模式进行种子培养:首先将种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的金色链霉菌母瓶发酵液接入种子罐进行培养，接种量控制在种子培养基体积的0.1~0.2% ; 2)发酵培养:先将发酵培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后将采用平行种子发酵模式培养的种子液移入发酵罐进行发酵培养。
6.按照权利要求5所述的培养方法，其特征在于所述种子培养条件为:罐压0.05~0.06MPa ;罐温 31 ~33°C ;空气流量:0 ~12h，20 ~30m3/h ；12h ~移种:50 ~60m3/h ;搅拌转速80~100r/min。
7.按照权利要求5所述的培养方法，其特征在于所述发酵培养条件为: a培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在6~7 ; b温度:采用变温控制方法，O~20h:培养温度29~31°C;20h~发酵结束:培养温度31 ~33。。； c搅拌转速:100~130r/min ； d压力控制:罐压0.05~0.06MPa ； e pH控制:发酵过程中pH控制在5.5~6.5 ; f无菌检查:发酵过程中进行菌检，要求无其它杂菌； g空气流量:0~20h:150~200mVh ；20h~发酵结束:250~300mVh ； h溶氧控制: 发酵前5h内，不控制溶氧； 6~20h，溶氧控制在80%以上； 21~60h，溶氧控制在20%以上； 61~发酵结束:溶氧控制在40%以上。
8.按照权利要求5所述的培养方法，其特征在于所述种子培养过程中的移种条件为:种子培养结束，其菌体浓度15~25% ；pH值5.5~6.5 ;无其它杂菌污染；培养时间15~18h。
9.按照权利要求5所述的培养方法，其特征在于发酵培养停止条件为: a 氨基氮:10 ~50mg/100ml ； b 化学效价:> 33000u/mL ； c pH:5.5 ~6.5 ; d还原糖:< 2g/L ； e菌体浓度:35~40% ； f发酵周期:培养时间90~95h。
10.按照权利要求5所述的培养方法，其特征在于在发酵过程中采用流加法进行补料，补料包括补麦芽糖、补水和补氨，其中 a补麦芽糖工艺控制: 发酵前20h不用进行补糖； 发酵时间在21~60h，当总糖含量低于5%，补入20%麦芽糖，控制总糖含量为5~7%，每隔6~8h检测发酵液总糖含量； 发酵时间在61~85h， 当总糖含量低于4%，补入20%麦芽糖，控制总糖含量为3~4%，每隔6~8h检测发酵液总糖含量； 发酵时间在86h~发酵结束，当总糖含量低于1.5%，补入20%麦芽糖，控制总糖含量为1.5~2.5%，每隔6~8h检测发酵液总糖含量； 上述20%麦芽糖溶液中加入麦芽糖酶，其浓度控制在0.002~0.003% ；b补水工艺控制:发酵过程中，按照工艺要求必须定时补入一定量的水，其目的是控制发酵液的粘度和菌体浓度，有利于代谢产物的生成。 发酵前40h不用进行补水， 发酵时间在40~60h，当菌体浓度高于50%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在40~45%，每隔6~8h检测发酵液菌体浓度， 发酵时间在61~发酵结束，当菌体浓度高于40%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在35~40%，每隔6~8h检测发酵液菌体浓度；c补氨工艺，补入浓度为10~20%的氢氧化钠， 发酵前20h，pH不进行控制， 发酵时间在30~60h，若pH < 6，加入10~20%的氢氧化钠，调节pH至6~6.5， 发酵时间在61h~发酵结束，若pH < 5.5，加入10~20%的氢氧化钠，调节pH控至5.5 ~6.5o
11.按照权利要求5所述的培养方法，其特征在于所述平行种子发酵模式是指种子培养2次，符合移种标准后，加入到发酵培养基中进行发酵培养。
【文档编号】C12P29/00GK103773831SQ201410057535
【公开日】2014年5月7日 申请日期:2014年2月20日 优先权日:2014年2月20日
【发明者】任勇, 王 义 申请人:宁夏泰瑞制药股份有限公司