一种酚嗪类抗肿瘤抗生素及其制备方法
【专利摘要】本发明是一种新的酚嗪类抗肿瘤抗生素，其特点是通过发酵培养保藏登记号为CCTCCNo.M2013727的一株链霉菌菌株(Streptomycessp.)YIMR4,再对其发酵产物进行分离纯化，得到分子式为C25H16N404，分子量为436的一种新的抗肿瘤抗生素，经实验证明，本发明的抗肿瘤抗生素对人胃癌及人宫颈癌肿瘤细胞有抑制作用。
【专利说明】一种酚嗪类抗肿瘤抗生素及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种新的酚嗪类抗肿瘤抗生素及其制备方法，属于生物【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 不断出现的新疾病及病原菌对抗生素耐药性的增强迫使人们必须加快新药的研 发，从微生物中发现高效低毒的天然源新药先导化合物是近年来研究的热点之一。由于目 前对普通土壤环境微生物的研究已有较长历史，从中发现新颖结构活性化合物的难度越来 越大，为了寻找新抗生素先导化合物，人们已将目光转向栖息于特殊生境的微生物。
[0003] 广泛存在于植物体内的内生菌由于长期与其宿主植物的共同进化，拥有特殊的代 谢途径，产生活性新化合物的几率较大，是一类具有较好开发潜力的新微生物资源。云南 西双版纳拥有丰富的药用植物资源，其中蕴藏着大量的植物内生菌，开展从中寻找活性新 先导化合物的研究，为后续具有自主知识产权的新药研发奠定基础具有重要意义。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种不同于已知酚嗪类抗生素结构的新抗肿瘤抗生素，它对 人胃癌及人宫颈癌肿瘤细胞有抑制作用。
[0005] 本发明的另一个目的是提供一种新酚嗪类抗肿瘤抗生素的制备方法。
[0006] 本发明的技术方案如下： 一种新酚嗪类抗肿瘤抗生素，本抗生素的产生菌株已保藏在中国典型培养物保 藏中心；地址：中国.武汉；保藏日期：2013年12月29日；保藏登记入册编号为 CCTCC No. M2013727 ;通过培养一株分离自云南西双版纳药用植物组织内的链霉菌菌株 )?Μ R4,再对其发酵产物进行分离纯化，得到本抗肿瘤抗生素；本抗肿 瘤抗生素是分子式为C25H16N 4O4，分子量为436的化合物，该化合物具有如下结构：
【权利要求】
1. 一种新酚嗪类抗肿瘤抗生素的制备方法，其特征是该方法包括如下步骤： (1) 菌种液体种子培养： ①液体种子培养基的制备：取酵母膏2. (Γ6. Og、葡萄糖2. (Γ6. Og、麦芽膏3. (Γ7. Og、 复合维生素2.5?4.5 11^、加水至10001111，？!17.2，120°(：灭菌301^11;@发酵：将菌株打皿 R4接种到灭菌后的培养基中，28° C下于转速为19(Γ250转/分钟的摇床上摇瓶发酵2天 (2) 菌种发酵培养： ①发酵培养基的制备：取淀粉20. (Γ30. Og、牛肉膏I. (Γ5. Og、葡萄糖0. 5~1. 5g、酵母 膏 3.0?7.0g、蛋白胨 L0?5.0g、CaC03 2.0?6.0g、加水至 1000ml，pH 7.0，120。C灭菌 30min ;②发酵：将上述方法（1)中得到的菌株ΠΜ R4种子液加到灭菌后的发酵培养基中，加菌种 量为发酵培养基重量的10 %，28° C下于转速为19(Γ250转/分钟的摇床上摇瓶发酵6~8 天； (3) 发酵液处理： ①发酵液经250(Γ3500转/分钟离心，离心时间为15?25分钟；②以等体积乙酸乙醋 萃取发酵上清液:Γ5次，回收乙酸乙醋，菌丝体用丙酮浸泡并超声破碎，回收丙酮，合并二 部分提取物，得到具有活性部位的棕褐色膏状物；③进行硅胶柱层析，以三氯甲烷：甲醇 40 :1至1 :1梯度洗脱，收集含有该化合物的组分，回收溶剂，得到粗品一种抗肿瘤抗生素 将粗品一种抗肿瘤抗生素依次进行甲醇凝胶及三氯甲烷：甲醇30 :1硅胶柱层析，回 收溶剂，得到一种抗肿瘤抗生素较纯品；⑤将一种抗肿瘤抗生素较纯品进行甲醇凝胶柱层 析，回收溶剂，得到一种抗肿瘤抗生素纯品，所述抗肿瘤抗生素的结构为：
2. 根据权利要求1所述的一种新酚嗪类抗肿瘤抗生素的制备方法，其特征是所述的 酵母膏为4. 0g、葡萄糖为4. 0g、麦芽膏为5. 0g、复合维生素为3. 5mg。
3. 根据权利要求1所述的一种新酚嗪类抗肿瘤抗生素的制备方法，其特征是所述的 淀粉为24. 0g、牛肉膏为3. 0g、葡萄糖为I. 0g、酵母膏为5. 0g、蛋白胨为3. OgXaCO3S 4. 0g。
4. 根据权利要求1所述的一种新酚嗪类抗肿瘤抗生素的制备方法，其特征是所述的 摇床转数为220转/分钟，所述发酵时间为7天。
【文档编号】C12R1/465GK104212852SQ201410409077
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年8月20日 优先权日:2014年5月9日
【发明者】李一青, 戎贺, 赵立兴, 徐丽华 申请人:云南大学