肌醇检验接种菌悬液制备改良方法
【专利摘要】本发明提出一种肌醇检验接种菌悬液制备改良方法，包括步骤：A、复苏肌醇接种菌得到复苏菌种；B、将复苏菌种接种至肌醇测定培养基液中培养，得到接种菌基液；C、对接种菌基液进行吸光度检测，取吸光度为0.2～0.4的接种菌基液进行后续步骤；D、取接种菌基液于无菌离心管中，经离心、清洗后，加入0.9%的无菌盐水，震荡混匀制备成浓菌悬液；选取适量浓菌悬液加入到0.9%的无菌盐水中，控制浓度在0.55-0.65麦氏浊度范围内,得到接种菌悬液；E、取接种菌悬液用于检验肌醇含量。本发明步骤C中测定的吸光度大于0.4的接种菌基液取代步骤B的复苏菌种再次进行步骤B至E。本发明具有容易操作、准确度高的特点。
【专利说明】肌醇检验接种菌悬液制备改良方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及肌醇含量的测定方法，具体是食品和乳品中肌醇含量的微生物测定 法。
【背景技术】
[0002] 现有利用微生物测定肌醇含量的方法，主要包括以下步骤：1、复苏肌醇接种菌， 得到复苏菌种；2、将复苏菌种转接到新配制的肉汤或斜面培养基上，于规定的温度培养 16h?24 h ;3、直接取肉汤培养物于无菌离心管中，或取斜面培养物于装有0. 9%的无菌盐 水离心管中进行离心、清洗、加入lmLO. 9%的无菌盐水，震荡混匀制备成浓菌悬液；选取适 量浓菌悬液加入到10mL0. 9%的无菌盐水中，制备接种菌悬液，控制浓度在0. 55-0. 65麦氏 浊度范围内；4、最后取接种菌悬液用于制作肌醇标准曲线及检验肌醇含量。
[0003] 现有的这种肌醇测定法，菌种质量至关重要，由于肌醇接种菌体内积蓄一定量的 肌醇，进而干扰了微生物的正常生长，使测定结果稳定性较差，特别是当待测物中该肌醇含 量本来就少时，甚至出现标准曲线的梯度不明显、高浓度肌醇标准工作液的吸光值低于低 浓度肌醇标准工作液的吸光度的反常现象，制作的标准曲线的相关性差或无法完成标准曲 线的制作，直接影响检验结果的准确性。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提出一种肌醇检验接种菌悬液制备改良方法，其具有容易操作、 准确度高的特点。
[0005] 本发明的目的可通过以下技术方案实现： 肌醇检验接种菌悬液制备改良方法，包括以下步骤。
[0006] 步骤A、复苏肌醇接种菌，得到复苏菌种。
[0007] 步骤B、制备接种菌基液。
[0008] 将步骤A的复苏菌种接种至肌醇测定培养基液中继续培养，得到接种菌基液。
[0009] 步骤C、筛选接种菌基液。
[0010] 使用分光光度计对步骤B的接种菌基液进行吸光度检测，取吸光度为0. 2?0. 4 的接种菌基液进行后续步骤。
[0011] 步骤D、制备接种菌悬液。
[0012] 取步骤C的接种菌基液于无菌离心管中，离心去掉上清液，吸取沉淀部分至无菌 离心管中，加入无菌盐水进行清洗，离心去掉上清液，重复清洗2?3次，再加入无菌盐水， 震荡混匀制备成浓菌悬液；选取适量浓菌悬液加入到无菌盐水中，控制浓度在〇. 55?0. 65 麦氏浊度范围内，得到接种菌悬液。
[0013] 步骤E、取步骤D的接种菌悬液用于制作肌醇标准曲线及检验肌醇含量。
[0014] 优化方案有：对步骤C中测定的吸光度大于0. 4的接种菌基液进行步骤B，将步骤 B中的复苏菌种改为接种菌基液。
[0015] 本发明根据微生物的生长消耗自身物质的原理，将肌醇接种菌在肌醇测定培养基 中进行饥饿培养，使菌体在没有待测肌醇的生长环境下生长，消耗掉自身体内积蓄的该肌 醇，避免了其自身含有的肌醇对测定结果的影响。
[0016] 本发明具有以下突出的实质性特点和显著的进步：通过本发明的测定方法绘制的 标准曲线相关系数大，标准曲线呈良好的线性相关，肌醇含量测定结果准确性高。
【专利附图】
【附图说明】
[0017] 图1为本发明的测定流程示意图。
[0018] 图2为本发明的接种菌基液吸光度为0. 4时制作的标准曲线图。
[0019] 图3为本发明的接种菌基液吸光度为0. 2时制作的标准曲线图。
[0020] 图4为本发明的接种菌基液吸光度为0. 6时制作的标准曲线图。
[0021] 图5为采用国标GB5413. 25- 2010中的肌醇微生物检测法制作的标准曲线图。
【具体实施方式】
[0022] 以下实施例以微生物法检验食品中肌醇的含量为例，结合附图对本发明作进一步 说明。
[0023] 实施例1 参考图1，利于微生物对食品中肌醇的含量进行检测的方法，包括以下步骤。
[0024] 步骤A、复苏肌醇接种菌，得到复苏菌种。
[0025] 所述肌醇接种菌为葡萄汁酵母菌，将葡萄汁酵母菌活化后接种到麦芽浸粉琼脂斜 面培养基上，30°C下培养16h后，再转接2-3代后得到复苏菌种。
[0026] 步骤B、制备接种菌基液。
[0027] 将步骤A的复苏菌种接种至肌醇测定培养基液中继续培养，30°C下培养16h后，得 到接种菌基液，所述肌醇测定培养基液为5mL肌醇测试培养基和5mL水的混合液，肌醇测试 培养基的成分及制备方法参见食品安全国家标准GB5413. 25- 2010《婴幼儿食品和乳品中 肌醇的测定》。
[0028] 步骤C、对接种菌基液进行筛选。
[0029] 使用分光光度计对步骤B的接种菌基液进行吸光度检测，以5mL肌醇测试培养基 和5mL蒸馏水的混合液为空白，以5mL接种菌基液和5mL蒸馏水的混合液为检测对象，检测 步骤B的接种菌基液的吸光度为0. 6。
[0030] 取该吸光度为0. 6的接种菌基液再次进行上述步骤B，将上述步骤B中的复苏菌种 改为吸光度为〇. 6的接种菌基液，取经步骤B再次培养后的接种菌基液进行吸光度测定，测 得经步骤B再次培养后的接种菌基液的吸光度为0. 4。
[0031] 步骤D、制备接种菌悬液。
[0032] 取步骤B中吸光度为0. 4的接种菌基液于无菌离心管中，3000r/min离心5分钟， 去掉上清液，吸取沉淀部分至无菌离心管中，加入〇. 9%的无菌盐水进行清洗，又3000r/min 离心3分钟，去掉上清液，重复清洗2?3次，再加入0. 9%的无菌盐水，震荡混匀制备成浓 菌悬液；选取适量浓菌悬液加入到〇. 9%的无菌盐水中，控制浓度在0. 55?0. 65麦氏浊度 范围内，得到接种菌悬液。
[0033] 步骤E、取步骤D的接种菌悬液用于制作肌醇标准曲线及检验肌醇含量。
[0034] 步骤E1、制作标准曲线。
[0035] 准备10个标准组培养管，按表1向每个标准组培养管内加入不同体积的蒸馏水、 肌醇标准工作液和肌醇测定培养基，冷却，向每个标准组培养管内加入50 μ L接种菌悬液 接种，培养后，通过分光光度计测定标准组培养管内不同量的肌醇的吸光度，测定结果见表 2,其中S2的吸光度值以S1为参比液，S3?S10的吸光度值以S2为参比液，以肌醇标准工 作液的肌醇量为横坐标，吸光度为纵坐标制作标准曲线，标准曲线见图2。
【权利要求】
1. 肌醇检验接种菌悬液制备改良方法，其特征在于包括以下步骤： 步骤A、复苏肌醇接种菌，得到复苏菌种； 步骤B、制备接种菌基液； 将步骤A的复苏菌种接种至肌醇测定培养基液中继续培养，得到接种菌基液； 步骤C、对接种菌基液进行筛选； 使用分光光度计对步骤B的接种菌基液进行吸光度检测，取吸光度为0. 2?0. 4的接 种菌基液进行后续步骤； 步骤D、制备接种菌悬液； 取步骤C的接种菌基液于无菌离心管中，离心去掉上清液，吸取沉淀部分至无菌离心 管中，加入无菌盐水进行清洗，离心去掉上清液，重复清洗2?3次，再加入无菌盐水，震荡 混匀制备成浓菌悬液；选取适量浓菌悬液加入到无菌盐水中，控制浓度在〇. 55?0. 65麦氏 浊度范围内，得到接种菌悬液； 步骤E、取步骤D的接种菌悬液制作肌醇标准曲线及检验肌醇含量。
2. 根据权利要求1所述的肌醇检验接种菌悬液制备改良方法，其特征在于：在步骤C 中，对吸光度大于〇. 4的接种菌基液进行步骤B，将步骤B中的复苏菌种改为接种菌基液。
【文档编号】C12R1/645GK104232733SQ201410429536
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年8月27日 优先权日:2014年8月27日
【发明者】肖剑, 刘冬豪, 戚平, 梁智安, 易云婷 申请人:广州市食品检验所