一株罕见无色杆菌及其在去除重金属离子中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一株罕见无色杆菌（Achromobacterinsolitus）CC6及其在去除重金属离子中的应用，罕见无色杆菌CC6对重金属离子Cd2+具有去除作用，从土壤和水体中筛选对重金属离子Cd2+有去除作用的罕见无色杆菌的方法，包括以下步骤：a.金属选择培养基的制备；b.耐重金属菌株的富集驯化;c.耐重金属菌株的筛选及复筛；d.菌体对重金属去除能力的检测。通过含有金属离子的培养基对耐重金属菌株进行富集驯化和纯化后菌体对重金属去除能力的检测试验，建立合理、有效的去除重金属菌株的筛选方法，得到适合需要的菌株。本发明应用于重金属污染的治理，具有无二次污染、处理效率高、适应范围广、成本低等优点。
【专利说明】一株罕见无色杆菌及其在去除重金属离子中的应用
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及一株微生物及其在去除重金属离子中的应用，特别涉及一株罕见无色杆菌及其在去除重金属离子中的应用，属于微生物的检测及应用【技术领域】。
【背景技术】
[0002]重金属广泛分布于大气圈、生物圈、岩石圈和水圈中，被排入环境后具有永久性，且有明显的累积效应，能够污染水体土壤并通过食物链循环最终在生物体内富集，从而严重的危害生态环境及人体健康。
[0003]微生物治理重金属污染技术是国际上新兴起并不断探索发展的领域，利用微生物体系制备的生物吸附剂处理重金属污染，是目前实践证明最有发展前途的一种重金属污染治理方法。与传统的处理方法相比，其具有无二次污染、处理效率高、适应范围广、成本低等优点，在低浓度下，金属可被选择性地去除、分离回收。近十年来我国耐重金属微生物研究主要集中在微生物的性质及重金属对菌细胞的影响方面，而对于菌种筛选、菌种特征、生长条件研究较少。目前已分离的耐重金属种群少，菌体生长繁殖受栖息地环境的影响大，去除重金属的能力不强，还不能满足外部实际环境复杂的污染现状，迫切需要丰富其种群多样性，提高对重金属的去除能力。因此应加强具有高效修复能力的微生物的研究，在筛选大量耐重金属微生物的基础上，可将菌种驯化后进一步与适当的工艺结合构建高效去除重金属的工程菌，为微生物治理复杂环境的重金属污染提供更多选择。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题在于，通过耐重金属菌株的富集驯化及筛选，从土壤和水体中筛选能够去除重金属的罕见无色杆菌insolitus) CC6?建立合理有效的耐重金属菌株的筛选方法，并对筛选出的细菌去除重金属的作用效果进行评价，得到适合的去除重金属效果好的菌株。通过菌种驯化后进一步与适当的工艺结合，构建高效去除重金属的安全、有效、经济的工程菌产品。将产品应用于被重金属污染的土壤和水体中，提高重治理金属污染的效率，减少二次污染，降低成本，为微生物治理复杂环境的重金属污染提供更多选择。
[0005]本发明的另一目的是提供上述菌株在去除重金属离子中的应用。
[0006]该菌株于2014年2月18日被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号:CGMCC N0.8826,分类命名:罕见无色杆菌insoli tus ) 0
[0007]为解决上述技术问题，本发明提供了一株罕见无色杆菌CC6，所述罕见无色杆菌CC6对重金属离子Cd2+具有去除作用。
[0008]为解决上述技术问题，本发明还提供了一种从土壤和水体中筛选对重金属离子具有去除作用的方法，包括以下步骤:
a.金属选择培养基的制备；b.耐重金属菌株的富集驯化；
C.耐重金属菌株的筛选及复筛； d.菌体对重金属去除能力的检测。
[0009]所述步骤a可以进一步包括:计算硝酸镉[Cd(NO3)2Xffl2O]中金属离子的质量分数，溶于去离子水中配成10g/L的贮藏液。配制基础培养基:牛肉膏蛋白胨培养基(g/L)—牛肉膏3.0，蛋白胨10.0，NaCl 5.0。基础培养基灭菌后，将金属贮藏液根据浓度要求添加于培养基中。
[0010]所述步骤b可以进一步包括:取IOg环境采集样品加入90mL液体牛肉膏蛋白胨培养基中富集培养，37°C 150r/min培养24h ;取ImL富集培养液分别接种于含0.lg/L不同金属离子的新鲜液体培养基，370C 150r/min培养；待金属选择培养基混浊后，从中取ImL培养液接种于含0.2g/L金属离子的液体培养基中，逐级类推提高金属离子浓度。根据菌体对各金属耐受程度的不同，选取较高浓度的耐受生长条件进行多次驯化培养。
[0011]所述步骤c可以进一步包括:用接种环取最高耐受浓度培养物划线接种于含相应金属离子的固体平板上，37°C培养24~72h。根据平板菌落形态分别挑取单菌落再接种至液体金属选择培养基进行验证，循环三次，以获得金属耐受能力较好的纯菌株。
[0012]所述步骤d可以进一步包括:将筛选获得的耐重金属单菌落分别接种于相应的适当浓度的液体金属选择培养基中，37°C 150r/min培养24~48h。12000r/min离心5min,取上清用ICP-MS方法测定金属离子浓度。
[0013]ICP-MS仪器测试条件:反射功率1550?，采样深度7mm，载气流量1.04L/min,雾化室温度2°C。Cd的积分时间为2.0S，重复测定3次。提升速度0.30rps，提升时间45S，稳定时间30S。
[0014]重金属去除率计算公式为:
P= [ (C0-C)/C0] X 100%
P:去除率(％)；
Co:菌处理前金属离子浓度；
C:菌处理后金属离子浓度。
[0015]为解决上述技术问题，本发明又提供了一株罕见无色杆菌CC6，包含下述基因序列:
【权利要求】
1.一株罕见无色杆菌0^力77遍9如&<9_/' i/?6*(97ite60CC6，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为:CGMCC 8826。
2.—种如权利要求1中所述罕见无色杆菌0^力77遍9如&<9_/' i/?6O7ii〃60CC6在去除重金属离子Cd2+中 的应用。
【文档编号】C12N1/20GK103937705SQ201410085722
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2014年3月10日 优先权日:2014年3月10日
【发明者】孙军, 郝莹, 李凯, 赵晗 申请人:赵晗