一种灵芝多糖高产工程菌株Rmust及其构建方法
【专利摘要】本发明公开一种灵芝多糖高产工程菌株Rmust及其构建方法，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCCNO.8258，本发明提供的灵芝工程菌，是通过选用灵芝强启动子P-gpd过表达编码PGM-葡萄糖磷酸变位酶（PGM）基因，得到高产灵芝多糖灵芝工程菌Rmust；通过摇瓶发酵实验表明，该菌在其细胞生长不受影响的情况下，转化子菌株产灵芝多糖的含量是野生型菌株（WT菌株）含量的提1.6倍，其中1g干菌丝体产灵芝多糖的量(mg/g)由145.9±1.65mg/g提高到236.95±1.28mg/g，因此，本高产菌株可以作为生产灵芝多糖的工程菌株，具有广泛的应用前景。
【专利说明】一种灵芝多糖高产工程菌株Rmust及其构建方法
【技术领域】
[0001]本发明属于基因工程和代谢工程领域的，具体涉及一种通过基因工程对灵芝代谢途径中有关灵芝多糖合成的PGM (葡萄糖磷酸变位酶)基因过表达的方法，构建了一个灵芝多糖的高产工程菌株。
【背景技术】
[0002]灵芝(Gano derma I u c i dum )是担子菌纲,多孔菌科,灵芝属真菌。灵芝真菌在我国有20多种，包括赤芝，黄芝，紫芝，黑芝，薄盖灵芝，树舌等。我国应用灵芝作为药物已有两千多年的历史。灵芝对于增强人体免疫力，调节血糖，控制血压，辅助肿瘤放化疗，保肝护肝，促进睡眠等方面均具有显著疗效。由于其特殊的要用价值，灵芝的有效成分分析和药理学研究已经引起了国际上的广泛关注，尤其在日本，美国，韩国等国家。目前，灵芝的研究已经深入到了分子水平，一些专著相继出版，从不同的角度介绍了灵芝的生物学特性、栽培技术、药理学作用及临床应用等情况。
[0003]灵芝多糖是从灵芝中提取的一种新内源活性物质，其所含的化学成分能够显著提高吞噬细胞的吞噬能力，增强体液免疫和细胞免疫功能，还能提高红细胞中超氧化物歧化酶活性，对人体具有多种功能。
[0004]PGM (葡萄糖磷酸变位酶)基因是灵芝多糖合成途径中的一个较为关键的基因，它能使糖原分子的葡萄糖残基形成的葡萄糖-6-磷酸转变为葡萄糖-1-磷酸。葡萄糖-6-磷酸是糖酵解或糖原合成的主流中间代谢产物，在细胞中的代谢比较快，但是只有葡萄糖-1-磷酸才能够合成多糖，因此PGM对糖原的合成具有重要的作用。灵芝多糖的合成途径如下所示:
【权利要求】
1.一种灵芝多糖高产工程菌株Rmust，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC N0.8258。
2.权利要求1所述灵芝多糖高产工程菌株Rmust的构建方法,其特征在于包括以下步骤: 将目的片段与表达载体相连得到重组表达质粒，然后将重组表达质粒通过PEG介导的原生质体融合的方法将重组表达质粒传化进灵芝中，从而得到高产灵芝多糖的工程菌株；其中所述的目的片段为葡萄糖磷酸变位酶PGM基因，其核苷酸序列如SEQ ID N0:1所不，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所不。
3.根据权利要求2所述灵芝多糖高产工程菌株Rmust的构建方法，其特征在于:所述的表达载体为PJW-EX`P。
【文档编号】C12N15/61GK103865814SQ201410076047
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2014年3月4日 优先权日:2014年3月4日
【发明者】徐军伟, 任梦飞, 纪森林, 贺宜龙, 周降生 申请人:昆明理工大学