一种缓解压力及调节肠胃的功能食品及其二步发酵制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种缓解压力及调节肠胃的功能食品及其二步发酵制备方法，该方法包括：以含调节肠胃的天然组分为药性培养基质，接种猴头菇液体菌种进行双向固体发酵制备具有调节肠胃功能的药性菌质；以药性菌质为原料，粉碎后添加酵母粉、谷氨酸钠、水制成发酵培养基，接种乳酸菌进行液体深层发酵生产缓解压力的γ-氨基丁酸，制备同时具有缓解压力和调节肠胃功能的发酵液；采用发酵液，制备成不同剂型的缓解压力及调节肠胃的功能食品。本发明方法制备的缓解压力及调节肠胃的功能食品以猴头菇菌质和γ-氨基丁酸配伍同时具有缓解压力及调节肠胃功能，市场前景广阔，此外该制备方法稳定，适合大规模生产。
【专利说明】—种缓解压力及调节肠胃的功能食品及其二步发酵制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及功能食品及其制备领域，具体涉及一种缓解压力及调节肠胃的功能食品及采用猴头菇、乳酸菌固液二步发酵制备该功能食品的方法。
【背景技术】
[0002]随着现代物质生活的丰富和工作节奏的加快，饮食不规律，暴饮暴食成为现代人的通病，导致越来越多人出现肠胃功能紊乱，此外竞争加剧，人们学习和工作压力越来越大，精神高度紧张和情绪极易波动也是损伤脾胃，导致肠胃功能障碍的重要原因，压力大和肠胃功能障碍严重影响人们的生活质量。目前尚无同时缓解压力和调节肠胃的功能食品，因此研发一种能缓解压力和调节肠胃的功能食品，通过日常保健来减轻压力和调节肠胃符合“治未病”的现代养生理念，具有广阔的市场前景。
[0003]猴头菇性平、味甘、助消化，具有益气、健脾、和胃功能，对胃黏膜有修复和保护作用，是药食同源的珍贵食用菌。研究还发现猴头菇多糖等活性物质对小鼠肠道菌群有明显调节作用。目前已商业化生产的猴头菇制品有:猴头菇饼干、猴头菇口服液、猴头菇饮料，目前大多猴头菇制品以猴头菇子实体为原料生产，存在原料成本高、产品中活性成分含量低等问题，以猴头菇菌丝体为原料则可解决这些问题，如专利201110098445.4《一种具有免疫调节及改善肠胃道功能的保健食品》中猴头菇以小刺猴头菌液体发酵制备，改善胃肠道功能更强。但是猴头菇菌丝体都是以玉米粉、豆饼、麦麸等为基质，以传统固体或液体发酵工艺制备，并无利用猴头菇和具有一定功效的药性基质通过双向发酵制备的报道。
[0004]庄毅等首次提出双向发酵的概念，指出食药用真菌与含有活性成分的中药材进行发酵具有双向性，能产生1+1>2的生理效果，如专利201110271923.7《一种具有降血糖功效的真菌药性菌质及其制备方法》选用具有降血糖功效的药性基质和真菌菌种作为双向发酵获得具有明显的降低血糖又不增加胰岛素浓度的作用的药性菌质，专利200910058889.8《含有灵芝的发酵菌质混合物、制备方法及其应用》以灵芝和含有丹参的药性基质进行双向发酵，得到兼具丹参药材和灵芝真菌功效的菌质发酵终产物。因此，选用猴头菇和具有肠胃调节功能的药性基质和进行固体发酵，通过药性基质对猴头菇菌丝体生长代谢过程的影响和猴头菇真菌酶系对药性基质改造在内的双向性固体发酵后，得到兼具药性基质和猴头菇调节肠胃功能的药性菌质，可作为保健食品原料，对肠胃障碍者能够产生1+1>2的效果。
[0005]Y -氨基丁酸是一种重要的抑制性神经递质，现代医学研究证明Y -氨基丁酸具有镇静神经、缓解压力的功效，卫生部2009年第12号公告批准乳酸菌发酵法制备的Y-氨基丁酸为新资源食品。从传统发酵食品中筛选的乳酸菌安全性高，可用于Y-氨基丁酸的生产，如专利200780006225.6《能够生产Y -氨基丁酸的乳酸菌》从未精制的酱油中分离到能够生产Y-氨基丁酸(GABA)的凝乳酶乳酸杆菌，专利200910183478.1《一株高效转化L-谷氨酸为Y-氨基丁酸乳酸菌的选育》从自制酸菜中筛选出一株能利用L-谷氨酸生产Y-氨基丁酸的植物乳杆菌。但是乳酸菌只能利用单糖、二糖等小分子碳源，不能直接利用含淀粉以及纤维质的天然基质，而真菌具有降解淀粉和纤维质的酶系，可将淀粉质、纤维质分解为可供乳酸菌利用的小分子碳源，将真菌发酵与乳酸菌发酵相耦合进行分步发酵可解决这一问题。
【发明内容】
[0006]针对目前并无同时缓解压力及调节肠胃的功能食品，本发明提供一种同时缓解压力及调节肠胃的功能食品，同时提供了该功能食品利用猴头菇、乳酸菌二步发酵制备方法。
[0007]—种缓解压力及调节肠胃的功能食品的二步发酵制备方法，包括如下步骤:
[0008](I)猴头菇固体发酵:以含有调节肠胃的天然组分为药性培养基质，接种猴头菇液体菌种进行双向固体发酵制备具有调节肠胃功能的药性菌质；
[0009](2)乳酸菌液体深层发酵:以步骤(I)的药性菌质为原料，粉碎后添加酵母粉、谷氨酸钠、水制成发酵培养基，接种乳酸菌进行液体深层发酵生产缓解压力的Y-氨基丁酸，制备同时具有缓解压力和调节肠胃功能的发酵液；
[0010](3)采用步骤(2)的发酵液，制备成不同剂型的缓解压力及调节肠胃的功能食品。
[0011]本发明中，步骤(I)以含有调节肠胃功能的天然组分作为药性培养基质，接种猴头菇进行双向固体发酵，通过药性培养基质对猴头菇菌丝体生长代谢过程的影响和猴头菇真菌酶系对药性培养基质改造在内的双向性固体发酵后，得到兼具药性基质和猴头菇调节肠胃功能的药性菌质；步骤(2)以猴头菇降解后含有小分子碳源等营养物质的药性菌质为原料，添加酵母粉以及谷氨酸钠制作液体培养基，接种可产生Y -氨基丁酸的乳酸菌进行发酵，制备具有缓解压力和调节肠胃功能的发酵液；最后，发酵液经过过滤、浓缩、喷雾干燥、造粒、压片等工艺制备成功能食品。
[0012]步骤(I)中，所述的猴头菇可采用现有技术，猴头菇液体菌种采用现有的常规工艺制得，如具体可选择猴头菇ACCC51804，即中国农业微生物菌种保藏管理中心(ACCC)保藏的菌种。
[0013]步骤(I)中，所述的猴头菇液体菌种的接种量为2%_10%，即所述的猴头菇液体菌种的加入的体积量(HiL)为药性培养基质的质量(g)的2%-10% (mL/g),以IOOg药性培养基质为基准，加入2-10mL的猴头菇液体菌种。
[0014]步骤(I)中，所述的药性培养基质的制备:先称取以下重量百分含量的原料:全粒大麦70%-80%、山药10%-20%、铁皮枫斗1%-2%、党参1%_2%、茯苓1%_2%、陈皮1%_2%、佛手1%-2%、石膏粉0.5%-1.5%，将各组分混合、粉碎，然后加水至水分重量含量为60%-65%，1160C -126°C灭菌0.5h-l.5h。优选的，所述的药性培养基质的制备:先称取以下重量百分含量的原料:全粒大麦75%、山药15%、铁皮枫斗2%、党参2%、茯苓2%、陈皮2%、佛手1%、石膏粉1%，将各组分混合、粉碎，然后加水至水分重量含量为60%-65%，121°C灭菌lh。。
[0015]步骤(I)中，所述的双向固体发酵的条件为:发酵温度在25°C _28°C，发酵时间在20-25天，以该猴头菇固体发酵条件为宜。
[0016]步骤(2)中，所述的乳酸菌为植物乳酸菌，优选的为从四川泡菜中筛选的植物乳杆菌LW106 (保藏编号为=CGMCC N0.5655)，即采用中国普通微生物菌种保藏管理中心CGMCC保藏的菌种，植物乳酸菌液体菌种采用MRS培养基28°C静置培养48h获得。
[0017]步骤(2)中，所述的发酵培养基采用以下重量份的原料:水1000重量份、药性菌质40-50重量份、酵母粉5-10重量份、谷氨酸钠15-20重量份，将药性菌质、酵母粉和谷氨酸钠溶于水，添加醋酸和醋酸钠配制成pH为5-6的缓冲液，1160C _126°C灭菌20min-40min。作为优选，所述的发酵培养基采用以下重量份的原料:水1000重量份、药性菌质50重量份、酵母粉7.5重量份、谷氨酸钠20重量份，将药性菌质、酵母粉和谷氨酸钠溶于水，添加醋酸和醋酸钠配制成pH为5.5的缓冲液，121°C灭菌30min。
[0018]步骤(2)中，所述的乳酸菌的接种量为1%_5%，即所述的乳酸菌的加入的体积量为发酵培养基体积的1%_5%。
[0019]步骤(2)中，所述的液体深层发酵的条件为:发酵温度在28_32°C，发酵时间在48-72h，以该发酵条件为宜。
[0020]步骤(2)中，所述的发酵液中Y-氨基丁酸的含量为9_12g/L。
[0021]步骤(3)中，所述的发酵液通过过滤、浓缩、调配、冷冻干燥、灭菌等工艺制备成不同剂型的功能食品。
[0022]所述的缓解压力及调节肠胃的功能食品的剂型为口服剂型，优选为口服液、片剂或固体饮料，发酵液经过滤、浓缩、调配、灭菌，灌装为口服液，发酵液经过滤、浓缩、喷雾干燥、制粒，包装为固体饮料，发酵液经过滤、浓缩、喷雾干燥、制粒，压片为片剂。具体地，发酵液首先经过过滤、浓缩、喷雾干燥成粉末，粉末经沸腾造粒机造粒、筛分、包装制成固体饮料，每包Ig ;粉末经沸腾造粒机造粒后用颗粒整粒机以20目筛进行整粒，整粒所得颗粒加入0.5%崩解剂羧甲淀粉钠和0.1%润滑剂硬脂酸镁在多维运动混合机中充分混匀5分钟压成片剂，片剂0.5g/片。即加入相对于整粒所得颗粒重量的0.5%崩解剂羧甲淀粉钠，加入相对于整粒所得颗粒重量的0.1%润滑剂硬脂酸镁。
[0023]通过上述二步发酵制备方法制备的缓解压力及调节肠胃的功能食品，具有同时缓解压力及调节肠胃的保健功能。
[0024]猴头菇与调节肠胃的药性培养基质双向发酵可制备调节肠胃功能显著的药性菌质，而药性培养基质通过猴头菇的降解作用，可为乳酸菌发酵产Y-氨基丁酸提供营养和碳源，同时通过乳酸菌的降解转化，药性菌质更易吸收和利用，因此采用猴头菇和乳酸菌二步发酵可制备可同时缓解压力和调节肠胃的功能食品。
[0025]与现有技术相比，本发明具有如下有益效果:
[0026]( I)本发明根据猴头菇具有调节肠胃功能，Y -氨基丁酸具有缓解压力功效，二者配伍具有缓解压力和调节肠胃的功能，提供了一种以功能强化的猴头菇药性菌质和Y-氨基丁酸配伍的可同时缓解压力和调节肠胃的功能食品制备方法，该方法采用二步发酵法将食用菌发酵与乳酸菌发酵有机结合，其中第一步利用猴头菇和具备调节肠胃功能药性培养基质的双向固体发酵制备兼具猴头菇和药性基质调节肠胃功能的药性菌质，该过程不仅能产生1+1 > 2的生理功效，还可将药性培养基质中的大分子碳源降解为乳酸菌易于利用的小分子碳源，为第二步乳酸菌液体深层发酵产生具备缓解压力作用的Y-氨基丁酸提供必要的营养和碳源，同时通过乳酸菌的降解和转化药性菌质也更易吸收、利用。
[0027](2)本发明制备的缓解压力及调节肠胃的功能食品经实验证明具有缓解压力和调节肠胃功能。
[0028](3)本发明采用的生产方法，不仅原料成本低，整个生产过程都采用低温发酵，条件温和，没有毒害物质的摄入，产品安全性、附加值高，可实现规模化生产，市场前景广阔。[0029](4)本发明制备的功能食品采用片剂、固体饮料等剂型，方便携带及服用。
【专利附图】
【附图说明】
[0030]图1为本发明缓解压力及调节肠胃的功能食品的二步发酵制备流程图；
[0031]图2为试验例2中受试者唾液皮质醇的变化率(起始点100%)。
【具体实施方式】
[0032]以下按照图1工艺流程对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此。以下没有特别说明的情况下，百分数均是指重量百分数。实施例1
[0033]1、猴头菇固体发酵:
[0034]①药性培养基质的制作
[0035]配方:全粒大麦80%、山药14.5%、铁皮枫斗1%、党参1%、茯苓1%、陈皮1%、佛手1%、石骨粉0.5% ；
[0036]配制方法:按配方比例将各组分混合、粉碎，加水至水分重量含量为65%，12TC灭菌lh，得到药性培养基质；
[0037]②接种发酵
[0038]将猴头菇ACCC51804的液体菌种(常规工艺制备)按3%体积质量比接种到①中药性培养基质，即猴头菇ACCC51804液体菌种的加入的体积量(mL)为药性培养基质的质量(g)的3% (mL/g)，25°C培养25天制备具有调节肠胃功能的药性菌质；
[0039]2、乳酸菌液体深层发酵:
[0040]①发酵培养基制作
[0041]配方:药性菌质40g、酵母粉5g,谷氨酸钠15g,自来水IL (IOOOg)；
[0042]配制方法:按配方比例将药性菌质、酵母粉、谷氨酸钠溶于水，添加醋酸和醋酸钠配制成PH为5.5的缓冲液，121°C灭菌30min，得到发酵培养基；
[0043]②接种发酵
[0044]将从四川泡菜中筛选的植物乳杆菌LW106 (保藏编号为:CGMCCN0.5655)液体菌种(MRS培养基28°C静置培养48h)按1%比例接种到①中发酵培养基，即植物乳杆菌的加入的体积量为发酵培养基体积的1%，28°C静置培养72h制备具有缓解压力和调节肠胃功能的发酵液；
[0045]3、第2步制备的发酵液首先经过过滤、浓缩、喷雾干燥成粉末，粉末经沸腾造粒机造粒、筛分、包装制成固体饮料,每包lg。
[0046]实施例2
[0047]1、猴头菇固体发酵:
[0048]①药性培养基质的制作
[0049]配方:全粒大麦80%、山药14.5%、铁皮枫斗1%、党参1%、茯苓1%、陈皮1%、佛手1%、石骨粉0.5% ；
[0050]配制方法:按配方比例将各组分混合、粉碎，加水至水分重量含量为60%，12TC灭菌lh，得到药性培养基质；
[0051]②接种发酵[0052]将猴头菇ACCC51804的液体菌种(常规工艺制备)按3%体积质量比接种到①中药性培养基质，即猴头菇ACCC51804液体菌种的加入的体积量(mL)为药性培养基质的质量(g)的3% (mL/g)，25°C培养25天制备具有调节肠胃功能的药性菌质；
[0053]2、乳酸菌液体深层发酵:
[0054]①发酵培养基制作
[0055]配方:药性菌质40g、酵母粉5g,谷氨酸钠15g,自来水IL ；
[0056]配制方法:按配方比例将药性菌质、酵母粉、谷氨酸钠溶于水，添加醋酸和醋酸钠配制成PH为5.5的缓冲液，121°C灭菌30min，得到发酵培养基；
[0057]②接种发酵
[0058]将从四川泡菜中筛选的植物乳杆菌LW106 (保藏编号为=CGMCC N0.5655)液体菌种(MRS培养基28°C静置培养48h)按1%比例接种到①中发酵培养基，即植物乳杆菌的加入的体积量为发酵培养基体积的1%，28°C静置培养72h制备具有缓解压力和调节肠胃功能的发酵液；
[0059]3、第2步制备的发酵液首先经过过滤、浓缩、喷雾干燥成粉末，粉末经沸腾造粒机造粒后用颗粒整粒机以20目筛进行整粒，整粒所得颗粒加入相对于整粒所得颗粒重量的
0.5%崩解剂羧甲淀粉钠和相对于整粒所得颗粒重量的0.1%润滑剂硬脂酸镁在多维运动混合机中充分混匀5分钟压成片剂，片剂0.5g/片。
[0060]实施例3
[0061]1、猴头燕固体发酵:
[0062]①药性培养基质的制作
[0063]配方:全粒大麦75%、山药15%、铁皮枫斗2%、党参2%、茯苓2%、陈皮2%、佛手1%、石膏粉1% ;
[0064]配制方法:按配方比例将各组分混合、粉碎，加水至水分重量含量为63% ;121°C灭菌lh，得到药性培养基质；
[0065]②接种发酵
[0066]将猴头菇ACCC51804的液体菌种(常规工艺制备)按5%体积质量比接种到①中药性培养基质，即猴头菇ACCC51804液体菌种的加入的体积量(mL)为药性培养基质的质量(g)的5% (mL/g)，28°C培养20天制备具有调节肠胃功能的药性菌质；
[0067]2、乳酸菌液体深层发酵:
[0068]①发酵培养基制作
[0069]配方:药性菌质50g、酵母粉7.5g,谷氨酸钠20g,自来水IL ；
[0070]配制方法:按配方比例将药性菌质、酵母粉、谷氨酸钠溶于水，添加醋酸和醋酸钠配制成PH为5.5的缓冲液，121°C灭菌30min，得到发酵培养基；
[0071]②接种发酵
[0072]将从四川泡菜中筛选的植物乳杆菌LW106 (保藏编号为:CGMCCN0.5655)液体菌种(MRS培养基28°C静置培养48h)按1%比例接种到①中发酵培养基，即植物乳杆菌的加入的体积量为发酵培养基体积的1%，32°C静置培养48h制备具有缓解压力和调节肠胃功效的发酵液；
[0073]3、第2步制备的发酵液首先经过过滤、浓缩、喷雾干燥成粉末，粉末经沸腾造粒机造粒、筛分、包装制成固体饮料,每包lg。
[0074]实施例4
[0075]1、猴头菇固体发酵:
[0076]①药性培养基质的制作
[0077]配方:全粒大麦75%、山药15%、铁皮枫斗2%、党参2%、茯苓2%、陈皮2%、佛手1%、石膏粉1% ;
[0078]配制方法:按配方比例将各组分混合、粉碎，加水至水分重量含量为62% ;121°C灭菌lh，得到药性培养基质；
[0079]②接种发酵
[0080]将猴头菇ACCC51804的液体菌种(常规工艺制备)按5%体积质量比接种到①中药性培养基质，即猴头菇ACCC51804液体菌种的加入的体积量(mL)为药性培养基质的质量(g)的5% (mL/g)，28°C培养20天制备具有调节肠胃功能的药性菌质；
[0081]2、乳酸菌液体深层发酵:
[0082]①发酵培养基制作
[0083]配方:药性菌质50g、酵母粉7.5g,谷氨酸钠20g,自来水IL ；
[0084]配制方法:按配方比例将药性菌质、酵母粉、谷氨酸钠溶于水，添加醋酸和醋酸钠配制成PH为5.5的缓冲液，121°C灭菌30min，得到发酵培养基；
[0085]②接种发酵
[0086]将从四川泡菜中筛选的植物乳杆菌LW106 (保藏编号为=CGMCC N0.5655)液体菌种(MRS培养基28°C静置培养48h)按1%比例接种到①中发酵培养基，即植物乳杆菌的加入的体积量为发酵培养基体积的1%，32°C静置培养48h制备具有缓解压力和调节肠胃功能的发酵液；
[0087]3、第2步制备的发酵液首先经过过滤、浓缩、喷雾干燥成粉末，粉末经沸腾造粒机造粒后用颗粒整粒机以20目筛进行整粒，整粒所得颗粒加入相对于整粒所得颗粒重量的
0.5%崩解剂羧甲淀粉钠和相对于整粒所得颗粒重量的0.1%润滑剂硬脂酸镁在多维运动混合机中充分混匀5分钟压成片剂，片剂0.5g/片。
[0088]以下通过毒理及功能试验来进一步说明本发明。由于本发明的片剂和固体饮料除剂型、辅料不同外，两者的主要原料、每日服用量、功效成分都相同，不影响产品的安全和功能。故以下针对固体饮料进行毒理和功能试验。
[0089]试验例I
[0090]毒理试验:
[0091]试验目的:检验产品是否具有毒性
[0092]试验材料:实施例3制得的固体饮料。
[0093]样品:人体口服推荐摄入量为每日两次，每次两包，Ig每包，(体重按60kg计)，折合剂量 0.067g/kg.bw。
[0094]实验动物:清洁级ICR小鼠、SD大鼠及饲料。
[0095]饲养条件:温度20-25°C、相对湿度40%_70%的屏障系统。
[0096]试验方法:
[0097]小鼠急性经口毒性试验:取实施例3制得的固体饮料，用无菌水配制成0.500g/mL,按最大灌胃量20mL/kg.bw —日内二次性灌胃给养,受试物给予剂量为20.0g/kg.bw。
[0098]Ames试验:取实施例3制得的固体饮料,用无菌水配制成0.500g/mL,为5000ug/皿的剂量，试验设5个剂量，1000、200、40、8ug/皿4个剂量用无菌水按一定倍比逐级稀释配制成10、2、0.4,0.08mg/mL，加样量均为0.1mL/皿，加入0.1mL/皿，同时设阳性、阴性及溶剂对照，计数每皿回变菌落数。
[0099]小鼠骨髓细胞微核试验:以40mg/kg *bw剂量的环磷酰胺为阳性对照,无菌水为阴性对照，试验组3个剂量分别为10.0g/kg *bw、5.0g/kg *bw、2.5g/kg *bw,取实施例3制得的固体饮料用无菌水配制成0.5,0.25,0.125g/mL,以20mL/kg.bw灌胃2次，采用30h给受试物法，两次给样间隔24h，第二次给样6h后处死动物，取胸骨常规制片、镜检、每鼠计数1000个骨髓嗜多染红细胞，观察含微核的嗜多染红细胞并观察微核发生率。
[0100]小鼠精子畸形试验:以40mg/kg *bw剂量的环磷酰胺为阳性对照，无菌水为阴性对照，试验组3个剂量分别为10.0g/kg *bw、5.0g/kg *bw、2.5g/kg *bw,取实施例3制得的固体饮料用无菌水配制成0.5、0.25、0.125g/mL,以20mL/kg *bw灌胃，每天I次,连续5d。于首次给样后的第35天处死动物，取两侧附睾精子滤液按常规制片、镜检，每鼠计数1000个完整的精子，计算精子畸形发生率。
[0101]30天喂养试验:实施例3制得的固体饮料人体推荐量4g/人/天，按人体推荐量的 30、65、100 倍设 2.00g/kg.bw/d、4.33g/kg.bw/d、6.67g/kg.bw/d 设三个剂量组,另设一个空白对照组Og/kg.bw,受试样品掺入基础饲料中饲喂大鼠,连续喂养30天,每周称I次体重和2次食物摄入量，计算每周及总的食物利用率，每天观察有无中毒变现和死亡，试验结束观察血液学、血液生化、脏器系数指标，并进行病理学检查。
[0102]试验结果:
[0103]1、急性经口毒性试验结果:受试样品对雌雄性小鼠急性经口的最大耐受量(MTD)均大于20.0g/kg.bw,属无毒级。
[0104]2、三项遗传毒性试验结果:Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验结果均为阴性。
[0105]3、30天喂养试验结果:实验期间，动物生长发育良好，各剂量组体重、食物利用率、脏器重量、脏器系数均无异常改变，血液学指标与生化各项指标均在正常范围，各脏器病理学检查均未见与受试品相关的病理改变、给予人体推荐量100倍的受试物未观察到有害作用。
[0106]试验例2
[0107]缓解压力功能试验:
[0108]试验目的:检验产品对人体是否具有缓解压力的功能
[0109]试验材料:实施例3制得的固体饮料。
[0110]样品:人体口服推荐量为每日2次，每次2包，样品I号、2号二者的包装、外观基本相同，但其中一个为实施例3制得的固体饮料，另一个为安慰剂。
[0111]受试者选择:受试者为工作压力大的白领，年龄在25-45岁，性别不限，凡符合上述条件而自愿参加并保证配合者均可纳入试验。排除以下人员:对该功能食品过敏者；短期内服用与受试功能相关的物品，影响到对结果的判断。
[0112]试验方法:当人体处在压力的状态下，唾液中就会分泌皮质醇，因此可以通过以唾液皮质醇为压力指标评价受试物缓解压力的作用。受试者随机分为试食组和安慰剂对照组，每天按推荐剂量服用，连续服用4周。试验期间不改变原来的饮食习惯，正常饮食。结果如图2所示，图2为受试者唾液皮质醇的变化率(起始点100%)，由图2可知，与对照组相t匕，试食组受试者唾液皮质醇增加显著减少(P〈0.01)，说明实施例3制得的固体饮料具有缓解压力的功效。
[0113]试验例3
[0114]调节肠胃功能试验:
[0115]试验目的:检验产品是否具有调节肠胃的功能
[0116]试验材料:实施例3制得的固体饮料。
[0117]样品:人体口服推荐量为每日2包，每次2粒，样品I号、2号二者的包装、外观基本相同，但其中一个为实施例3制得的固体饮料，另一个为安慰剂。
[0118]实验动物:清洁级ICR小鼠、SD大鼠及饲料。
[0119]饲养条件:温度20-25°C、相对湿度40%_70%的屏障系统。
[0120]试验方法:根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)评价标准，选择对胃黏膜的辅助保护作用和 改善肠道菌群功能为指标评价受试物的调节肠胃功能。评价受试物对胃黏膜的辅助保护作用时建立胃壁注射冰醋酸致大鼠慢性胃溃疡模型，设低、中、高3个剂量和阴性对照组(无菌水)，低、中、高3个剂量组分别相当于人用最大推荐剂量的5倍、10倍、30 倍，即 0.33g/kg.bw/d, 0.67g/kg.bw/d, 2.0Og/kg.bw/d,将受试物拌入饲料连续饲养实验大鼠30d，实验结束时测量各实验组胃黏膜损伤面积或体积，检查实施例3制得的固体饮料对胃黏膜损伤的保护作用，结果见表1。评价受试物改善肠道菌群功能时设低、中、高3个剂量和阴性对照组(无菌水)，低、中、高3个剂量组分别相当于人用最大推荐剂量的5倍、10 倍、30 倍，即 0.33g/kg.bw/d, 0.67g/kg.bw/d, 2.0Og/kg.bw/d,将受试物拌入饲料连续饲养实验小鼠30d，搜集粪便，用细菌16S rDNA荧光定量PCR法测定肠杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌3大类肠道菌的数量，检查实施例3制得的固体饮料对肠道菌群的调节作用，结果见表2。
[0121]表1实施例3制得固体饮料对大鼠胃壁冰醋酸注射法所致慢性胃溃疡模型保护作用 G土η=10, *Ρ〈0.05，**Ρ〈0.01)
[0122]
【权利要求】
1.一种缓解压力及调节肠胃的功能食品的二步发酵制备方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)猴头菇固体发酵:以含有调节肠胃的天然组分为药性培养基质，接种猴头菇液体菌种进行双向固体发酵制备具有调节肠胃功能的药性菌质； (2)乳酸菌液体深层发酵:以步骤(I)的药性菌质为原料，粉碎后添加酵母粉、谷氨酸钠、水制成发酵培养基，接种乳酸菌进行液体深层发酵生产缓解压力的Y-氨基丁酸，制备同时具有缓解压力和调节肠胃功能的发酵液； (3)采用步骤(2)的发酵液，制备成不同剂型的缓解压力及调节肠胃的功能食品。
2.根据权利要求1所述的缓解压力及调节肠胃的功能食品的二步发酵制备方法，其特征在于，步骤(I)中，所述的猴头菇液体菌种的接种量为2%-10%。
3.根据权利要求1所述的缓解压力及调节肠胃的功能食品的二步发酵制备方法，其特征在于，步骤(I)中，所述的药性培养基质的制备:先称取以下重量百分含量的原料:全粒大麦70%-80%、山药10%-20%、铁皮枫斗1%-2%、党参1%_2%、茯苓1%_2%、陈皮1%_2%、佛手1%-2%、石膏粉0.5%-1.5%，将各组分混合、粉碎，然后加水至水分重量含量为60%-65%，116。。_126°C灭菌 0.5h-l.5h。
4.根据权利要求3所述的缓解压力及调节肠胃的功能食品的二步发酵制备方法，其特征在于，步骤(I)中，所述的药性培养基质的制备:先称取以下重量百分含量的原料:全粒大麦75%、山药15%、铁皮枫斗2%、党参2%、茯苓2%、陈皮2%、佛手1%、石膏粉1%，将各组分混合、粉碎，然后加水至水分重量含量为60%-65%，121°C灭菌lh。
5.根据权利要求1所述的缓解压力及调节肠胃的功能食品的二步发酵制备方法，其特征在于，步骤(I)中，所述的双向固体发酵的条件为:发酵温度在25V _28°C，发酵时间在20-25 天。
6.根据权利要求1所述的缓解压力及调节肠胃的功能食品的二步发酵制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的发酵培养基采用以下重量份的原料:水1000重量份、药性菌质40-50重量份、酵母粉5-10重量份、谷氨酸钠15-20重量份，将药性菌质、酵母粉和谷氨酸钠溶于水，添加醋酸和醋酸钠配制成pH为5-6的缓冲液，1160C _126°C灭菌20min-40min。
7.根据权利要求1所述的缓解压力及调节肠胃的功能食品的二步发酵制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的乳酸菌的接种量为1%_5%。
8.根据权利要求1所述的缓解压力及调节肠胃的功能食品的二步发酵制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的液体深层发酵的条件为:发酵温度在28-32°C，发酵时间在48-72h。
9.根据权利要求1所述的缓解压力及调节肠胃的功能食品的二步发酵制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的缓解压力及调节肠胃的功能食品的剂型为口服液、片剂或固体饮料。
10.根据权利要求1?9任一项所述的制备方法制备的缓解压力及调节肠胃的功能食品O
【文档编号】A23L1/28GK104000192SQ201410136282
【公开日】2014年8月27日 申请日期:2014年4月4日 优先权日:2014年4月4日
【发明者】吴学谦, 徐娟 申请人:浙江省医学科学院