酪酸菌发酵培养基及其制备方法与酪酸菌培养发酵方法
【专利摘要】本发明提供了一种酪酸菌发酵培养基及其制备方法与酪酸菌培养发酵方法，所述酪酸菌发酵培养基包括氮源、碳源和氯化钠，其中，所述氮源为鱼粉、豆粕或酵母膏的一种或任意组合，碳源为葡萄糖和/或玉米粉，采用该发酵培养基发酵14-16h后，酪酸菌活菌数稳定达到109CFU/mL以上，该发酵培养基采用来源广泛的氮源、碳源代替胰蛋白胨，葡萄糖等，发酵成本低，缩短了发酵时间，提高发酵效率，大大降低了生产成本。
【专利说明】酪酸菌发酵培养基及其制备方法与酪酸菌培养发酵方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物工程【技术领域】，尤其是酪酸菌发酵培养基及其制备方法与酪酸菌培养发酵方法。
【背景技术】
[0002]微生态制剂在替代抗生素、防治疾病和改善环境等方面起到了积极作用，但目前广泛应用的活菌制剂普遍存在保存期短、活性不稳定等缺点，这个问题在微生态制剂实际应用带来很多困难。
[0003]酪酸菌作为益生菌，能促进肠道内有益菌共生并促进有益菌的增殖和发育促进生长功能。酪酸菌内存在着蛋白酶I和蛋白酶II及脂肪酶，其能促进人和对脂肪和蛋白质的消化吸收。酪酸菌还具有氨基酸载体的作用，能转运所有的氨基酸。酪酸菌同其它需氧芽孢杆菌一样在消化道内复活发育的过程中产生活性很强的胞外酶----脂肪酶、淀粉酶、糖苷酶等多种酶类，酪酸菌在发酵过程中能产生葡萄糖、麦芽糖等6种糖，及维生素E。酪酸菌能激活免疫系统，促进免疫功能，维持机体的健康状况，它在体内能产生B族维生素、维生素K等，对机体具有保健作用，同时其主要代谢产物丁酸是肠道上皮组织细胞再生和修复的主要营养物质。一种集乳酸菌和芽孢杆菌优点于身的活菌制剂，有更强的耐酸、耐胆汁特性，能更适应人和动物肠道环境，具有很大的应用在临床和实际应用上面。
[0004]在益生菌酪酸菌发酵培养基中，目前培养基常用的氮源是蛋白胨,大豆蛋白胨,胰蛋白胨或者牛肉膏单个或者复合氮源，盐类一般添加硫酸锰，硫酸镁等离子，这些物质成本较高，且组成成分复杂，有时解决不好菌体生长稳定的问题，发酵时间长，若能采用来源广泛且便宜的氮源碳源代替以上物质，简化培养基组分，则能降低酪酸菌发酵的成本，提高菌体发酵稳定性，尤其对工业化生产意义更为重大。
【发明内容】
[0005]本发明所要解决的技术问题在于提供一种酪酸菌发酵培养基。
[0006]本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述酪酸菌发酵培养基的制备方法。
[0007]本发明所要解决的另一技术问题在于提供一种应用上述酪酸菌发酵培养基进行酪酸菌培养发酵的方法。
[0008]为解决上述技术问题，本发明的技术方案是:
[0009]一种酪酸菌发酵培养基，由氮源、碳源和氯化钠组成，其中，所述氮源为鱼粉、豆柏或酵母膏的一种或任 意组合，碳源为葡萄糖和/或玉米粉，按其重量份数计氮源20-35份、碳源10-20份和氯化钠4-7份。
[0010]优选的，上述酪酸菌发酵培养基，所述鱼粉、玉米粉和豆柏在使用前，粉碎至80目。
[0011]优选的，上述酪酸菌发酵培养基，所述氮源为鱼粉、豆柏和酵母膏，碳源为葡萄糖，按其重量份数计鱼粉20份，豆柏10份，酵母膏0.5份，葡萄糖10份，氯化钠5份。[0012]优选的，上述酪酸菌发酵培养基，所述氮源为豆柏和酵母膏，碳源为葡萄糖和玉米粉，按其重量份数计豆柏15份，酵母膏15份，葡萄糖7份，玉米粉12份，氯化钠6份。
[0013]优选的，上述酪酸菌发酵培养基，所述氮源为豆柏和酵母膏，碳源为葡萄糖，按其重量份数计豆柏12份，酵母膏12份，葡萄糖10份，氯化钠6份。
[0014]上述酪酸菌发酵培养基的制备方法，具体步骤如下:
[0015](I)按重量份数称取氮源20-35份、碳源10-20份、氯化钠4_7份；
[0016](2)氮源水煮或者酶解后加入碳源和氯化钠，调整pH至7.4-7.5，其余用去离子水补足到IL ；
[0017](3)高压蒸汽灭菌培养基121°C 20min。
[0018]优选的,上述酪酸菌发酵培养基的制备方法,其中氮源含有动物蛋白时,例如来源为鱼粉时，植物蛋白，例如来源豆柏可以水煮；若没有动物蛋白，例如鱼粉时，可将豆柏酶解，提供全面的可吸收的营养物质。
[0019]优选的，上述酪酸菌发酵培养基的制备方法，所述步骤(1)中鱼粉、豆柏在使用前粉碎至80目。
[0020]优选的，上述酪酸菌发酵培养基的制备方法，具体步骤如下:
[0021](I)所述的发酵 培养基按g/L计为鱼粉20，豆柏10，酵母膏0.5，葡萄糖10，氯化钠5进行称取；
[0022](2)培养基配置前，豆柏经过水煮沸30min，10层纱布过滤，过滤液添加到培养基中去；
[0023](3)过滤液中，依次称量加入其余培养基组分，用去离子水溶解，调整pH为7.5。
[0024]优选的，上述酪酸菌发酵培养基的制备方法，具体步骤如下:
[0025](I)所述的发酵培养基按g/L计为豆柏15，酵母膏15，葡萄糖7，玉米粉12，氯化钠6进行称取；
[0026](2)培养基配置前，每Ig豆柏加水IOmL混匀成水溶液，按添加量1%的50000U/g中性蛋白酶加入水溶液，再40°C酶解4.5h ；
[0027](3)酶解后，依次称量加入其余培养基组分，用去离子水溶解，调整pH为7.4。
[0028]优选的，上述酪酸菌发酵培养基的制备方法，具体步骤如下:
[0029](I)所述的发酵培养基按g/L计为豆柏12，酵母膏12，葡萄糖10，氯化钠6进行称取；
[0030](2)培养基配置前，每Ig豆柏加水IOmL混匀成水溶液，按添加量1%的50000U/g中性蛋白酶加入水溶液，再40°C酶解4.5h ；
[0031](3)酶解后，依次称量加入其余培养基组分，用去离子水溶解，调整pH为7.4。
[0032]一种酪酸菌的培养发酵方法，在酪酸菌发酵罐培养过程中，将酪酸菌种子培养液以接种量4-6%接入装有上述发酵培养基的自动发酵罐中，发酵期间主要控制参数如下:搅拌速度50-100rpm/min，不通空气；温度37°C，培养14_18h，即可获得109CFU/mL以上酪酸菌活菌体。
[0033]优选的，上述酪酸菌培养发酵方法，具体步骤如下:
[0034](I)酪酸菌一级固体培养:
[0035]将酪酸菌用接种针穿刺于一级固体试管培养基上，于37°C培养18_20h，所述一级固体试管培养基按下述比例配制而成:按g/L计蛋白胨10.0，氯化钠5.0，葡萄糖2.0，L-胱氨酸盐酸盐0.5，磷酸氢二钠2.5，琼脂20进行称取，依次加入蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、磷酸氢二钠、琼脂，用去离子水溶解，调整PH为7.4，高压蒸汽灭菌培养基121°C 20min, L-胱氨酸盐酸盐用无菌0.22膜过滤再无菌加入得到一级固体试管培养基；
[0036]( 2 )酪酸菌二级试管液体培养:
[0037]将步骤(1)培养的一级酪酸菌菌落接种于二级液体培养液中，装液量10mL，于37°C静止厌氧培养18h，得到二级酪酸菌种子液，所述二级液体培养液按下述比例配制而成:按g/L计蛋白胨15.0，酵母浸出粉5.0，葡萄糖5.0，硫乙醇酸钠0.5，L-胱氨酸盐酸盐
0.5，氯化钠2.5进行称取，依次加入蛋白胨、酵母浸出粉、葡萄糖、硫乙醇酸钠、氯化钠，用去离子水溶解，调整PH为7.4，高压蒸汽灭菌培养基121°C 20min, L-胱氨酸盐酸盐用无菌
0.22膜过滤再无菌加入得到二级液体培养液；
[0038](3)酪酸菌三级三角瓶液体扩大培养:
[0039]将步骤(2)得到的酪酸菌种子液以接种量3%接入三角瓶，三角瓶发酵培养基装液量为70%，于37°C静止厌氧培养22h，得到酪酸菌；
[0040](4)酪酸菌的发酵罐培养:
[0041]将步骤(3)得到的酪酸菌种子培养液以接种量4-6%接入装有上述发酵培养基的自动发酵罐中，发酵期间主要控制参数如下:搅拌速度50-100rpm/min，不通空气；温度37°C，培养14-18h，即 可获得109CFU/mL以上酪酸菌活菌体。
[0042]本发明的有益效果:
[0043]上述酪酸菌培养发酵方法的技术效果如下:
[0044]1.针酪酸菌建立的一套发酵工艺中利用鱼粉和豆柏等代替胰蛋白胨、蛋白胨等，价格便宜，来源广泛，且大大降低了生产成本，适合批量生产；
[0045]2采用多种物质作为碳源氮源，大大扩大了实际应用范围；
[0046]3.所涉及的酪酸菌发酵，发酵时间由原来22h降低到现在的14_16h，缩短整个发酵时间，节约了水电等资源；
[0047]4.发酵出来的酪酸菌抗逆性好，用倾注法活菌计数数高达109CFU/mL以上(GB47892-2010 )，可以避免存储和运输中活菌下降等问题。
【具体实施方式】
[0048]下面结合具体实施例对本发明所述技术方案作进一步的说明。
[0049]实施例1
[0050]一种酪酸菌发酵培养基，由鱼粉、豆柏、酵母膏、葡萄糖和氯化钠组成，按其重量份数计鱼粉20份，豆柏10份，酵母膏0.5份，葡萄糖10份，氯化钠5份。
[0051]上述酪酸菌发酵培养基的制备方法，具体步骤如下:
[0052](I)所述的发酵培养基按g/L计为鱼粉20，豆柏10，酵母膏0.5，葡萄糖10，氯化钠5进行称取，其中，鱼粉、豆柏在使用前粉碎至80目；
[0053](2)培养基配置前，豆柏经过水煮沸30min，10层纱布过滤，过滤液添加到培养基中去；
[0054](3)过滤液中，依次称量加入其余培养基组分，用去离子水溶解，调整pH为7.5 ;[0055](4)高压蒸汽灭菌培养基121 °C 20min。
[0056]实施例2
[0057]一种酪酸菌发酵培养基，由鱼粉、豆柏、酵母膏、葡萄糖和氯化钠组成，按其重量份数计鱼粉15份，豆柏4份，酵母膏1份，葡萄糖20份，氯化钠4份。
[0058]上述酪酸菌发酵培养基的制备方法，具体步骤如下:
[0059](I)所述的发酵培养基按g/L计为鱼粉15，豆柏4，酵母膏1，葡萄糖20，氯化钠4进行称取；
[0060](2)培养基配置前，豆柏经过水煮沸30min，10层纱布过滤，过滤液添加到培养基中去；
[0061](3)过滤液中，依次称量加入其余培养基组分，用去离子水溶解，调整pH为7.5 ;
[0062](4)高压蒸汽灭菌培养基121°C 20min。
[0063]实施例3
[0064]一种酪酸菌发酵培养基，由鱼粉、豆柏、酵母膏、葡萄糖和氯化钠组成，按其重量份数计鱼粉23份，豆柏11份，酵母膏1份，葡萄糖15份，氯化钠7份。
[0065]上述酪酸菌发酵培养基的制备方法，具体步骤如下:
[0066](1)所述的发酵培养基按g/L计为鱼粉23，豆柏11，酵母膏1，葡萄糖15，氯化钠7进行称取，其中，鱼粉、豆柏在使用前粉碎至80目；
[0067](2)培养基配置前，豆柏经过水煮沸30min，10层纱布过滤，过滤液添加到培养基中去；
[0068](3)过滤液中，依次称量加入其余培养基组分，用去离子水溶解，调整pH为7.5 ;
[0069](4)高压蒸汽灭菌培养基121°C 20min。
[0070]实施例4
[0071]一种酪酸菌发酵培养基，由豆柏、酵母膏、葡萄糖、玉米粉和氯化钠组成，按其重量份数计豆柏15份，酵母膏15份，葡萄糖7份，玉米粉12份，氯化钠6份。
[0072]上述酪酸菌发酵培养基的制备方法，具体步骤如下:
[0073](1)所述的发酵培养基按g/L计为豆柏15，酵母膏15，葡萄糖7，玉米粉12，氯化钠6进行称取，其中，豆柏、玉米粉在使用前粉碎至80目；
[0074](2)培养基配置前，每Ig豆柏加水IOmL混匀成水溶液，按添加量1%的50000U/g中性蛋白酶加入水溶液，再40°C酶解4.5h ；
[0075](3)酶解后，依次称量加入其余培养基组分，用去离子水溶解，调整pH为7.4 ;
[0076](4)高压蒸汽灭菌培养基121°C 20min。
[0077]实施例5
[0078]一种酪酸菌发酵培养基，由豆柏、酵母膏、葡萄糖、玉米粉和氯化钠组成，按其重量份数计豆柏12份，酵母膏8份，葡萄糖11份，玉米粉9份，氯化钠7份。
[0079]上述酪酸菌发酵培养基的制备方法，具体步骤如下:
[0080](1)所述的发酵培养基按g/L计为豆柏12，酵母膏8，葡萄糖11，玉米粉9，氯化钠7进行称取，其中，豆柏、玉米粉在使用前粉碎至80目；
[0081](2)培养基配置前，每Ig豆柏加水IOmL混匀成水溶液，按添加量1%的50000U/g中性蛋白酶加入水溶液，再40°C酶解4.5h ；[0082](3)酶解后，依次称量加入其余培养基组分，用去离子水溶解，调整pH为7.4 ;
[0083](4)高压蒸汽灭菌培养基121 °C 20min。
[0084]实施例6
[0085]一种酪酸菌发酵培养基，由豆柏、酵母膏、葡萄糖、玉米粉和氯化钠组成，按其重量份数计豆柏18份，酵母膏17份，葡萄糖4份，玉米粉6份，氯化钠4份。
[0086]上述酪酸菌发酵培养基的制备方法，具体步骤如下:
[0087](I)所述的发酵培养基按g/L计为豆柏18，酵母膏17，葡萄糖4，玉米粉6，氯化钠4进行称取；
[0088](2)培养基配置前，每Ig豆柏加水IOmL混匀成水溶液，按添加量1%的50000U/g中性蛋白酶加入水溶液，再40°C酶解4.5h ；
[0089](3)酶解后，依次称量加入其余培养基组分，用去离子水溶解，调整pH为7.4 ;
[0090](4)高压蒸汽灭菌培养基121 °C 20min。
[0091]实施例7
[0092]一种酪酸菌发酵培养基，由豆柏、酵母膏、葡萄糖和氯化钠组成，按其重量份数计豆柏12份，酵母膏12份，葡萄糖10份，氯化钠6份。 [0093]上述酪酸菌发酵培养基的制备方法，具体步骤如下:
[0094](I)所述的发酵培养基按g/L计为豆柏12，酵母膏12，葡萄糖10，氯化钠6进行称取，其中，豆柏在使用前粉碎至80目；
[0095](2)培养基配置前，每Ig豆柏加水IOmL混匀成水溶液，按添加量1%的50000U/g中性蛋白酶加入水溶液，再40°C酶解4.5h ；
[0096](3)酶解后，依次称量加入其余培养基组分，用去离子水溶解，调整pH为7.4 ;
[0097](4)高压蒸汽灭菌培养基121°C 20min。
[0098]实施例8
[0099]一种酪酸菌发酵培养基，由豆柏、酵母膏、葡萄糖和氯化钠组成，按其重量份数计豆柏10份，酵母膏10份，葡萄糖20份，氯化钠4份。
[0100]上述酪酸菌发酵培养基的制备方法，具体步骤如下:
[0101](I)所述的发酵培养基按g/L计为豆柏10，酵母膏10，葡萄糖20，氯化钠4进行称取；
[0102](2)培养基配置前，每Ig豆柏加水IOmL混匀成水溶液，按添加量1%的50000U/g中性蛋白酶加入水溶液，再40°C酶解4.5h ；
[0103](3)酶解后，依次称量加入其余培养基组分，用去离子水溶解，调整pH为7.4 ;
[0104](4)高压蒸汽灭菌培养基121°C 20min。
[0105]实施例9
[0106]一种酪酸菌发酵培养基，由豆柏、酵母膏、葡萄糖和氯化钠组成，按其重量份数计豆柏20份，酵母膏15份，葡萄糖13份，氯化钠7份。
[0107]上述酪酸菌发酵培养基的制备方法，具体步骤如下:
[0108](I)所述的发酵培养基按g/L计为豆柏20，酵母膏15，葡萄糖13，氯化钠7进行称取，其中，豆柏在使用前粉碎至80目；
[0109](2)培养基配置前，每Ig豆柏加水IOmL混匀成水溶液，按添加量1%的50000U/g中性蛋白酶加入水溶液，再40°C酶解4.5h ；
[0110](3)酶解后，依次称量加入其余培养基组分，用去离子水溶解，调整pH为7.4 ;
[0111](4)高压蒸汽灭菌培养基121°C 20min。
[0112]实施例10
[0113]一种酪酸菌培养发酵方法，具体步骤如下:
[0114](1)酪酸菌一级固体培养；
[0115](2)酪酸菌二级试管液体培养；
[0116](3)酪酸菌三级三角瓶液体扩大培养，得到酪酸菌；
[0117](4)酪酸菌的发酵罐培养:
[0118]将步骤(3)得到的酪酸菌种子培养液以接种量4%接入装有实施例1所述发酵培养基的自动发酵罐中，发酵期间主要控制参数如下:搅拌速度70rpm/min，不通空气；温度37°C，培养14h，即可获得109CFU/mL以上酪酸菌活菌体(倾注法活菌计数，GB47892-2010)。
[0119]实施例11
[0120]一种酪酸菌培养发酵方法，具体步骤如下:
[0121](I)酪酸菌一级固体培养；
[0122](2)酪酸菌二级试管液体培养；
[0123](3)酪酸菌三级三角瓶液体扩大培养，得到酪酸菌；
[0124](4)酪酸菌的发酵罐培养:
[0125]将步骤(3)得到的酪酸菌种子培养液以接种量5%接入装有实施例1所述发酵培养基的自动发酵罐中，发酵期间主要控制参数如下:搅拌速度50rpm/min，不通空气；温度37°C，培养18h，即可获得109CFU/mL以上酪酸菌活菌体(倾注法活菌计数，GB47892-2010)。
[0126]实施例12
[0127]一种酪酸菌培养发酵方法，具体步骤如下:
[0128](I)酪酸菌一级固体培养；
[0129](2)酪酸菌二级试管液体培养；
[0130](3)酪酸菌三级三角瓶液体扩大培养，得到酪酸菌；
[0131](4)酪酸菌的发酵罐培养:
[0132]将步骤(3)得到的酪酸菌种子培养液以接种量6%接入装有实施例1所述发酵培养基的自动发酵罐中，发酵期间主要控制参数如下:搅拌速度lOOrpm/min，不通空气；温度37°C，培养16h，即可获得109CFU/mL以上酪酸菌活菌体(倾注法活菌计数，GB47892-2010)。
[0133]实施例13
[0134]一种酪酸菌培养发酵方法，具体步骤如下:
[0135](I)酪酸菌一级固体培养；
[0136](2)酪酸菌二级试管液体培养；
[0137](3)酪酸菌三级三角瓶液体扩大培养，得到酪酸菌；
[0138](4)酪酸菌的发酵罐培养:
[0139]将步骤(3)得到的酪酸菌种子培养液以接种量5%接入装有实施例4所述发酵培养基的自动发酵罐中，发酵期间主要控制参数如下:搅拌速度lOOrpm/min，不通空气；温度37°C，培养15h，即可获得109CFU/mL以上酪酸菌活菌体(倾注法活菌计数，GB47892-2010)。[0140]实施例14
[0141]一种酪酸菌培养发酵方法，具体步骤如下:
[0142](I)酪酸菌一级固体培养；
[0143](2)酪酸菌二级试管液体培养；
[0144](3)酪酸菌三级三角瓶液体扩大培养，得到酪酸菌；
[0145](4)酪酸菌的发酵罐培养:
[0146]将步骤(3)得到的酪酸菌种子培养液以接种量6%接入装有实施例4所述发酵培养基的自动发酵罐中，发酵期间主要控制参数如下:搅拌速度50rpm/min，不通空气；温度37°C，培养18h，即可获得109CFU/mL以上酪酸菌活菌体(倾注法活菌计数，GB47892-2010)。
[0147]实施例15
[0148]一种酪酸菌培养发酵方法，具体步骤如下:
[0149](I)酪酸菌一级固体培养；
[0150](2)酪酸菌二级试管液体培养；
[0151](3)酪酸菌三级三角瓶液体扩大培养，得到酪酸菌；
[0152](4)酪酸菌的发酵罐培养:
[0153]将步骤(3)得到的酪酸菌种子培养液以接种量4%接入装有实施例4所述发酵培养基的自动发酵罐中，发酵期间主要控制参数如下:搅拌速度80rpm/min，不通空气；温度37°C，培养14h，即可获得109CFU/mL以上酪酸菌活菌体(倾注法活菌计数，GB47892-2010)。
[0154]实施例16
[0155]一种酪酸菌培养发酵方法，具体步骤如下:
[0156](I)酪酸菌一级固体培养；
[0157](2)酪酸菌二级试管液体培养；
[0158](3)酪酸菌三级三角瓶液体扩大培养，得到酪酸菌；
[0159](4)酪酸菌的发酵罐培养:
[0160]将步骤(3)得到的酪酸菌种子培养液以接种量6%接入装有实施例7所述发酵培养基的自动发酵罐中，发酵期间主要控制参数如下:搅拌速度80rpm/min，不通空气；温度37°C，培养16h，即可获得109CFU/mL以上酪酸菌活菌体(倾注法活菌计数，GB47892-2010)。
[0161]实施例17
[0162]一种酪酸菌培养发酵方法，具体步骤如下:
[0163](I)酪酸菌一级固体培养；
[0164](2)酪酸菌二级试管液体培养；
[0165](3)酪酸菌三级三角瓶液体扩大培养，得到酪酸菌；
[0166](4)酪酸菌的发酵罐培养:
[0167]将步骤(3)得到的酪酸菌种子培养液以接种量5%接入装有实施例7所述发酵培养基的自动发酵罐中，发酵期间主要控制参数如下:搅拌速度lOOrpm/min，不通空气；温度37°C，培养14h，即可获得109CFU/mL以上酪酸菌活菌体(倾注法活菌计数，GB47892-2010)。
[0168]实施例18
[0169]一种酪酸菌培养发酵方法，具体步骤如下:
[0170](I)酪酸菌一级固体培养；[0171](2)酪酸菌二级试管液体培养；
[0172](3)酪酸菌三级三角瓶液体扩大培养，得到酪酸菌；
[0173](4)酪酸菌的发酵罐培养:
[0174]将步骤(3)得到的酪酸菌种子培养液以接种量4%接入装有实施例7所述发酵培养基的自动发酵罐中，发酵期间主要控制参数如下:搅拌速度50rpm/min，不通空气；温度37°C，培养18h，即可获得109CFU/mL以上酪酸菌活菌体(倾注法活菌计数，GB47892-2010)。
[0175]上述实施例10-18中，酪酸菌培养发酵方法的步骤(1) - (3)中，
[0176]步骤(1)酪酸菌一级固体培养是指:将酪酸菌用接种针穿刺于一级固体试管培养基上，于37°C培养18-20h，所述一级固体试管培养基按下述比例配制而成:按g/L计蛋白胨10.0,氯化钠5.0,葡萄糖2.0，L-胱氨酸盐酸盐0.5，磷酸氢二钠2.5，琼脂20进行称取，依次加入蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、磷酸氢二钠、琼脂，用去离子水溶解，调整PH为7.4，高压蒸汽灭菌培养基121°C 20min，L-胱氨酸盐酸盐用无菌0.22膜过滤再无菌加入得到一级固体试管培养基；
[0177]步骤(2)酪酸菌二级试管液体培养是指:将步骤(1)培养的一级酪酸菌菌落接种于二级液体培养液中，装液量10mL，于37°C静止厌氧培养18h，得到二级酪酸菌种子液，所述二级液体培养液按下述比例配制而成:按g/L计蛋白胨15.0,酵母浸出粉5.0,葡萄糖
5.0，硫乙醇酸钠0.5, L-胱氨酸盐酸盐0.5，氯化钠2.5进行称取，依次加入蛋白胨、酵母浸出粉、葡萄糖、硫乙醇酸钠、氯化钠，用去离子水溶解，调整PH为7.4，高压蒸汽灭菌培养基121 °C 20min, L-胱氨 酸盐酸盐用无菌0.22膜过滤再无菌加入得到二级液体培养液；
[0178]步骤(3)酪酸菌三级三角瓶液体扩大培养是指:将步骤(2)得到的酪酸菌种子液以接种量3%接入三角瓶，三角瓶发酵培养基装液量为70%，于37°C静止厌氧培养22h，得到酪酸菌。
[0179]试验例，方法及结果见表1。
[0180]表1
[0181]
实施例10酪酸菌抗逆性I培养条件I活菌率(100%)
耐酸性pH3培养5h90
耐胆盐1.5%猪胆盐培养5h95
耐热性90 °C 15min90
[0182] 上述参照实施例对该酪酸菌发酵培养基及其制备方法与酪酸菌培养发酵方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种酪酸菌发酵培养基，其特征在于:由氮源、碳源和氯化钠组成，其中，所述氮源为鱼粉、豆柏或酵母膏的一种或任意组合，碳源为葡萄糖和/或玉米粉，按其重量份数计氮源20-35份、碳源10-20份和氯化钠4-7份。
2.根据权利要求1所述的酪酸菌发酵培养基，其特征在于:所述氮源为鱼粉、豆柏和酵母膏，碳源为葡萄糖，按其重量份数计鱼粉20份，豆柏10份，酵母膏0.5份，葡萄糖10份，氯化钠5份。
3.根据权利要求1所述的酪酸菌发酵培养基，其特征在于:所述氮源为豆柏和酵母膏，碳源为葡萄糖和玉米粉，按其重量份数计豆柏15份，酵母膏15份，葡萄糖7份，玉米粉12份，氯化钠6份。
4.根据权利要求1所述的酪酸菌发酵培养基，其特征在于:所述氮源为豆柏和酵母膏，碳源为葡萄糖，按其重量份数计豆柏12份，酵母膏12份，葡萄糖10份，氯化钠6份。
5.权利要求1-4之一所述酪酸菌发酵培养基的制备方法，其特征在于: 具体步骤如下: (O按重量份数称取氮源20-35份、碳源10-20份、氯化钠4-7份； (2)氮源水煮或者酶解后加入碳源和氯化钠，调整pH至7.4-7.5，其余用去离子水补足到IL ； (3)高压蒸汽灭菌培养基121°C20min。
6.根据权利要求5所述的酪酸菌发酵培养基的制备方法，其特征在于:所述步骤(1)中鱼粉、豆柏在使用前粉碎至80目。
7.根据权利要求5所述的酪酸菌发酵培养基的制备方法，其特征在于: 具体步骤如下: (1)所述的发酵培养基按g/L计为鱼粉20，豆柏10，酵母膏0.5，葡萄糖10，氯化钠5进行称取； (2)培养基配置前，豆柏经过水煮沸30min，10层纱布过滤，过滤液添加到培养基中去； (3)过滤液中，依次称量加入其余培养基组分，用去离子水溶解，调整pH为7.5。
8.根据权利要求5所述的酪酸菌发酵培养基的制备方法，其特征在于: 具体步骤如下: (1)所述的发酵培养基按g/L计为豆柏15，酵母膏15，葡萄糖7，玉米粉12，氯化钠6进行称取； (2)培养基配置前，每Ig豆柏加水IOmL混匀成水溶液，按添加量1%的50000U/g中性蛋白酶加入水溶液，再40°C酶解4.5h ； (3)酶解后，依次称量加入其余培养基组分，用去离子水溶解，调整pH为7.4。
9.根据权利要求5所述的酪酸菌发酵培养基的制备方法，其特征在于: 具体步骤如下: (1)所述的发酵培养基按g/L计为豆柏12，酵母膏12，葡萄糖10，氯化钠6进行称取； (2)培养基配置前，每Ig豆柏加水IOmL混匀成水溶液，按添加量1%的50000U/g中性蛋白酶加入水溶液 ，再40°C酶解4.5h ； (3)酶解后，依次称量加入其余培养基组分，用去离子水溶解，调整pH为7.4。
10.一种酪酸菌的培养发酵方法，其特征在于:在酪酸菌发酵罐培养过程中，将酪酸菌种子培养液以接种量4-6%接入装有权利要求1-4之一所述发酵培养基的自动发酵罐中，发酵期间主要控制参数如下:搅拌速度50-100rpm/min，不通空气；温度37°C，培养14_18h，SP可获得109C FU/mL以上酪酸菌活菌体。
【文档编号】C12R1/145GK103805549SQ201410089743
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2014年3月13日 优先权日:2013年3月29日
【发明者】刘珂飞, 何玉慧 申请人:天津生机集团股份有限公司