一种脂质代谢型肥胖基因体质评估的方法
【专利摘要】本发明公开了一种脂质代谢型肥胖基因体质评估方法，其特征在于，通过同时检测分析个体的ABCA1基因、LPL基因、PPARG基因、ADRB3基因SNPs位点基因携带型为所有的受检者提供脂质代谢型肥胖体质评估，可以让受检者在考虑以饮食和运动方式进行瘦身之前，先了解自身基因体质情况，了解个人的肥胖潜能成因，选择最适合的个体化营养及运动瘦身方式，将各种肥胖基因表现的型态一一击破，达到最有效健康的减重效果。
【专利说明】一种脂质代谢型肥胖基因体质评估的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种脂质代谢型肥胖基因体质评估方法，可用于评估脂质代谢型肥胖基因体质情况，针对性的提示受检者根据遗传体质选择不同的减肥策略，属于分子生物学【技术领域】。
【背景技术】
[0002]肥胖症是一种热量代谢障碍，摄入热量超过消耗的热量，引起体内脂肪积聚过多所致。一般认为超过按身高所测标准体重20%即可成为肥胖。肥胖症是一种与遗传因素及生活方式密切相关的慢性疾病，它会引发血脂升高，容易造成脂肪肝、动脉血管病变、心脏病、糖尿病，肥胖的儿童还会引发性功能发育不良并导致成人期各种疾病发病率和死亡率上升。因此，若通过有效的方法来预防，就能避免过早地出现高血压、冠心病、糖尿病、脑血管病等疾患，从而提闻人们的生存质量。
[0003]由于至少有40%躯体脂肪量的差异是由遗传因素引起的，所以很容易明确遗传对肥胖有很大影响。遗传体质不同的人在患肥胖症时应采取不同的减肥策略，利用现代科学研究成果，开发一项基于分子遗传基础的体重管理分子检测产品会对减肥者的减肥计划提供基因减肥概念的个性化体重管理建议，具有较强的社会意义和市场前景。目前肥胖症的临床治疗方法主要是饮食和运动疗法，但存在着碳水化合物、脂肪以及蛋白质摄入量控制“一刀切”和盲目采用减肥药物的非个体化治疗方式。原因主要在于无法明确地将患者区分成为不同的减重体质，从而对不同患者是否需要严格控制碳水化合物的摄入，是否需要控制脂肪的摄入，是否需要使用减肥药物，以及应该使用哪类减肥药物的治疗措施选择上没有明确指导。
[0004]脂类物质具有重要的生物功能，脂肪是体内的一种主要能量来源，但脂肪摄入过量而运动量又过少将产生肥胖，并导致一些慢性病的发生；膳食脂肪总量增加，还会增大某些癌症的发生几率。因此有意识地控制脂肪摄入和积极从事体力或体育活动，以消耗摄入多余的热量，避免过多的脂肪在体内积存。
[0005]研究发现，脂质代谢型肥胖相关基因变异会导致脂肪细胞增大增多、内脏脂肪组织的脂肪分解减少，皮下脂肪含量变多，造成脏器脂肪含量增高，体重易上升，基础代谢率低，易形成高血压，葡萄糖的耐受性高，内脏脂肪组织的脂肪分解减少，导致脏器肥胖。因此应有意识地控制脂肪摄入和积极从事体力或体育活动，以消耗摄入多余的热量，避免过多的脂肪在体内积存。
[0006]研究发现ABCA1，LPL, PPARG, ADRB3基因与脂质代谢型肥胖体质有关。
[0007]ABCAl 为 ATP-binding cassette transporterAl, abcal (三憐酸腺苷结合盒转运体Al)蛋白编码基因，它以ATP为能源，促进细胞内游离胆固醇和磷脂的流出，在胆固醇逆转运(RCT)和HDL生成的起始步骤中起重要作用，被称作RCT守门人。核受体PPARs、LXRs和FXR对abcal蛋白的表达具有调控作用。ABCAl功能障碍将导致巨噬细胞内大量的胆固醇沉积而成为泡沫细胞，继而浸润血管壁，促进冠心病的发生发展。[0008]ABCAl在机体中最重要的作用是对高密度脂蛋白的转运。高密度脂蛋白是机体重要的抵抗心脑血管疾病的大分子，它可以将机体多余的胆固醇从外周细胞转运入肝脏内，同时也可以保护低密度脂蛋白不受氧化损伤的影响，抑制血管内皮细胞上粘性大分子的表达，组织单核分子进入血管壁。而ABCAl对于肝脏内和外周细胞内的胆固醇水平可以进行调节，主要通过将多余的胆固醇从外周细胞泵出，与乏脂蛋白apoA-1结合形成初始状态的高密度脂蛋白，而初始状态的高密度脂蛋白通过胆固醇磷酸酰化成为胆淄醇酸脂的脂化反应转化为成熟的α高密度脂蛋白。决定血清内α高密度脂蛋白含量的几个因素包括肝脏内ABCAl转运酶和apoA-1的含量以及乏脂蛋白apoA_I的含量。
[0009]LPL基因编码脂蛋白脂酶，该酶在心脏、肌肉和脂肪组织中进行表达。LPL以同型二聚体蛋白的形式行使功能，其分子生物学的作用包括两部分，一部分为甘油三脂的水解酶作用，另一部分则是受体介导的脂蛋白内吞作用的桥梁。LPL蛋白上的位点突变在严重的情况下可以导致I型高脂蛋白血症，而较轻程度上则引起体内脂蛋白代谢的紊乱，导致高脂蛋白血症、糖尿病、肥胖等疾病发病风险增高。
[0010]PPARG 为 peroxisome proliferative activated receptor, gamma (过氧化物酶体增生激活受体Y )编码基因，属于核受体过氧化物酶体增生激活受体亚家族，可以与类维生素A受体(RXR)接合形成异型二聚物，该异性二聚物可以通过与特异DNA序列的结合调控多种基因的转录，该特异DNA序列通常称为过氧化物酶体增殖反应元件，PREE。PPARG编码的蛋白主要负责脂类的分化代谢以及糖、脂代谢等。此外，PPARG还被发现与多种疾病相关，包括:肥胖、糖尿病、动脉硬化和癌症等。PPARG突变或异常表达等都会引起过氧化物酶体增生激活受体Y活性偏高，脂肪酸吸收增加，容易造成脂肪堆积。
[0011]肾上腺素受体(ADRB3)在瘦素调节的神经通路中扮演着重要角色，通过传递交感神经信号，参与骨的重吸收和能量的代谢，对骨骼发育及体重的调节有着重要影响。ADRB3突变或异常表达等会造成 内脏脂肪组织的脂肪分解减少，皮下脂肪含量变多，造成脏器肥胖。携带Arg64的同型或异性合子脏器脂肪含量特高，体重易上升，基础代谢率低，易形成高血压，葡萄糖的耐受性高，内脏脂肪组织的脂肪分解减少，造成内脏肥胖。
[0012]目前的基础研究已能从理论上证明基因分型检测可以用于判断肥胖体质的类型，而且检测方法简便、检测成本在可接受程度中、检测结果可信。因此，基因分型检测用于评估肥胖体质的可行性是明确的。根据基因检测结果结合体重管理测评系统建立个性化体重健康评估报告，有针对的解决体重控制问题，提高人们生活质量。因此利用现有科学、技术研究成果来开发这样一个产品，时机是成熟的。
[0013]本发明的目的是提供一种脂质代谢型肥胖基因体质评估方法，可以让受检者在考虑以饮食和运动方式进行瘦身之前，先了解自身基因体质情况，了解个人的肥胖潜能成因，选择最适合的个体化营养及运动瘦身方式，将各种肥胖基因表现的型态一一击破，达到最有效健康的减重效果。
【发明内容】
[0014]本发明的目的是提供一种脂质代谢型肥胖基因体质评估方法，可以让受检者在考虑以饮食和运动方式进行瘦身之前，先了解自身基因体质情况，了解个人的肥胖潜能成因，选择最适合的个体化营养及运动瘦身方式，将各种肥胖基因表现的型态一一击破，达到最有效健康的减重效果。
[0015]为实现以上目的，本发明提供一种脂质代谢型肥胖基因体质评估方法。其具体步骤为:
步骤1:检测的样品类型与采样方法
用采样拭在口腔中分别左右两腮至少需要各上下刮40次以上，以保证采集到足量的细胞样本；
步骤2:基因组DNA的抽提方法
采用硅胶吸附法抽提每一个口腔上皮细胞样本的基因组DNA，时间为2小时一 2.5小时，经电泳检测后，用肉眼可见清晰白色条带即可判断获得的DNA能进入下一步检测；
步骤3:荧光定量PCR反应
将每一个被测者样本分别放入4个反应孔，同时检测4个位点，即三磷酸腺苷结合盒转运体Al (ABCAl) rs2230806 ;脂蛋白脂酶(LPL) rs320 ;过氧化物酶体增生激活受体Y(PPARG)rsl801282 ;肾上腺素受体(ADRB3)rs4994，另外根据实验需要增设不含DNA模版的NTC空白对照孔； 每一个反应孔的基因分型可以根据下表的引物和探针设计，采用TaqMan?_MGB技术，进行检测试剂合成；
在每一个反应孔中加入试剂为荧光定量PCR反应体系，总体积为10μ1,即浓度为20ng/μ? 的 DNA 模板 2μ1、?μ1 IOX 荧光定量 PCR 反应缓冲液 ABI Taqman ? MGB、0.?μ? 25mMd NTP合成DNA的四种脱氧核苷酸底物、0.5μ1 25mM MgCl2溶液、0.02μ1 (5unitsM) TaqDNA聚合酶、去离子水4.98μ1、4个位点分别采用不同的正向引物(20μΜ, 0.225μ1 )、反向弓丨物(20μΜ，0.22541)、￥1(:荧光探针(1(^]\1，0.25μ1)和 FAM 荧光探针(ΙΟμΜ，0.25μ1)工具进行检测(探针、引物、序列如下);
三磷酸腺苷结合盒转运体Al (ABCAI) rs2230806 带VIC荧光A型探针 CAAaGGAGAAACT 带FAM荧光G型探针 CAAgGGAGAAACT 正向引物 AAGTCTGTGCAATGGATCAAAA 反向引物 CTCACCAGGATTGGCTTCAG
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acggctggct gggagtttgt gatataattt agttcagtgg tattctaagt gttcttagtg
【权利要求】
1.一种脂质代谢型肥胖基因体质评估方法，其特征在于，具体步骤为 步骤1:检测的样品类型与采样方法 用采样拭在口腔中分别左右两腮至少需要各上下刮40次以上，以保证采集到足量的细胞样本； 步骤2:基因组DNA的抽提方法 采用硅胶吸附法抽提每一个口腔上皮细胞样本的基因组DNA，时间为2小时一 2.5小时，经电泳检测后，用肉眼可见清晰白色条带即可判断获得的DNA能进入下一步检测； 步骤3:荧光定量PCR反应 将每一个被测者样本分别放入4个反应孔，同时检测4个位点，即三磷酸腺苷结合盒转运体Al (ABCAl) rs2230806 ;脂蛋白脂酶(LPL) rs320 ;过氧化物酶体增生激活受体Y(PPARG)rsl801282 ;肾上腺素受体(ADRB3)rs4994，另外根据实验需要增设不含DNA模版的NTC空白对照孔； 每一个反应孔的基因分型可以根据下表的引物和探针设计，采用TaqMan?_MGB技术，进行检测试剂合成； 在每一个反应孔中加入试剂为荧光定量PCR反应体系，总体积为10μ1,即浓度为20ng/μ? 的 DNA 模板 2μ1、?μ1 IOX 荧光定量 PCR 反应缓冲液 ABI Taqman ? MGB、0.?μ? 25mMd NTP合成DNA的四种脱氧核苷酸底物、0.5μ1 25mM MgCl2溶液、0.02μ1 (5unitsM) TaqDNA聚合酶、去离子水4.98μ1、4个位点分别采用不同的正向引物(20μΜ, 0.225μ1 )、反向弓丨物(20μΜ，0.22541)、￥1(:荧光探针(1(^]\1，0.25μ1)和 FAM 荧光探针(ΙΟμΜ，0.25μ1)工具进行检测(探针、引物、序列如下);
2.权利要求书I中的所述的四个基因的组合模式。
【文档编号】C12Q1/68GK103834739SQ201410091402
【公开日】2014年6月4日 申请日期:2014年3月13日 优先权日:2014年3月13日
【发明者】毛丹丹, 王校, 傅咏南, 李晓莹, 卞雪莲 申请人:上海中优门诊部有限公司