一种用于五种细菌的复合增菌培养基及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌复合增菌培养基及其制备方法，该培养基组分包括：牛脑浸出粉5-10份，牛心浸出粉5-15份，蛋白胨5-15份，氯化钠2.5-7.5份，葡萄糖1-3份，磷酸氢二钠1.5-3.5份，甘露醇1-3份，丙酮酸钠1-3份，甘氨酸1-3份，七叶苷1-3份，蒸馏水1000份，pH值为7.2-7.5。制备方法包括：按照配方将各成分加入蒸馏水中，搅拌溶解，调节pH值，高压灭菌。五种细菌是我国食品卫生标准中需检测的主要致病菌。使用本发明所述复合增菌培养基，能够实现五种致病菌的快速增殖。增菌16小时，菌体浓度可由1CFU/mL增至106CFU/mL~109CFU/mL，可直接用于多重PCR、基因芯片、微流控芯片等高通量检测，完成上述五种病原菌的筛查。
【专利说明】一种用于五种细菌的复合增菌培养基及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于致病菌的前增菌培养基，特别是涉及到一种同时对沙门氏菌、金黄色 葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌复合增菌的培养基及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 食源性致病菌是食物中毒和食源性疾病暴发的重要因素，是食品安全的重要风险 隐患。据世界卫生组织（World Health Organization, WHO)报道，全球每年发生腹泻病的 病例数高达1. 5亿，其中70%病例与各种致病性微生物污染的食品有关。我国研究资料显 示，微生物病原引起的食源性疾病占46. 4%，严重危及人们的健康，造成重大经济损失。沙门 氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌是食源性疾病的主要 致病菌，是食品安全风险预测和危害评估中重要监测项目。
[0003] 目前我国食品安全标准检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯 特菌和副溶血性弧菌时，需要经过前增菌、选择性增菌、分离培养、生化鉴定、和血清学鉴定 等步骤。培养基品种繁多，操作麻烦，工作量大，耗时长，无法满足现代检测快速、高通量的 要求，给食品生产企业和质检单位造成较大压力。所以在食品安全问题日益被人们所重视 的今天，研制出满足快速检测的多种致病菌复合增菌培养基迫在眉睫。
[0004] 关于多种致病菌复合增菌培养基的研究，近年来已受到国内外研究人员的广泛关 注。Hyochin等研制的选择性营养肉汤（SEL)，可同时富集沙门氏菌、大肠埃希氏菌和单 增李斯特菌，当接种量为l〇 2CFU/mL，经过12h复合培养后，菌体浓度可达到106?108CFU/ mL，可直接应用于多重 PCR 扩增（Hyochin Kim and Arun Κ· Bhunia.SEL, a Selective Enrichment Broth for Simultaneous Growth of Salmonella enterica， Escherichia coli0157H7，and Listeria monocytogenes[J]. Applied and Environmental Microbiol ogy，2008, 74(15) :4853-4866.);翁思聪等研制的选择性增菌肉汤（SSSV)，可同时富集沙 门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌，当接种量为10 2CFU/mL，经过8h复合培 养后，菌体浓度可达到1〇5?106CFU/mL，可直接应用于多重PCR扩增(翁思聪，朱军莉，冯 立芳，励建荣.1种选择性富集沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌共增 菌培养基SSSV研究[J].中国食品学报2013, 13(1) :19-28.);刘园园等研制的选择性增菌 肉汤（SSL)，可同时培养沙门氏菌、单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌，当接种量为10 2CFU/ mL，经过24h复合培养后，菌体浓度可达到107?108CFU/mL，可直接应用于荧光PCR扩增(刘 园园，肖性龙，余以刚，陈谷，李晓凤，唐语谦，吴晖.一种能同时富集沙门氏菌、金黄色 葡萄球菌和单增李斯特菌的培养基[J].微生物学报，2009, 49 (10) :1389 - 1396.)。 此外，还有UPB (通用预增菌肉汤)、BPW(缓冲蛋白胨水）、NB (营养肉汤）等通用培养基，可 同时增殖多种细菌，但还没有适用于沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯 特菌和副溶血性弧菌五种致病菌且组分简单、制备简便的复合增菌培养基。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种可同时培养沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏 菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌复合增菌的培养基，适用于多重PCR、基因芯片、微流控芯 片等高通量检测，用于所述五种病原菌的筛查。
[0006] 本发明的目的通过如下技术方案实现： 一种沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌复合增 菌培养基，以质量份数计，其原料配方组成为：牛脑浸出粉5-10份，牛心浸出粉5-15份，蛋 白胨5-15份，氯化钠2. 5-7. 5份，葡萄糖1-3份，磷酸氢二钠1. 5-3. 5份，甘露醇1-3份，丙 酮酸钠1-3份，甘氨酸1-3份，七叶苷1-3份，蒸馏水1000份，pH值为7. 2-7. 5。
[0007] -种沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌复 合增菌培养基，以质量份数计，其优选配方为：牛脑浸出粉7. 5份，牛心浸出粉10份，蛋白 胨10份，氯化钠5份，葡萄糖2份，磷酸氢二钠2. 5份，甘露醇2份，丙酮酸钠2份，甘氨酸 2份，七叶苷2份，蒸馏水1000份，pH值为7. 4。
[0008] 本发明的又一个目的是提供一种沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增 李斯特菌和副溶血性弧菌复合增菌培养基的制备方法，所述方法由以下步骤组成： (1) 按照配方将牛脑浸出粉、牛心浸出粉、蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、磷酸氢二钠、甘露 醇、丙酮酸钠、甘氨酸和七叶苷加至蒸馏水中，搅拌溶解； (2) 用10 mol/L的NaOH溶液调节pH值至7. 2-7. 5 ; (3) 121°C 高压灭菌 15-20min，4°C 保存。
[0009] 本发明提供一种沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶 血性弧菌菌复合增菌培养基及其制备方法，所述五种细菌在该复合培养基中，能够实现同 时快速增殖。增菌16小时，菌体浓度可由1 CFU/mL增至106 CFU/mL~109 CFU/mL，即可直接 用于多重PCR、基因芯片、微流控芯片等高通量检测，用于上述五种病原菌的筛查。
【具体实施方式】
[0010] 实施例1 称取牛脑浸出粉5g，牛心浸出粉15g，蛋白胨5g，氯化钠2. 5g，葡萄糖3g，磷酸氢二钠 1. 5g，甘露醇lg，丙酮酸钠 lg，甘氨酸3g，七叶苷lg，蒸馈水1000ml，搅拌溶解后，用10 mol/ L的NaOH溶液调节pH值至7. 2,121°C高压灭菌15min，4°C保存。
[0011] 将菌体浓度均为1〇9 CFU/mL的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李 斯特菌和副溶血性弧菌培养液分别稀释1〇7倍，然后分别取100 μ?，接入10 mL制备好的用 于沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌复合增菌培养 基，使培养基中各菌体浓度为1 CFU/mL，37°C培养16h，取增菌培养后的增菌液100 μ?，适当 稀释后分别涂布到沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧 菌选择性培养基平板，进行分离培养。根据五种病原菌在平板上的特征菌落进行计数，结果 见表1。
[0012] 表1复合增菌培养基增菌效果
【权利要求】
1. 用于沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌复 合增菌的培养基，其特征在于，以质量份数计，其原料配方组成为：牛脑浸出粉5-10份，牛 心浸出粉5-15份，蛋白胨5-15份，氯化钠2. 5-7. 5份，葡萄糖1-3份，磷酸氢二钠1. 5-3. 5 份，甘露醇1-3份，丙酮酸钠1-3份，甘氨酸1-3份，七叶苷1-3份，蒸馏水1000份，pH值 为 7. 2-7. 5。
2. 根据权利要求1所述的用于沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯 特菌和副溶血性弧菌复合增菌的培养基，其特征在于：以质量份数计，其配方为牛脑浸出粉 7. 5份，牛心浸出粉10份，蛋白胨10份，氯化钠5份，葡萄糖2份，磷酸氢二钠2. 5份，甘露 醇2份，丙酮酸钠2份，甘氨酸2份，七叶苷2份，蒸馏水1000份，pH值为7. 4。
3. 根据权利要求1、2所述的用于沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯 特菌和副溶血性弧菌复合增菌的培养基的配制方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 按照配方将牛脑浸出粉、牛心浸出粉、蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、磷酸氢二钠、甘露 醇、丙酮酸钠、甘氨酸和七叶苷加至蒸馏水中，搅拌溶解； (2) 用10 mol/L的NaOH溶液调节pH值至7. 2-7. 5 ; (3) 121°C 高压灭菌 15-20min，4°C 保存。
【文档编号】C12R1/42GK104195086SQ201410450436
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年8月27日 优先权日:2014年8月27日
【发明者】张岩, 刘铭, 李云, 葛少林, 邢婉丽 申请人:博奥生物集团有限公司, 清华大学, 广东粤检生物科技有限公司