一种化合物的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种制备式（I）化合物的方法，该方法包括在培养基中培养微生物链格孢单孢变种ST-026-R?CGMCC?No.0899，以使所述微生物细胞内和所述培养基中产生和聚集所述式（I）化合物，以及从所述微生物细胞内和培养基中回收并提纯所述式（I）化合物，其中，在所述培养基中，碳源物质与氮源物质的重量比为10-18:1，
【专利说明】一种化合物的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种化合物的制备方法。
【背景技术】
[0002] CN1880309A公开了一种结构式为（a)的具有抗癌、抗真菌、抗病毒活性的化合物， 该化合物是由该专利菌株发酵后经提取纯化而得。该化合物抗癌机理为促进癌细胞凋亡， 抗真菌机理为真菌细胞壁β -1，3-葡聚糖合成酶抑制剂。
[0003]
【权利要求】
1. 一种制备式α)化合物的方法，该方法包括在培养基中培养微生物链格孢单孢变种 (Alternaria alternate var.monosporus)ST-〇26_R CGMCC No. 0899,以使所述微生物细胞 内和所述培养基中产生和聚集所述式（I)化合物，以及从所述微生物细胞内和培养基中回 收并提纯所述式（I)化合物，其特征在于，在所述培养基中，碳源物质与氮源物质的重量比 为 10-18:1，
2. 根据权利要求1所述的方法，其中，在培养过程中，向所述培养基中两次加入诱导子 物质，第一次是在接种时加入，第二次是在菌体生长的对数生长前期加入，其中，第一次加 入的所述诱导子物质占所述培养基的〇. 001-0. 07重量％ ;第二次加入的所述诱导子物质占 所述培养基的〇. 005-0. 5重量％。
3. 根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述诱导子物质选自柠檬酸铵、硝酸铈铵、高 锰酸钾、丙酮酸、对一香豆酸、硫酸钒、马尿酸、α-萘乙酸、6-苄氨基嘌呤、硝酸银和肉桂酸 中的一种或多种。
4. 根据权利要求1所述的方法，其中，在培养过程中，向所述培养基中两次加入前体物 质，第一次是在接种时加入，第二次是在所述微生物产生蓝绿色素时加入；其中，第一次加 入的所述前体物质占所述培养基的〇. 01-0. 05重量％ ;第二次加入的所述前体物质占所述 培养基的〇. 04-0. 15重量％。
5. 根据权利要求4所述的方法，其中，第一次加入的所述前体物质与第二次加入的所 述前体物质的重量比为1 :8-15。
6. 根据权利要求4或5所述的方法，其中，所述前体物质选自苯甲酰胺、丙酰胺和乙酰 胺中的一种或多种。
7. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述培养基中的所述碳源物质选自葡萄糖、蔗 糖、麦芽糖、果糖、甘油、淀粉、乳糖和半乳糖中的一种或多种；所述氮源物质选自冷榨黄豆 饼粉、棉子饼粉、玉米浆、酵母粉、蛋白胨、牛肉浸膏和酵母提取物中的一种或多种。
8. 根据权利要求7所述的方法，其中，所述培养基还含有磷酸盐、钙盐、镁盐、铁盐和钠 盐中的一种或多种无机或有机盐物质；和/或硼酸、碘化钾、二氯化钴、硫酸锌、硫酸锰和维 生素中的一种或多种微量物质。
9. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述培养在需氧条件下进行，温度为23-29°C，培 养初始pH值为5. 5-8,在培养中后期调节pH值为6-7. 5。
10. 根据权利要求1所述的方法，其中，回收并提纯所述式（I)化合物包括以下步骤： (1) 将所述培养过程所得培养液的pH值调整为4-8并分离出发酵微生物和发酵上清 液； (2) 将所述发酵微生物干燥并控制其含水量为25-35重量％，并在-20°C至_70°C放置 8-12h ； (3) 在避光的条件下，用第一有机溶剂提取步骤（2)的所得物；用第二有机溶剂萃取所 述发酵上清液，挥干溶剂； (4) 将第（3)步所得物依次用正相吸附色谱法和结晶的方法纯化。
11. 根据权利要求10所述的方法，其中，所述第一有机溶剂选自乙酸乙酯与丙酮以 1:1-2的体积比混合的混合物、乙酸乙酯与三氯甲烷以1:1-2的体积比混合的混合物、pH值 为3-5的甲醇和pH值为3-5的乙醇中的一种或多种；所述第二有机溶剂选自三氯甲烷和/ 或二氯甲烷。
12. 根据权利要求10或11所述的方法，其中，所述第（4)步骤中所述正相吸附色谱法 包括：使用一个或一个以上的色谱柱，色谱柱填料包括硅胶或氧化铝，流动相包括丙酮和/ 或二氯甲烷；对第（3)步所得物采用二氯甲烷、丙酮与二氯甲烷以4:96的体积比混合的混 合物、丙酮与二氯甲烷以20:80的体积比混合的混合物以及丙酮依次进行梯度洗脱。
13. 根据权利要求10或11所述的方法，其中，所述第（4)步骤中所述结晶的方法包括： 将经过正相吸附色谱法的所得物减压浓缩至饱和，加入等体积的石油醚，静置结晶、过滤、 干燥。
【文档编号】C12R1/645GK104059950SQ201410131999
【公开日】2014年9月24日 申请日期:2014年4月2日 优先权日:2014年4月2日
【发明者】陈杰鹏, 段丽丽, 陈煜藩, 陈鸿锐, 邱雪莲, 叶红林, 洪琳, 纪烨瑜, 黄晓莹, 陈倩莹, 许志锴 申请人:广东双骏生物科技有限公司